陈霞芳 作品数:53 被引量:150 H指数:6 供职机构: 上海市第一人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 上海市卫生局“百人计划” 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用 被引量:1 2009年 目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。 傅强 王慧萍 韦芳 李慧明 陈霞芳 王煜非 黄倩关键词:肝肿瘤 消化道肿瘤血清sTNFRI的检测及其临床意义 1996年 肿瘤坏死因子(TNF)是由单核巨噬细胞所产生的多肽细胞因子,在机体的细胞免疫中具有重要的生物作用。它可分为TNFα和TNFβ,同时有二种相应的受体。近年来,还在血液和尿液中发现可以和TNF结合并对TNF的活性具有拮抗作用的蛋白。现证实,此蛋白是从细胞表面TNF受体上脱落的片断,并被命名为可溶性肿瘤坏死因子受体(Soluble tumor necrosis factor receptor,sTNFR),可分为sTNFRI(对应于TNFRβ)和sTNFRⅡ(对应于TNFRα)。多项研究表明,sTNFR是由某种蛋白裂解酶的作用,从细胞表面脱落至血循环中,并对TNF起着一定的调节作用。 王裕发 巫协宁 周小寒 陈霞芳 张晓琼 吴晴 温文倩 顾青关键词:STNFRI 可溶性肿瘤坏死因子受体 细胞表面 TNF受体 肿瘤病人 靶向E2F1的shRNA抑制眼内视网膜母细胞瘤生长 被引量:3 2009年 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中由于Rb基因缺失或失活,转录调控因子E2F1始终处于活化状态,细胞不断增殖,E2F1活性增加是恶性肿瘤的普遍现象.根据人E2F1基因设计了3段shRNA,构建RNA干扰表达载体pSilencer-shE2F1,瞬时转染人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-Rb-44和人肝癌细胞株SMMC-7721,通过荧光定量PCR检测E2F1表达水平的变化,PI(碘化丙锭)染色检测细胞周期各时相细胞数量以检测其对细胞周期的影响.根据筛选出的有效shRNA序列构建腺病毒载体并包装出腺病毒Ad-shE2F1,在裸鼠前房模型中,体外按50moi的感染系数感染稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人视网膜母细胞瘤细胞株48h后,收集细胞,将2×105细胞注射到裸鼠眼前房内,连续观察眼内肿瘤细胞生长情况并拍照记录.通过转染肿瘤细胞株检测E2F1转录水平,筛选到1个能明显抑制肿瘤细胞内E2F1表达的shRNA序列,并使细胞周期中S期细胞数减少.经Ad-shE2F1感染的RB肿瘤细胞与对照相比较,其在裸鼠眼前房内肿瘤生长减缓.结果说明,有效抑制hE2F1表达的shRNA具有抑制体内外人视网膜母细胞瘤生长的作用. 王丰 马家烈 李惠明 陈霞芳 王煜非 黄倩关键词:E2F1 SHRNA 视网膜母细胞瘤 胃癌患者血清sICAM-1,sVCAM-1水平的研究 被引量:2 1999年 ICAM1(CD54)和VCAM1均属于免疫球蛋白(Ig)超家族成员,其表达对炎性细胞因子IL1、IFNγ、TNFα的诱导高度敏感[1,2]。它们的配体分别为LFA1(CD11a)、MAC1(CD11b)和VLA4。ICAM1有5个... 王裕发 巫协宁 张晓琼 陈霞芳关键词:胃癌 血清 SICAM-1 SVCAM-1 可溶性白介素-2受体在肿瘤诊断与治疗中的价值 被引量:16 1993年 sIL-2R 是从细胞表面 Tac 抗原上脱落下来的42kD 小片段,并在血液中循环。恶性肿瘤和伴有转移灶肿瘤患者血清中的 sIL-2R 水平有明显增高,对肿瘤的诊断有帮助,且可作为评估治疗的有效性和判断预后。在恶性肿瘤、白血病、器官移植排异、 王裕发 陈霞芳 巫协宁关键词:白细胞介素2 受体 肿瘤 免疫毒素腺病毒载体靶向性提高肿瘤基因治疗效果研究 恶性肿瘤是危害人类健康与生命的最主要的疾病,尽管近年来在化疗、放疗和手术治疗等方面取得了长足的进步,但仍然不能遏制肿瘤发病率和死亡率的上升趋势。基因治疗正逐渐成为一种很有效的肿瘤辅助治疗手段,主要应用于中晚期病人。目前肿... 刘新建 张圣海 吴继红 陈霞芳 于惠 黄倩关键词:免疫毒素 腺病毒 靶向性 肿瘤基因治疗 文献传递 肝癌患者血清sTNFR Ⅰ的临床意义 被引量:3 1996年 为评估可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)在肝癌中的作用和临床意义,我们用ELISA方法检测了83例肝癌患者和61例健康人的血清sTNFRI水平变化。结果发现肝癌患者血清sTNFRI的平均水平明显高于健康对照组(2.62±0.79ng/ml对0.93±0.29ng/ml,P<0.001)。升高幅度与疾病分期明显相关,即Ⅲ~Ⅳ期患者的水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(2.97±0.43ng/ml对1.74±0.41ng/ml,P<0.001)。同时我们发现sTNFRⅠ升高与血清碱性磷酸酶(r=0.59)、白细胞计数(r=0.43)、血清球蛋白(r=0.32)成正相关,而与血清白蛋白(r=-0.71)成负相关。在肝癌患者中,血清sTNFRⅠ升高率(89.16%)远大于血清AFP阳性率(54.22%)。25例化疗患者,sTNFRⅠ升高者显示缺乏临床效应,而降低者则有缓解(3.39±0.43ng/ml对2.67±0.34ng/ml,P<0.001)。实验结果显示:肿瘤患者血清sTNFRⅠ水平与疾病的分期和对化疗的反应相关,它的测定对肿瘤的检测、随访和预后的评估有辅助诊断意义,表明sTNFRⅠ可作为宿主对肿瘤的生物学反应的标? 王裕发 巫协宁 吴晴 张晓琼 陈霞芳 周小寒 温文倩 陈美玉关键词:肝癌 病理学 一种新的神经胶质瘤原位移植模型的建立 2007年 目的:建立一种新的可动态观察肿瘤细胞生长的大鼠神经胶质瘤原位移植瘤模型。方法:利用脂质体将含有强化绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)基因的真核表达质粒pEGFP-N1转染大鼠神经胶质瘤C6细胞,经G418筛选及亚克隆,获取稳定表达EGFP的细胞系C6-gfp。采用CCK-8试剂盒检测C6及C6-gfp细胞增殖情况;将C6-gfp细胞接种于Wistar大鼠颅内,通过B超、大体标本、荧光体视镜、H-E染色和免疫组化观察颅内成瘤情况及瘤组织中绿色荧光蛋白的表达。结果:流式细胞术分析体外培养的C6-gfp细胞97.7%产生绿色荧光;C6-gfp细胞与亲代C6细胞相比,生长曲线无明显不同(P>0.05)。C6-gfp接种于颅内3周后成瘤率达70%;利用B超可动态观察肿瘤生长,利用荧光体视镜可见肿瘤组织发出绿色荧光,可与周围正常组织区别。H-E染色可见肿瘤细胞核大,染色深,核分裂明显,瘤内有很多新生血管。免疫组化可见GFP阳性细胞染色深浅不一。结论:成功构建了能稳定高水平表达EGFP的大鼠神经胶质瘤C6-gfp细胞株,其生物学行为未发生改变,能在同系大鼠颅内成瘤。该模型为神经胶质瘤防治研究提供了良好的基础。 裘玮 黄倩 李惠明 王丰 伍瑛 陈霞芳 易苗英关键词:神经胶质瘤 移植瘤模型 瞬时转染 稳定转染 绿色荧光蛋白 乳腺癌患者血清sTNFR的检测 被引量:3 1999年 肿瘤坏死因子(TNF)在机体的细胞免疫中具有重要生物学作用。它可分为TNFα和TNFβ。相应的也有两种TNF受体(TNFR)。近来还发现,TNFR与细胞程序化死亡的诱导和信号传导有关[1]。血液和尿液中发现可和TNF结合并对TNF活性具有拮抗作用... 王裕发 张晓琼 陈霞芳 巫协宁关键词:乳腺癌 血清 STNFR 二氯化钴对腺病毒基因表达的影响 被引量:3 2009年 目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响。方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2处理后,Western印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率。结果:适当浓度的CoCl2(0.4和0.08μg/mL)能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4μg/mLCoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制。0.4μg/mLCoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平;Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达。结论:CoCl2能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关。 刘新建 季迅达 田毓华 陈霞芳 谢匡成 吴继红 张圣海 徐萍 李川源 黄倩关键词:胃肿瘤 腺病毒感染 基因表达调控 肿瘤 缺氧诱导因子1 二氯化钴