章帆 作品数:6 被引量:0 H指数:0 供职机构: 重庆医科大学检验医学院 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用 2011年 目的探讨有丝分裂期检查点蛋白BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用。方法设计并合成针对BubR1基因的特异性干扰RNA(siRNA)片段,连接入穿梭质粒后,包装成腺病毒(Ad-BubR1-siRNA),感染MCF-7细胞,采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot法评价BubR1干扰对MCF-7细胞BubR1基因和蛋白表达的影响。分别通过cck8试验、染色体计数分析、细胞集落生成试验、Hochest染色和细胞划痕试验评价干扰BubR1后,MCF-7细胞在紫杉醇作用下增殖、染色体稳定性、凋亡及迁移能力等生物学功能。结果重组腺病毒的滴度为1010 pfu/ml,其能有效抑制BubR1基因在mRNA和蛋白水平的表达。干扰BubR1表达后,MCF-7细胞在紫杉醇作用下表现为增殖和迁移能力增强,染色体不稳定性增加,集落生成能力增强,凋亡能力下降。结论下调BubR1基因可能导致乳腺癌细胞MCF-7对紫杉醇的耐药性增强。 王稣佳 胡敏 章帆 施琼 罗进勇 周兰 张彦 翁亚光关键词:乳腺肿瘤 BUBR1 紫杉醇 着丝粒蛋白-E野生型基因沉默对人结肠癌细胞HCT116的生物学作用研究 目的:利用RNA干扰技术下调着丝粒蛋白E野生型(wild typecentromere protein E,CENP-EWT)基因的表达,观察其对结肠癌HCT116细胞的生物学作用。 方法:将细胞分为以下3组:空白对照... 章帆关键词:RNA干扰技术 结肠癌 HCT116细胞 生物学作用 下调CENP-E对乳腺癌MCF-7细胞的影响 2012年 目的:探讨有丝分裂检查点蛋白着丝粒蛋白-E(CENP-E)基因在肿瘤发生发展中的作用。方法:利用shRNA下调CENP-E基因的表达,分别用巢式PCR和Western blot检测CENP-E mRNA和蛋白的表达;MTT检测CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖变化;流式细胞术检测CENP-E下调后对MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell试验检测MCF-7细胞的迁移和侵袭能力变化;间接免疫荧光检测细胞内CENP-E蛋白和有丝分裂情况。结果:shRNA能有效抑制CENP-E mRNA和蛋白的表达。MTT结果显示CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖能力减弱(P<0.05);流式细胞术显示下调CENP-E后能促进MCF-7细胞的凋亡;间接荧光结果显示CENP-E干扰后MCF-7细胞内CENP-E蛋白减少并伴有核分裂异常;Transwell试验显示CENP-E干扰组细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.05)。结论:下调部分CENP-E的表达能抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞的凋亡,增强MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。 湛晓琴 胡敏 宋培培 章帆 刘晨 施琼 翁亚光关键词:非整倍体 CENP-E 肿瘤 癌基因c-myc对食管癌BubR1的调控 2013年 目的探讨癌基因c-myc对食管癌有丝分裂检查点效应蛋白BubR1的调控作用。方法将Bub1b基因启动子亚克隆至载体pSEAP2-Basic中,构建重组质粒pSEAP2-Bub1b-P2000,在Lipofectamine 2000的介导下,分别转染过表达c-myc的HEK-293细胞(经Ad-c-myc感染)和ECA-109细胞;转染6 h后,经c-myc抑制剂10058-F4作用ECA-109细胞。SEAP化学发光法检测各组细胞的ALP活性;采用RT-PCR和Western blot法分别检测抑制c-myc表达的ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平。结果重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定构建正确;重组质粒转染过表达c-myc的HEK-293细胞和抑制c-myc表达ECA-109细胞的ALP活性明显升高(P<0.000 1);抑制c-myc表达可明显下调ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论癌基因c-myc对食管癌细胞中BubR1的表达有正调控作用,为进一步研究BubR1在食管癌中发挥的作用奠定了基础。 宋培培 胡敏 湛晓琴 章帆 施琼 翁亚光关键词:C-MYC基因 食管癌 骨形态发生蛋白9对食管鳞状细胞癌细胞的抑制作用 2013年 目的 探讨骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic proteins 9,BMP 9)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭及细胞周期的影响。方法 用AdGFP和AdBMP 9分别感染3株食管鳞状细胞癌细胞株ECA109、KYSE150和KYSE180,并设不感染病毒的3种细胞作为对照,采用RT-PCR法检测AdBMP 9感染的3株细胞中BMP 9基因mRNA的转录水平,MTT法检测病毒感染细胞0~96h各组细胞的增殖活力,平板克隆法检测各组细胞的克隆形成能力,划痕试验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室试验检测各组细胞的侵袭能力,并对3组ECA109细胞进行细胞周期的检测。结果 AdBMP 9感染的3株细胞中BMP 9基因mRNA的转录水平均明显提高。与AdGFP感染和未感染病毒的细胞相比,3种细胞在过表达BMP 9后,增殖活力明显降低(P〈0.05);细胞克隆形成能力均下降(下降率达70%以上),且克隆细胞团明显变小;细胞迁移和侵袭能力均下降;AdBMP 9感染的ECA109细胞处于G1期的细胞比例明显上升,S期比例明显下降(P〈0.05)。结论 BMP 9可明显抑制食管鳞癌细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭能力,并将细胞周期阻滞于G1期。 胡敏 宋培培 湛晓琴 吕自兰 章帆 翁亚光关键词:食管鳞状细胞癌 野生型着丝粒蛋白-E基因沉默对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响 2012年 目的利用RNA干扰技术下调野生型着丝粒蛋白E(Wild type centromere protein E,CENP-EWT)基因的表达,观察CENP-EWT基因沉默对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法将HCT116细胞分为空白对照组、空载体转染组和CENP-EWT shRNA转染组,转染48 h后,采用巢式PCR检测细胞中CENP-EWT基因mRNA的转录水平;MTT法检测细胞的增殖活力;Hoechst法检测细胞的凋亡比例;Transwell小室试验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和空载体转染组相比,CENP-EWT shRNA转染组可有效抑制CENP-EWT基因的转录水平(P<0.05);CENP-EWT shRNA转染组细胞的增殖活力明显下降(P<0.05);细胞凋亡比例明显增加(P<0.01),细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论 CENP-EWT基因沉默能够抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡,但同时能增强细胞的迁移和侵袭能力。 章帆 湛晓琴 宋培培 胡敏 施琼 翁亚光关键词:野生型 HCT116细胞 结肠癌