龚磊
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 供职机构：山东大学医学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对大肠癌细胞生长的抑制作用被引量：5
- 2007年
- 目的:研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)对大肠癌细胞生长的抑制作用,并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法:将Ad-ODC-AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29,通过MTS法观察其对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,采用Western blot检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞中ODC、AdoMetDC及细胞周期调节蛋白(Cyclin D1 and CDK4)的表达的影响,利用RT-PCR检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA水平的影响。结果:Ad-ODC-AdoMetDCas可抑制HT-29细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,并可明显抑制细胞的增殖,引起细胞周期Gl期阻滞,抑制G1期主要的细胞周期蛋白Cyclin D1的转录和翻译。结论:Ad-ODC-AdoMetDCas可有效下调ODC和AdoMetDC的表达,并通过抑制Cyclin D1的表达使其细胞周期停滞于G1期,从而抑制大肠癌细胞HT-29的增殖,为进一步研究大肠癌的基因治疗打下基础。
- 龚磊姜春英张冰胡海燕王伟刘贤锡
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶细胞周期蛋白D1结直肠肿瘤
- 人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶α亚基的克隆、表达与纯化
- 2006年
- 目的:构建人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)的α亚基的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化表达的重组蛋白。方法:从大肠癌细胞中提取总RNA,RT-PCR方法扩增人SAMDCα亚基的cDNA片段801 bp,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SAMDC-α。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6×His.Tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果:酶切鉴定和DNA测序显示,人SAMDCα亚基的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出32kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6×His.Tag的融合蛋白,且Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论:成功构建、表达且纯化了重组SAMDC-α亚基,为制备抗SAMDC抗体、研究SAMDC基因与结直肠肿瘤的关系提供了必要的工具。
- 龚磊刘贤锡张冰张岩胡海燕赵志艺
- 关键词：结直肠肿瘤原核表达
- 肿瘤反义治疗研究进展被引量：1
- 2004年
- 肿瘤反义治疗是以反义寡核苷酸为基础的一种基因治疗方法 ,经过近二十几年的发展 ,反义寡核苷酸以其高特异性和低毒副作用等优良特性 ,正成为新一代抗肿瘤药物的主力军。现着重介绍反义技术的原理、反义寡核苷酸在临床应用的进展及具有临床应用前途的反义靶标。
- 张冰龚磊刘贤锡
- 关键词：寡核苷酸反义肿瘤蛋白质类肿瘤
- rAd-ODC/Ex3as对前列腺癌PC-3细胞抑制作用的研究
- 2004年
- 目的:探讨重组腺病毒rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞的体外抑制作用及对前列腺癌的作用机制。方法:利用报告基因GFP测定病毒感染效率,用WesternBlot检测rAd鄄ODC/Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达,采用MTT法、Matrigeal侵袭实验观察rAd鄄ODC/Ex3as对前列腺癌细胞PC鄄3恶性表型的影响,并用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:当MOI为50时,腺病毒感染PC鄄3细胞的效率约为70%,WesternBlot证实rAd鄄ODC/Ex3as可抑制ODC基因的表达。rAd鄄ODC/Ex3as以20MOI感染PC鄄3细胞可明显抑制其生长增殖和侵袭性穴P<0.01雪,流式细胞仪检测结果证实rAd鄄ODC/Ex3as可引起PC鄄3细胞G1期阻滞,但并未引起凋亡。结论:rAd鄄ODC/Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达,并可抑制前列腺癌细胞PC鄄3的生长与侵袭,诱导其发生G1期阻滞,有望成为治疗前列腺癌的基因药物。
- 张岩刘贤锡胡海燕王晓明张冰龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶PC-3细胞
- 鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对前列腺癌细胞生长的抑制作用被引量：8
- 2005年
- 为研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因反义RNA对前列腺癌细胞的生长抑制作用 ,将表达ODC第 3外显子反义RNA的重组腺病毒rAd ODC Ex3as分别感染前列腺癌细胞株PC 3和LNCap .通过MTT法观察其对前列腺癌细胞增殖的影响 ,并确定不同细胞合适的感染滴度 ,再采用Western印迹和流式细胞术检测rAd ODC Ex3as对细胞中ODC表达的抑制作用、对细胞周期和凋亡的影响以及与CDK抑制物p2 1的关系 .实验显示 ,rAd ODC Ex3as分别以 5 0MOI、2 5MOI感染PC 3和LNCap细胞可明显抑制其生长增殖 ,而不引起细胞毒性作用 ;其对两种细胞中ODC表达的抑制作用分别为4 5 %和 5 9% .流式细胞DNA含量分析证实 ,rAd ODC Ex3as可引起PC 3和LNCap细胞周期G1期阻滞 ,但并未引起凋亡 .通过Western印迹发现 ,细胞中ODC表达的降低可诱导p2 1蛋白的过表达 .结果表明 ,rAd ODC Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达 ,并通过诱导p2 1的过表达使其细胞周期停于G1期 ,从而抑制前列腺癌细胞PC 3和LNCap的增殖 ,为其进一步基因治疗的研究打下基础 .
- 张岩刘贤锡张冰胡海燕龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶腺病毒基因治疗反义RNA前列腺癌细胞
- 人ODCmRNA反义抑制敏感位点的筛选被引量：1
- 2005年
- 目的为建立有效的肿瘤治疗方法,筛查ODCmRNA最佳反义抑制位点。方法采用RT PCR的方法从肝癌细胞中扩增出鸟氨酸脱羧酶(ODC),外显子2、外显子3、外显子610、外显子11124段基因片段。通过TA克隆反向连接到pcDNA3.1上,酶切测序并鉴定插入方向。脂质体法转染重组载体及空载体到肝癌MMC7721细胞中,采用Western blot法检测各载体对ODC蛋白表达的抑制作用,采用四唑盐比色试验验证并比较各载体对MMC7721细胞增殖活性的影响。结果外显子2、外显子3、外显子6103个位点的ODC反义RNA表达载体转染细胞后,细胞内ODC蛋白表达量明显降低,细胞增殖活性受到明显抑制,抑制率分别为59%、62%、64%。结论ODC外显子2、外显子3、外显子610是较好的反义抑制敏感位点。
- 张冰刘贤锡张岩姜春英胡海燕龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶真核表达载体外显子
- 人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的克隆、表达和纯化
- 2008年
- 目的构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SSAT。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6His-tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序显示,人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4中,而且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出20 kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6His-tag的融合蛋白,而且用Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白,为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具。
- 孙慧龚磊刘斌杨亚培徐春晓刘贤锡
- 关键词：原核表达结直肠肿瘤
- 没药倍半萜诱导的p21^(WAF/CIP1)蛋白参与抑制前列腺癌细胞增殖被引量：5
- 2008年
- 目的探讨没药的两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法应用细胞增殖实验噻唑蓝(MTT)法检测化合物对人前列腺癌细胞株LNCaP的影响;流式细胞术进一步分析前列腺癌细胞经化合物处理后细胞周期时相的变化;Western blot检测化合物对细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclin D表达的影响;利用细胞转染技术检测化合物对cyclin D启动子表达活力的影响。结果两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活力,使细胞停滞于G0/G1期;且能在蛋白水平诱导p21WAF/CIP1的表达,同时降低cyclinD的表达。结论没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞的增殖,可能是通过上调p21WAF/CIP1的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的。
- 王小玲孔峰吉恺蔡捷任凯龚磊胡志敏苑辉卿
- 关键词：没药前列腺癌P21
- 反义RNA技术下调多胺代谢关键酶抑制大肠癌细胞增殖及分子机理研究
- 本文通过成功构建AdoMetDC-α亚基的原核表达载体pTriEx-AdoMetDC-α，在E.coliJM109(DE3)中诱导表达并纯化了带有His-Tag的融合蛋白，进一步以该重组蛋白为免疫原，制备抗人AdoMet...
- 龚磊
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶大肠癌细胞增殖多胺
