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家蚕核型多角体病毒BmNPV orf59基因的功能研究: 杆状病毒（Baculovirus）是目前已知昆虫病毒中类群最大且最有实用价值的病毒之一。杆状病毒是一类专一性感染节肢动物病毒，在感染周期中有两种表型不同但基因型完全一致的病毒形态，即出芽型病毒（Budded virus，...; 蒋磊; 关键词：家蚕核型多角体病毒病毒复制

P24基因缺失对家蚕核型杆状病毒复制、转录的影响: [目的]通过基因敲除的方法研究杆状病毒基因的功能是一种十分有效的手段,特别是探究基因在病毒感染周期中对病毒复制和基因转录调控的影响方面尤为突出。Bmnpv p24基因位于BmNPV(T3)株基因组101563-10215...; 陈琛史利利蒋磊巩成见童富淡

纤维素酶EGA基因在枯草芽孢杆菌中的表达及其产物性质研究被引量：3: 2013年; 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis是一种高效的外源蛋白表达菌株,能将目的蛋白分泌到细胞外的培养基中。从福寿螺胃液共生菌株Bacillus sp.Strain AC-1基因组中克隆纤维素酶EGA的基因序列,利用基因工程技术构建纤维素酶EGA的重组枯草芽孢杆菌表达载体pAUsp-ega。该载体含有一个强启动子和一段信号肽,经淀粉诱导能表达外源蛋白。以枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失型菌株WB700为宿主菌,表达得到的重组纤维素酶EGA以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物得到的培养基上清酶活力达到1 120U/L。该纤维素酶在pH 6.0表现最大水解活力,最适反应温度为60℃,在酸性条件下稳定性良好,具有较好的应用前景。; 张漫莉耿新伟王梦婷蒋磊赵辅昆陈玮; 关键词：枯草芽孢杆菌羧甲基纤维素钠

家蚕杆状病毒BmNPVorf98基因功能研究: <正>杆状病毒是节肢动物的专性病原体,这类病毒特异性强,对其它动植物无害。因为杆状病毒具有极强的多角体启动子,并可用于高水平表达各种外源基因,特别是在多角体强启动子控制下可高效表达外源基因的能力,故对其分子生物学的研究成...; 史利利陈琛蒋磊巩成见童富淡; 关键词：家蚕杆状病毒 BMNPV 功能分析; 文献传递

Bm59基因缺失对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制、转录及组装的影响: 2016年; Bm59是家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)的核心基因之一。利用λRed重组技术和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒wt Bacmid-polh-egfp、缺失型病毒Bm59ko-Bacmid-polh-egfp以及补回型病毒Bm59re-Bacmidpolh-egfp,并分别转染家蚕卵巢培养细胞Bm N,研究Bm59基因在病毒侵染、增殖和组装中的功能。对病毒滴度的检测结果表明3种类型病毒都能产生有活力的子代病毒并使细胞感染发病,但Bm59ko-Bacmid-polh-egfp在各个时相的滴度值均显著低于其他2种类型病毒(P<0.05)。电子显微镜下观察Bm59ko-Bacmid-polh-egfp转染的细胞中只有少量细长的杆状病毒粒子,而其他2种类型病毒转染细胞后则能产生大量具有囊膜包裹的成熟病毒粒子。qRT-PCR检测结果显示,Bm59缺失型病毒基因组DNA的复制能力显著降低(P<0.05),早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显著低于野生型病毒(P<0.05)。综上所述,Bm59基因虽然是家蚕核型多角体病毒复制的非必需基因,但会显著影响病毒的增殖速度和病毒粒子的组装,对病毒各个时期的基因转录水平具有下调作用。; 蒋磊田星巩成见于威舒建洪吴银丽童富淡; 关键词：家蚕核型多角体病毒 BAC-TO-BAC系统 QRT-PCR

Bm90基因缺失对家蚕核型杆状病毒复制、转录的影响: 在杆状病毒基因组上敲除目的基因被公认为是研究病毒基因功能的精确、有效的手段,特别是研究目的基因在整个感染周期中对病毒DNA复制和基因转录的调控作用。Bm90基因位于BmNPV(T3)株基因组86702-8745 1nt,...; 巩成见蒋磊史利利陈琛童富淡

家蚕核型多角体病毒Bm90基因缺失对病毒增殖和组装的影响: 2016年; 家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)基因组中的orf90基因(Bm90)是一个未知功能的保守基因。利用λRed重组系统和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒Wt Bacmid-polh-egfp、Bm90基因缺失型病毒Bm90ko-polh-egfpBacmid及Bm90基因补回型病毒Bm90re-polh-egfp-Bacmid,并制备Bm90蛋白的多克隆抗体,研究Bm90基因在病毒感染周期中的表达以及对病毒增殖和组装的影响。将3种重组病毒分别转染Bm N细胞,Western blot检测显示Bm90蛋白在病毒转染Bm N细胞后72 h有表达;但用荧光显微镜观察Bm90基因缺失型病毒转染的Bm N细胞中没有出现绿色荧光,且检测其病毒滴度为0;用透射电子显微镜观察在Bm90基因缺失型病毒转染的Bm N细胞中没有子代病毒粒子出现。研究结果表明,Bm90基因缺失会抑制子代病毒粒子的组装和产生,使病毒失去侵染性,Bm90基因是病毒增殖及组装的必需基因。; 巩成见田星蒋磊于威舒建洪吴银丽童富淡; 关键词：家蚕核型多角体病毒 BAC-TO-BAC系统病毒增殖

Bm90基因缺失对家蚕核型杆状病毒复制、转录的影响: <正>在杆状病毒基因组上敲除目的基因被公认为是研究病毒基因功能的精确、有效的手段,特别是研究目的基因在整个感染周期中对病毒DNA复制和基因转录的调控作用。Bm90基因位于BmNPV(T3)株基因组86702-8745 1...; 巩成见蒋磊史利利陈琛童富淡; 关键词：家蚕基因缺失; 文献传递

响应面法优化重组毕赤酵母表达纤维素酶EG27的研究被引量：2: 2014年; 为优化重组毕赤酵母表达动物内源性纤维素酶EG27的培养基条件,在单因素实验基础上,以培养基中酵母粉、蛋白胨、葡萄糖的含量为自变量,EG27的酶活为响应值,采用Box-Behnken设计的方法,研究各自变量及其交互作用对毕赤酵母产EG27收率的影响。利用Design-Expert软件和响应面分析相结合的方法对毕赤酵母产动物内源性纤维素酶EG27的培养基条件进行优化,确定了最佳的培养基条件。在该培养条件下,获得最高产酶量为354U/L。; 耿新伟孙亦灵张柏超蒋磊陈玮赵辅昆; 关键词：纤维素酶毕赤酵母响应面

P24基因缺失对家蚕核型杆状病毒复制、转录的影响: <正>[目的]通过基因敲除的方法研究杆状病毒基因的功能是一种十分有效的手段,特别是探究基因在病毒感染周期中对病毒复制和基因转录调控的影响方面尤为突出。Bmnpv p24基因位于BmNPV(T3)株基因组101563-10...; 陈琛史利利蒋磊巩成见童富淡; 文献传递

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蒋磊