石心泉
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 供职机构：国家人口计生委科学技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LM23基因沉默引起大鼠睾丸生精细胞凋亡被引量：3
- 2010年
- 目的研究LM23基因敲低后生精细胞的凋亡状况及与凋亡相关基因表达改变。方法用TUNEL方法检测睾丸细胞的凋亡情况,用大鼠全基因组表达谱芯片检测LM23基因敲低后凋亡相关基因的表达改变。结果 TUNEL结果显示,LM23基因敲低侧大鼠睾丸生精小管内大量生精细胞发生凋亡。大鼠全基因组表达谱芯片分析结果显示,许多促凋亡基因如Bcl-2家族的促凋亡基因表达上调,而抗凋亡基因如Faf1和Zfp91基因的表达明显下调。结论敲低大鼠的LM23基因,启动了Bcl-2家族介导的线粒体凋亡途径,引发了生精细胞发生大量凋亡。
- 石心泉贾孟春刘美玲
- 关键词：生精细胞细胞凋亡CASPASE-3
- 大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究被引量：5
- 2005年
- 目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。
- 成毅明石心泉于和鸣吴燕婉贾孟春
- 关键词：双向电泳精子发生质谱分析
- 体外诱导小鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化相关基因表达的研究被引量：3
- 2006年
- 目的体外培养小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导分化为成骨细胞,定量分析其骨生成关键标志基因的表达水平。方法体外培养小鼠BMSCs 7、14、21 d,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPIN)和骨唾液酸蛋白(BSP)基因的表达水平。结果小鼠BMSCs体外稳定增殖和分化,Ⅰ型胶原培养14 d和21 d mRNA水平分别是培养7 d时的0．75±0．04倍和(0．34±0．03)倍;ALP、OPN和BSP基因表达水平随着培养时间延长而上升,其中培养21 d时的ALP、OPN和BSP mRNA水平分别是培养7 d时的(19．70±2．36)倍、(150．12±9．31)倍和(7．73±0．58)倍。结论荧光定量RT-PCR可以灵敏地检测成骨细胞关键标志基因表达水平,随着培养时间延长,Ⅰ型胶原的表达水平逐渐下降,而ALP、OPN和BSP的表达水平显著上升。
- 王琳刘德瑜石心泉裴开颜李东贾孟春
- 关键词：骨髓基质干细胞
- 兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用被引量：2
- 2009年
- 目的制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体,对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用。方法利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列。应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274～291个氨基酸多肽(接近C端),经C18的RP-HPLC纯化后,通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价。通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位。结果化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274～291个氨基酸多肽,纯化后两条多肽纯度都达到90%以上,符合免疫用抗原标准。将多肽与KLH交联,用于免疫动物。经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1:64 000和1:128 000。应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核。Western blot研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白。结论所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究。LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持。
- 成毅明刘美玲石心泉王介东贾孟春
- 关键词：合成肽精子发生多克隆抗体
- Polycomb基因家族在大鼠精子发生过程中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的检测大鼠精子发生不同阶段细胞中Polycomb-group(Pc-G)家族在mRNA水平上表达是否有差异。方法提纯大鼠精子发生过程中的精原细胞、精母细胞、圆形精子细胞以及支持细胞,用荧光定量PCR方法检测Pc-G家族基因mRNA表达量。结果Pc-G基因家族中Ezh2、Eed、Bmi-1在精子发生中后期高表达;在各生精细胞中,YY1基因表达量低于支持细胞。结论Pc-G基因家族在精子发生各阶段细胞中特征性表达,与精子发生具有相关性,可能对精子发生分化和维持遗传稳定性都有重要的作用。
- 汪卓群鲁爽金孝华贾孟春石心泉马旭
- 关键词：精子发生
- 植物类雌激素杨梅素对结肠癌细胞系RKO生长的影响被引量：2
- 2008年
- 目的检测一种植物类雌激素杨梅素对人结肠癌细胞系RKO生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测杨梅素对RKO细胞系生长的影响;流式细胞仪技术检测杨梅素对细胞周期的影响;半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定杨梅素对抑癌基因p16INK4a表达的影响。结果MTT法显示杨梅素处理组对结肠癌细胞系生长有明显抑制作用;流式细胞仪分析结果显示,经杨梅素处理后RKO细胞周期明显阻滞在G0/G1期;RT-PCR结果显示杨梅素恢复了RKO细胞系p16INK4a的转录。结论杨梅素对RKO细胞系生长有明显的抑制作用,杨梅素可能通过上调抑癌基因p16INK4a的表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期。
- 陆彩玲柏珊珊石心泉马旭
- 关键词：植物雌激素杨梅素细胞周期P16INK4A
- Spyda基因过表达转基因小鼠品系的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立Spyda基因过表达转基因小鼠品系用于深入研究Spyda基因的功能。方法利用Gateway技术构建Spyda表达载体,通过DNA显微注射的方式获得Spyda基因过表达的首建鼠。首建鼠与野生型鼠杂交,所得子代中的阳性鼠同窝交配,已传3代以后的阳性小鼠经SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测外源基因的起始模板量,通过与杂合子比较来预测小鼠的基因型,再用传统育种方式验证SYBR Green实时荧光定量PCR的结果。结果获得7只首建鼠,通过与野生型鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,传至第3代,经实时荧光定量PCR方法筛选出4只纯合子的小鼠,经测交验证,其与正常小鼠交配所生的后代均为阳性,证明实时定量PCR的结果是正确的。建立了2个独立的Spyda转基因小鼠纯合子品系。结论建立了稳定遗传的纯合子Spyda基因过表达转基因小鼠品系,可作为工具鼠进一步深入研究Spyda基因的功能。
- 张瑶楠丁宁石心泉贾孟春刘美玲
- 关键词：转基因小鼠实时荧光定量PCR纯合子
- 一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的方法被引量：1
- 2013年
- 目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体(AFP-McAb)杂交瘤细胞系的方法。方法以常规和改良两种方式同时免疫8～12周Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合并行次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。用间接酶链免疫吸附试验法(ELISA)筛选阳性克隆株,并建立细胞系。结果在较短时间内,改良法能获得高效价的免疫抗体,与常规免疫法相比有极显著差异(P<0.01),同时改良法的细胞融合率和抗体阳性率也显著高于常规免疫法(P<0.001)。筛选获得的高效分泌抗人AFP-McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。结论新的改良疗法优化了常规的McAb制备中动物免疫程序,并能成功筛选出AFP-McAb杂交瘤细胞系。
- 丁宁石心泉郭永张瑶楠邹检平
- 关键词：甲胎蛋白杂交瘤单克隆抗体
- 质谱法分析大鼠精子发生过程中组蛋白H1变异体的多样性
- 2009年
- 目的为探究连接组蛋白H1在精子发生过程染色体重构中的功能,了解一共有多少种连接组蛋白H1参与各期生精细胞的染色体的构建。方法分离高纯度的SD大鼠的各期生精细胞,提取组蛋白,应用SDS-PAGE分离组蛋白的各组分,组蛋白(H1)经过蛋白酶(Glu-c和Arg-c)酶切,应用质谱进行检测。结果鉴定了组蛋白H1的体细胞亚型(H1.1-H1.5)和睾丸特异的连接组蛋白亚型(H1t)。组蛋白H1t分别表达在精原细胞,精母细胞和圆形精子细胞中。结论大鼠精子发生过程中,其主要连接组蛋白H1的种类是:H1.1-H1.5和H1t。
- 鲁爽程露阳汪卓群李欣石心泉贾孟春马旭
- 关键词：精子发生液质联用
- 磷脂酰乙醇胺结合蛋白在精子发生过程中的特异表达被引量：2
- 2006年
- 目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白,进行双向电泳。对所得到的双向电泳图谱进行分析,找出差异蛋白。对挑选出的差异蛋白做质谱分析。结果发现磷脂酰乙醇胺结合蛋白(RKIP)在这3种不同细胞的表达上有明显差异。在双向电泳图谱中,RKIP在圆形精子细胞中表达量较高,并且形成分子量相同但等电点不同的并排4个蛋白质点；而在A型精原细胞和粗线期精母细胞的双向电泳图中,RKIP仅为一个单独的蛋白质点。结论RKIP在精子发生过程中有明显的差异表达,可能对精子发生起重要调节作用。
- 成毅明于和鸣石心泉贾孟春
- 关键词：精子发生
