胡美茹
- 作品数：90 被引量：236H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- E-选择素突变体的构建和表达
- 1998年
- 从ｐＵＣ１８／Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎＣＤ６２Ｅ）重组质粒，以ＰＣＲ的方法扩增得到Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ突变体ＣＤ６２Ｅ１和ＣＤ６２Ｅ２基因。将其分别插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５的单一ＳｍａⅠ位点，在痘苗病毒真核系统中进行了表达。初步的细胞粘附功能试验结果表明，Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ分子不同结构域的缺失可削弱其粘附能力，为进一步研究Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ公子的结构与功能奠定了基础。
- 胡美茹蔡铀庆孙英勋于鸣裴武红汲言山沈倍奋
- 关键词：E-选择素疫苗病毒突变体
- 蓖麻毒素快速ELISA检测法的建立被引量：7
- 2006年
- 目的:建立蓖麻毒素快速ELISA检测方法。方法:从8株抗蓖麻毒素的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单克隆抗体,用Westernblot和ELISA鉴定、ProteinA纯化、HRP标记,经交叉配伍筛选最佳的抗体组合。结果:建立了蓖麻毒素的快速ELISA检测方法,对蓖麻毒素的最低检出浓度为175ng/L,目视检测最低浓度为625ng/L,整个实验不需仪器可在40min内完成检测。结论:蓖麻毒素快速ELISA检测法为蓖麻毒素生物战剂的快速侦检提供了有效手段。
- 郭建巍沈倍奋冯健男孙瑛勋胡美茹于鸣
- 关键词：蓖麻毒素单克隆抗体快速ELISA
- 三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应被引量：3
- 2012年
- 目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝(台盼蓝)拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基(p65、p50)的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。
- 郝一李译高明董雯胡美茹宋伦
- 关键词：三氧化二砷
- AEN在砷化物促发细胞凋亡反应中的作用及其诱导表达调控机制研究
- 目的:砷是一种广泛存在于自然界的重金属类毒性元素,通常高剂量砷化物暴露主要引发'细胞凋亡'等急性毒性损伤效应。本课题组长期开展'砷化物诱导细胞凋亡反应的急性毒性损伤效应机制'研究工作,并且在砷化物诱导的促细胞凋亡效应机制...
- 邹书仙胡美茹宋伦
- 关键词：砷化物细胞凋亡NF-ΚBP38
- 重组蓖麻毒素A链的融合表达、纯化及活性研究被引量：2
- 2005年
- 目的: 制备有高生物活性的重组蓖麻毒素A链蛋白(RTA). 方法: 在RTA序列的C末端引入KDEL信号肽, 克隆到含有硫氧还蛋白(Trx)的融合表达载体pET32a中, 转入大肠杆菌BL21, 在低温(20℃)下用低浓度(0.4 mmol/L)IPTG诱导重组质粒进行表达.表达上清用钴离子亲和层析柱进行纯化, 20～100 mmol/L咪唑溶液洗脱目的蛋白.纯化蛋白经SDS-PAGE电泳与Western blot鉴定后, 对pUC19质粒进行超螺旋dsDNA裂解研究. 结果: 每升细菌培养物回收约60 mg 的纯化蛋白, 纯度大于90%, Mr约45 000, 且3 μg纯化蛋白即可以对1 μg超螺旋dsDNA产生明显的裂解活性. 结论: 利用pET32a表达系统可以快速获得大量有高生物活性的可溶性RTA-Trx融合蛋白.
- 王顺涛胡美茹郭建巍冯健男沈倍奋
- 人M-07e白血病细胞凋亡过程中激活Caspase-3引起的Bcl-2蛋白酶解与Lyn^(p53/56)激酶失活相关(英文)被引量：4
- 2000年
- 人巨核白血病细胞系M 0 7e的生长严格依赖于GM CSF。在M 0 7e细胞 ,GM CSF受体 (GM CSFR)由两个亚基所组成 :低亲合力的配体特异的α亚基和一个磷酸化的 β亚基 ,后者与lynp53 56 酪氨酸蛋白激酶固定相连。本研究检测了lyn激酶在调节TGF β 1诱导的M 0 7e细胞凋亡过程中的作用。从培养液中去除rhGM CSF首先导致了lyn激酶活性受抑 ,接着发生细胞生长受阻和凋亡。M 0 7e细胞凋亡过程中伴随有大量Bcl 2和Bax蛋白分别被酶解为 2 2kD和 18kD的较小片段。应用特异性的抑制剂 ,发现上述Bcl 2蛋白的变化是循激活的caspase 3(CPP32 )途径发生的 ,后者在M 0 7e细胞中大量表达。Bax蛋白变化的机制尚不清楚。TGF β 1对rhGM CSF刺激的细胞生长具有抑制作用 ,促进M 0 7e细胞凋亡的机制与去除rhGM CSF所致相同 ,包括大量Bcl 2和Bax蛋白被特异酶解和lyn激酶失活。TGF β 1并不影响lyn蛋白和 β链的表达水平 ,也不阻止这两个信号传导元件的相互作用。研究结果表明 ,TGF β 1通过抑制GM CSFR相关的lyn激酶活性而抑制M 0 7e细胞生长并促进凋亡发生。本实验还表明激活的CPP32对Bcl 2蛋白的酶解是与细胞凋亡发生相关的一个自然过程 。
- 张学敏胡美茹兰雨于鸣Ben D-M Chen
- 关键词：BC1-2白血病
- E－选择素cDNA克隆和表达被引量：6
- 1996年
- 从内皮细胞总ＲＮＡ中用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出Ｅ－选择素ｃＤＮＡ全长编码区，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，构建了重组质粒ｐＵＣ１８／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ，对此质粒进行了酶切及ＤＮＡ序列分析鉴定。将Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎｃＤＮＡ插入到天坛株痘苗病毒载体ＳｍａＩ位点，构建了表达质粒ｐＪＳＡ１１７５／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，ｐＪＳＡ１１７５／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ转染ＴＫ－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人Ｅ－选择素ｃＤＮＡ的重组痘苗病毒。经活细胞荧光染色和ＡＰＡＭ检测，重组痘苗病毒能有效地表达人Ｅ－选择素ｃＤＮＡ。
- 胡美茹汲言山舒翠玲马民慧董家新孙涛沈倍奋
- 关键词：E-选择素粘附分子痘苗病毒基因克隆CDNA
- HER-2/neu配体结合区2蛋白的甘露糖化修饰被引量：2
- 2004年
- 目的 :建立一种蛋白质甘露糖化修饰的方法。方法 :用离子交换层析和钴亲和层析法 ,纯化重组HER 2 /neu配体结合区2 (LBD2 )蛋白 ,并将纯化后的LBD2蛋白进行甘露糖化修饰。新合成的LBD2拟糖蛋白经质谱法检测后 ,用间苯二酚 硫酸法进一步鉴定。结果 :纯化后LBD2蛋白的纯度可达 90 %。新合成的LBD2拟糖蛋白在质谱图上呈现相应于甘露糖修饰后蛋白质分子量的预期峰形。经间苯二酚 硫酸法检测 ,结合于LBD2蛋白上的化学基团为糖分子。结论 :获得了LBD2拟糖蛋白 。
- 徐明郭宁王红霞李爱玲胡美茹沈倍奋
- 关键词：HER-2/NEU肿瘤疫苗
- HER-2/neu胞外配体结合区基因的克隆及原核表达被引量：7
- 2003年
- 目的 克隆HER 2 /neu胞外配体结合区基因 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。方法 用PCR技术扩增HER 2 /neu胞外配体结合区的cDNA片段 ,并将该片段插入pET 2 8a(+)原核表达载体中 ,实现插入基因的融合表达 ;用SDS PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定表达产物的相对分子质量及特异性。结果 构建的重组质粒在大肠杆菌中获得高效稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗HER 2 /neu的特异性抗体识别。结论 获得了HER 2 /neu胞外配体结合区基因在原核系统中的表达 ,为HER 2
- 徐明郭宁冯健男施明胡美茹沈倍奋
- 关键词：HER-2/NEU克隆原核表达原癌基因
- 多药抗药基因Mdrl探针的克隆及初步应用被引量：2
- 1995年
- 多药抗药基因Ｍｄｒｌ的表达水平与细胞的耐药性直接相关，检测Ｍｄｒｌ的表达水平可预测化疗的效果以及预后，用分子原位杂交的方法可检测单个细胞中Ｍｄｒｌ的表达水平．用ＰＣＲ扩增方法获得了一段特异的ＤＮＡ片段，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列分析证明与文献报道一致，此探针可用于临床标本的分子杂交检测．
- 胡美茹汲言山舒翠玲陈立军沈倍奋
- 关键词：基因克隆多药抗药
