赵玉利
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼠伯氏疟原虫CSP基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达。方法采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将其定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP全长基因重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定;同样,采用PCR技术扩增PbCSP的N端和C端两个片段,先将C端片段定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP-C重组质粒,再将PbCSPN端片段定向克隆入pEGFP/PbCSP-C,构建pEGFP/PbCSP'重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定。将pEGFP/PbCSP和pEGFP/PbCSP′分别用脂质体介导转染体外培养的Hela细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测融合蛋白的表达。结果PCR、酶切及测序证实目的基因PbCSP全长和片段分别正确连接至pEGFP-N1的多克隆位点,两种重组质粒转染Hela后,荧光显微镜及RT-PCR均检测到目的蛋白在Hela中表达。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫CSP全长基因和该基因片段的融合蛋白真核表达质粒,并在Hela细胞中获得表达。
- 马长玲胡旭初赵玉利李艳文胡凤玉陈晓湘周珍文张咏莉余新炳
- 关键词：伯氏疟原虫CSP绿色荧光蛋白HELA细胞
- 华支睾吸虫CsSCCRO基因的表达和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的将目的基因CsSCCRO转染Hela细胞,检测转染效率和表达水平,为进一步在细胞学水平研究编码蛋白的功能提供依据。方法将目的基因CsSCCRO克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,通过脂质体方法转入Hela细胞,RT-PCR和荧光观察来鉴定转录和表达水平。结果真核重组质粒pEGFP-N1-CsSCCRO转入Hela细胞后稳定表达荧光蛋白;RT-PCR鉴定转染的Hela细胞,扩增产物约为780 bp,与预期值相符。结论CsSCCRO基因能够转染到Hela细胞中,并且能与GFP高效转录和翻译成融合蛋白。
- 赵玉利胡旭初马长玲徐劲胡凤玉余新炳
- 关键词：华支睾吸虫
- 华支睾吸虫CsSCCRO基因的发现及其功能初步研究
- 华支睾吸虫成虫长期寄生于肝胆管部位所引起的疾病称华支睾吸虫病，又称肝吸虫病，是一种食源性的人兽共患寄生虫病。
华支睾吸虫成虫轻度感染不会产生明显临床症状，易被忽视，患者长期带虫，虫体的分泌/代谢产物及虫体本身的...
- 赵玉利
- 关键词：华支睾吸虫免疫原性基因克隆细胞生物学功能
- 文献传递
- 华支睾吸虫CsSCCRO基因的克隆表达和蛋白纯化被引量：3
- 2006年
- 目的原核表达华支睾吸虫鳞状上皮癌相关肿瘤基因(SCCRO)全长编码区序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做好准备。方法用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长cDNA文库中识别出与人鳞状上皮癌相关基因的同源序列及其全长编码区,将其编码区序列克隆到原核表达载体PET-30a(+),测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,重组产物用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果华支睾吸虫鳞状上皮癌相关基因长度为1 218bp,其全长编码序列长度为780bp,编码259个氨基酸,1-22位为分泌信号肽,在羧基端有一个高度保守的区域。该基因在大肠杆菌中得到了高效的可溶性表达,重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度可达98%。结论鳞状上皮癌相关基因的PET-30a(+)原核重组质粒在大肠杆菌BL-21/DE3中可以稳定高效地表达可溶性蛋白。
- 赵玉利胡旭初徐劲胡凤玉谢红艳余新炳
- 关键词：华支睾吸虫纯化
