肖丹
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 微小隐孢子虫Cp16基因真核表达载体的构建及其免疫保护性研究被引量：4
- 2010年
- 【目的】构建微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因Cp16的真核表达载体pVAX1-Cp16,并检测其对小鼠的免疫保护效果。【方法】用PCR方法扩增微小隐孢子虫Cp16基因,构建其真核表达载体pVAX1-Cp16,并用脂质体介导法将其转染Hela细胞,用间接免疫荧光技术、SDS-PAGE及Western-blot检测Cp16蛋白在转染细胞中的表达情况;分别用真核表达载体pVAX1-Cp16、pVAX1空载体及PBS肌肉注射免疫BAILB/c小鼠,共免疫3次,检测血清IgG抗体水平及CD4+和CD8+T细胞亚群的变化,并用微小隐孢子虫卵囊感染免疫小鼠(剂量为1×106个/只),研究真核表达载体pVAX1-Cp16对隐孢子虫感染小鼠的免疫保护作用。【结果】成功构建了pVAX1-Cp16真核表达载体;Western-blot和间接免疫荧光检测结果显示,Cp16基因可以在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。pVAX1-Cp16免疫小鼠(试验组)血清中抗体水平及CD4+与CD8+T细胞数目比值升高,与各对照组(pVAX1和PBS对照组)相比差异显著(P<0.05)。各组小鼠经口感染微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比,卵囊排出量均减少了63.97%,持续排出卵囊时间缩短了2d。【结论】构建了微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因Cp16的真核表达载体pVAX1-Cp16,其能刺激机体产生一定的免疫保护作用。
- 肖丹殷驰李建华宫鹏涛张西臣
- 关键词：隐孢子虫真核表达质粒免疫保护性
- 微小隐孢子虫Cp735基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2011年
- 采用PCR方法从微小隐孢子虫基因组中扩增Cp735基因。与pMD-18T载体连接后,挑取阳性重组子测序分析。用基因重组技术将Cp735基因克隆入原核表达载体pET-28a中,构建Cp735基因的重组原核表达载体pET28a-Cp735。将pET28a-Cp735在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果表明:得到了在大肠杆菌中高效表达的重组蛋白,分子质量大小约为26 kD,并且具有反应原性。
- 范大为肖丹张西臣宫鹏涛杨举李建华
- 关键词：微小隐孢子虫克隆原核表达
- 利用间接荧光抗体技术对微小隐孢子虫Cp16蛋白进行抗原定位被引量：1
- 2010年
- Cp16基因是从核糖体展示文库中筛选的微小隐孢子黏附相关基因,为了确定Cp16蛋白是否是微小隐孢子虫卵囊或子孢子表面抗原,构建了Pet-28 a-Cp16原核表达载体,将其转化至BL21大肠杆菌中进行诱导表达,经纯化获得重组蛋白Cp16。将纯化的重组蛋白免疫BAILB/c小鼠,ELISA方法测定IgG抗体滴度。利用间接荧光抗体技术进行抗原定位的初步研究。结果表明:隐孢子虫卵囊表面及子孢子表面富含Cp16蛋白。
- 肖丹殷驰李建华宫鹏涛张西臣
- 关键词：隐孢子虫原核表达抗原定位
