赵燕
- 作品数：13 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 采用RNA可视化原位杂交技术对感染细胞中猪瘟病毒RNA定位与分布的研究
- 研究猪瘟病毒RNA在体外感染细胞中的分布及定位,本研究建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术。并对其强致病力毒株在细胞中的RNA定位分布进行了研究,发现病毒RNA吸附和进入靶细胞的时间早于0.Shpi。
- 张玉杰赵燕徐璐张乾义陈锴孙永芳邹兴启朱元源赵启祖宁宜宝王琴
- 原位杂交技术在兽医微生物研究中的应用
- 原位杂交(in situ hybridization)技术是80年代发展起来的一种把重组DNA技术与组织学定位技术结合起来的新技术。本文对从80年代至今原位杂交技术的发展历程以及各阶段不同技术的原理,在兽医微生物中的应用...
- 赵燕陈锴范学政徐璐郑然王琴
- 文献传递
- 猪瘟病毒QuantiGene ViewRNA原位杂交方法的建立及初步应用
- 猪瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的猪的高度接触性、致死性传染性疾病，给养猪业造成巨大威胁和经济损失。本研究建立...
- 赵燕
- 关键词：猪瘟病毒
- 文献传递
- 2011年我国部分地区猪瘟病毒分子流行病学研究被引量：4
- 2014年
- 本研究对2011年我国部分地区养猪场采集的疑似猪瘟病料组织样本209份,分别用FQ-RT-PCR和RT-nPCR两种方法检测猪瘟病毒（CSw）.结果FQ-RT-PCR检测出55份猪瘟阳性,RT-nPCR检测出53份阳性,2种方法符合率达96.3％.将53份阳性产物进行测序及同源性分析,显示这53份流行株均为2.1基因亚型.所分离的流行株与疫苗株（HCLV）和石门株（SM）的核营酸同源性分别为79.4％～83.1％和79.4％～82.5％.研究结果表明,目前我国部分地区的养殖场仍有猪瘟病毒的存在,且以2.1亚型为主;流行株与疫苗株同源性仍高于77.4％,结合免疫攻毒试验,说明目前使用的猪瘟疫苗依然有效.
- 朱长康徐璐范学政陈锴张正兴郑然赵燕徐志文宁宜宝王琴
- 关键词：猪瘟病毒E2基因分子流行病学
- 原位杂交技术在兽医微生物研究中的应用
- 原位杂交(in situ hybridization)技术是80年代发展起来的一种把重组DNA技术与组织学定位技术结合起来的新技术。本文对从80年代至今原位杂交技术的发展历程以及各阶段不同技术的原理，在兽医微生物中的应用...
- 赵燕陈锴范学政徐璐郑然王琴
- 关键词：病理诊断原位杂交技术
- 猪瘟病毒QuantiGene ViewRNA原位杂交方法的建立
- 研究目的：准确定位和高效检测猪瘟病毒RNAo方法：本研究设计合成了猪瘟病毒RNA和猪内参基因p-actin的多条特异性探针,在猪瘟病毒中等致病力毒株HeBHHI/95毒株感染PK15细胞中进行蛋白酶K浓度和甲醛固定时间的...
- 赵燕陈锴徐璐徐雷木王琴水
- 关键词：猪瘟病毒
- 采用RNA可视化原位杂交技术对感染细胞中猪瘟病毒RNA定位与分布的研究
- 研究猪瘟病毒RNA在体外感染细胞中的分布及定位，本研究建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术.并对其强致病力毒株在细胞中的RNA定位分布进行了研究，发现病毒RNA吸附和进入靶细胞的时间早于0.5hpi.
- 张玉杰赵燕徐璐张乾义陈锴孙永芳邹兴启朱元源赵启祖宁宜宝王琴
- 原位杂交技术在兽医微生物学中的应用进展
- 2013年
- 根据探针标记方法的差异,对原位杂交技术在兽医微生物研究中各个阶段的技术原理、应用现状、发展前景以及存在的不足进行了综述。
- 赵燕陈锴徐璐王琴
- 关键词：原位杂交技术
- 猪瘟病毒感染对猪外周血细胞因子转录的影响被引量：1
- 2013年
- 猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的高度致死性、接触性传染病。为了解CSFV毒株对猪体免疫系统的影响,本研究使用中等致病力CSFV毒株人工感染试验猪,定期采集猪外周血,提取总RNA,运用qRT-PCR技术对免疫相关因子的mRNA转录水平进行分析。试验结果表明,在临床症状早期和在临床症状明显期,11种细胞因子的转录水平均有不同程度上升(RQ>1);在濒死期,除AMCF、IL-1α、IL-1β、IL-6转录升高外,其余细胞因子转录水平下降显著(RQ<0.1)。该试验结果证实,CSFV感染可以导致PBMC细胞分泌的细胞因子mRNA转录水平增高,从而影响机体的细胞免疫应答和体液免疫应答功能,这可能是CSFV对猪免疫功能影响的分子机制之一。
- 范学政陈锴徐璐朱长康张正兴赵燕史兰广郑然宁宜宝王琴郑世军
- 关键词：猪瘟病毒外周血单核细胞QRT-PCR细胞因子
- RNA可视化原位杂交技术对感染细胞中猪瘟病毒RNA定位与分布被引量：3
- 2016年
- 【目的】为研究CSFV RNA在体外感染细胞中的分布及定位,建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对Gen Bank中公布的CSFV、BVDV和BDV全序列,避开BVDV和BDV的同源区,设计了CSFV RNA及内参基因β-actin的特异探针。以CSFV中等致病力毒株(He BHH1/95)为参考毒株,在PK15细胞中培养病毒,加入RNA可视化原位杂交的特异探针和相应试剂,采用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。通过综合分析观测结果、荧光强度、重复性等因素,采用正交试验优化了对原位杂交过程中具有重要影响的蛋白酶K浓度和甲醛固定时间,建立了CSFV RNA可视化原位杂交技术,并与FAT方法比较该技术灵敏度;用我国目前流行的CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3基因亚型及BVDV、PPV、PRV和PCV-2病毒进行特异性试验。最终,以CSFV强致病力毒株(SM)接种PK15细胞,病毒感染后0.5、1、3、6、8、10、14、18、24、36、48、72、96h(hours post inoculation,hpi)取样,每个时间点2个重复,采用CSFV RNA可视化原位杂交技术进行检测。为佐证病毒蛋白在细胞中的定位及分布,同时采用FAT方法对SM株E2蛋白在PK15细胞中的表达情况进行动态研究。【结果】采用该技术在荧光共聚焦显微镜下可观察到CSFV RNA在细胞中的定位;当蛋白酶K浓度为1:1 000、甲醛固定时间为30min时为最优反应条件;灵敏度试验表明该技术对病毒的检测极限为10-8/200μL,比FAT高3.5个数量级;特异性试验结果显示该探针能与CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3亚型结合,与BVDV、PPV、PCV-2、PRV无交叉反应。采用该技术对CSFV RNA感染后在靶细胞中的定位与分布研究结果显示:0.5hpi在胞核和胞浆均能检测到RNA,0.5—6hpi RNA主要分布于胞核内并在核内富集;10hpi胞浆内RNA逐渐增多,胞核内RNA逐渐减少,24hpi RNA主要集中在胞浆内细胞核周围;36hpi核外RNA大量聚集增多,72hpi达到峰值;96hpi RNA总量有所下降。而FA
- 张玉杰赵燕徐璐张乾义陈锴孙永芳邹兴启朱元源赵启祖宁宜宝王琴
