陈鸿军 作品数:165 被引量:387 H指数:11 供职机构: 中国农业科学院上海兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市科技兴农重点攻关项目 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 文化科学 更多>>
新型鸡心包炎—包涵体肝炎病毒的分离及鉴定 被引量:13 2016年 2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和fiber2基因测序分析表明,该毒株为最近在国内流行的新型突变株。JS7株以1000 ELD_(50)病毒量肌肉接种21日龄雏鸡,5 d内呈现80%死亡率,剖检可见典型的心包炎、肝炎症状,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、法氏囊、脑、小肠、盲肠、腺胃、胸腺、胰脏中均能检测到病毒分布;H&E染色结果显示,在组织切片中,肝脏呈现典型的嗜碱性核染色,其他组织脏器也呈现不同程度的病理变化。可见JS7株在雏鸡中具有较强的致病性及广泛的组织嗜性。 汪凯 蔡骁垚 叶建强 刘红梅 张泉 刘芹防 李泽君 陈鸿军关键词:包涵体肝炎 禽腺病毒 马立克氏病病毒CVI988株VP22蛋白承载异源蛋白细胞间扩散 被引量:2 2009年 马立克氏病病毒(MDV)被膜蛋白VP22被证实能在细胞间高效转导,为了进一步证明VP22能够作为蛋白转运的载体,将4种不同的异源蛋白与MDV1型(MDV-1)CVI988/Rispens株VP22蛋白融合表达,通过观察这些融合蛋白的细胞定位以及它们的细胞间扩散能力来研究VP22转运蛋白的情况。结果发现,禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)、牛γ干扰素(BoIFN-γ)及新城疫病毒(NDV)F蛋白能够被MDV-1VP22转运,而鸡法氏囊病病毒(IBDV)蛋白VP2不能被MDV-1VP22转运,上述结果说明MDV-1VP22蛋白能够作为蛋白转运的载体,但对所转运的蛋白具有选择性。 张晨飞 秦爱建 陈鸿军 邓绪芳 苏钰文关键词:马立克氏病病毒 蛋白转运 扩散 Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1的原核表达与免疫学检测 被引量:3 2010年 本研究采用原核表达载体pCold-HF在大肠杆菌中表达I型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type Ⅰ,DHV-Ⅰ)弱毒株FC64株的VP1蛋白,经超声波裂解结果显示:VP1融合蛋白呈现可溶性表达。利用His-bindResin试剂盒纯化该产物,作为免疫原免疫小鼠,制备特异性抗体,进行免疫学检测。结果表明:该抗体与原核表达产物、DHV感染的SPF尿囊液总蛋白呈现特异性反应,这为DHV-Ⅰ快速诊断方法的建立奠定了基础。 宋翠萍 韩先干 仇旭升 于圣青 陈鸿军 丁铲关键词:鸭肝炎病毒 VP1 原核表达 细胞PKR-eIF2 α抗新城疫病毒作用研究 新城疫病毒为副黏病毒科禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的禽副黏病毒Ⅰ型(APMV-1),基因组为单股负链不分节段的RNA.双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)作为干扰素刺激基因的一种,能够识别病毒产生的dsRNA而活... 张石磊 孙英杰 詹嫒 于胜青 仇旭升 谭磊 陈鸿军 丁铲基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立 被引量:2 2022年 为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别,具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立,经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5μg/mL,ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件;以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259;特异性试验结果表明,该方法仅与ASFV阳性血清发生反应,具有较强的特异性;重复性试验结果显示变异率小于10%,重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果对比显示,符合率为91.3%,能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。 程佳 李遥 刘英楠 钟秋萍 史馨瑾 魏常青 谢振华 廖欣欣 宋影影 陈鸿军关键词:非洲猪瘟病毒 杆状病毒 ELISA 转化型人参皂苷抗MDV及诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探 被引量:9 2004年 以转化型人参皂苷的8个组,按12.5μg·mL-1的剂量,在体外鸡胚成纤维细胞上进行抗MDV-RB1B强毒株空斑减数试验和诱导肝癌7402细胞株、大鼠脑胶质瘤细胞C6株细胞凋亡试验,用光学显微镜观察、琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA损伤。结果表明:转化型人参皂苷6、7号组,在感染阻断、增殖抑制、直接杀灭3种方式的抗MDV空斑减数率都达到阿昔洛韦(ACV)抗MDV空斑减数率的80%,转化型人参皂苷4、6号组对MDV-RB1B株的直接杀灭作用与ACV的杀灭作用相同;转化型人参皂苷8号组诱导肝癌7402株细胞48h后,有60%的瘤细胞凋亡,对大鼠脑胶质瘤C6株细胞也有诱导凋亡的作用。 许小琴 金文杰 李金贵 秦爱建 陈鸿军关键词:马立克氏病病毒 瘤细胞凋亡 鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体的制备 被引量:2 2017年 为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离。切胶研磨,将收集的鸡p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,选取抗体阳性的小鼠脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合并筛选单抗。结果显示,经亚克隆纯化,共筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6。利用间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹检测单抗效价。成功制备了特异性鸡p21单抗。这为进一步研究鸡p21生物学功能奠定了基础。 李雪琪 连雪 鲍晨沂 孙海伟 陈鸿军 JUNG Yong-Sam 钱莺娟关键词:P21 单克隆抗体 原核表达 大鼠细小病毒VP2原核表达及间接ELISA方法建立 被引量:3 2018年 本研究以大鼠细小病毒(Rat parvovirus,RPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测RPV抗体的间接ELISA方法。通过比对分析大鼠细小病毒不同毒株的VP2蛋白序列,我们筛选出了RPV株VP2蛋白上长度为378 bp的特异性成熟肽序列,随后构建了pET30a原核表达体系,借助His标签对重组表达产物进行纯化,以纯化鉴定后的表达产物为抗原,免疫Balb/c小鼠制备多抗血清并建立检测大鼠细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA方法。结果显示,抗原包被质量浓度为0.28μg/mL,阳性判定标准初步定为OD450≥0.5,与H-1株和KRV株的阳性血清存在一定的交叉反应,批内试验变异系数小于10%。本研究建立的RPV VP2-iELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于大鼠细小病毒感染的血清抗体检测。 霍娜 姚威 于婉琪 魏晓锋 萧飒 陈鸿军关键词:VP2 原核表达 间接酶联免疫吸附试验 大鼠疑似泰勒氏病毒荧光定量检测方法的建立 2017年 目的建立一种能在临床上快速、准确地检测大鼠疑似泰勒氏病毒(Theiler’s-like virus of rats,TLV)的方法,采用TaqMan探针荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术,特异性针对TLV病毒核酸进行检测。方法通过基因合成序列作为质粒标准品的模板,同时选择特异性的序列在3622~3729 nt处,设计一对引物和TaqMan性探针,优化反应体系及条件,进行qPCR扩增,从而建立TLV TaqMan探针qPCR方法,并对其灵敏度、稳定性和特异性进行评价。结果建立的TLV qPCR检测方法,标准曲线线性关系良好,R^2值可达到0.99,灵敏性最低能够检测到10个拷贝数/μL,对比普通PCR方法,高出其100倍;对其他常见大鼠病毒均无非特异反应;重复性良好,批内和批间变异系数均小于1%。结论利用TaqMan探针建立快速检测TLV的荧光定量PCR方法,该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等特点。 蔡骁垚 魏晓锋 熊炜 陈懿斐 林颖峥 张泉 陈鸿军关键词:TAQMAN 荧光定量PCR 2014~2016年江苏地区H9N2亚型禽流感病毒遗传进化及其分子特征的分析 被引量:3 2018年 H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)在我国广泛流行,给养禽业造成了巨大的经济损失,还对公共卫生安全存在潜在威胁. 2014~2016年, H9N2亚型禽流感病毒在江苏地区的活禽市场的鸡中的阳性率为8.39%~13.74%.选取10株H9N2分离株进行全基因组测序及遗传进化分析.结果表明, H9N2分离株的HA基因与早期的江苏分离株位于同一小分支上,且同源性较高,但NA基因与早期江苏病毒株的同源性较低,核苷酸同源性为91.4%~93.9%,氨基酸同源性为91.2%~93.8%.这些病毒株的基因型依然为B69,为目前的优势基因型.所有H9N2病毒分离株的HA蛋白的226位点为L.固相受体结合实验结果显示, H9N2分离株具有人源α2,6唾液酸受体的结合特性. 陈新武 段旭彤 王彦哲 季雅宁 石晓娜 李雪松 杨健美 刘芹防 陈鸿军 滕巧泱 李泽君关键词:禽流感病毒 H9N2 进化分析