于志恒
- 作品数：12 被引量：98H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血液透析对尿毒症患者血清可溶性细胞粘附分子-1水平的影响被引量：1
- 1998年
- 血液透析对尿毒症患者血清可溶性细胞粘附分子－１水平的影响于志恒陈香美廖洪军周美华傅博细胞粘附分子（ｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｓ，ＣＡＭ）是位于多种细胞表面的一类大分子糖蛋白，它通过介导细胞与细胞间，细胞与细胞外基质间的粘附作用，参与...
- 于志恒陈香美陈香美周美华廖洪军
- 关键词：血液透析尿毒症细胞粘附分子血清
- 肾脏基因表达数据库的建立与肾脏衰老相关基因表达谱研究被引量：14
- 2001年
- 目的 运用基因芯片技术及公共数据库，首次建立大鼠肾脏基因表达谱数据库。比较成年及老年大鼠肾脏基因表达变化，筛选肾脏衰老相关基因。方法 将代表８ １９２条基因的ＰＣＲ产物用 Ｃａｒｔｅｓｉａｎ Ｐｉｘｓｙｓ ７５００点样仪按微矩阵排列点样于 Ｄａｋｏ玻璃片，将等量的成年大鼠肾脏组织和衰老大鼠肾组织ｍＲＮＡ分别用ｃｙ－３、ｃｙ－５逆转录荧光标记，制作ｃＤＮＡ探针，混合后与上述表达谱芯片进行杂交。Ｓｃａｎ Ａｒｒａｙ ３０００扫描仪扫描杂交信号荧光强度，ＩｍａＧＥＮＥ３．０软件分析扫描结果。与公共数据库比较，建立大鼠肾脏表达谱数据库。结果 在进入研究的８ １９２条基因中，１２４条基因（１．５％）在衰老大鼠肾脏组织中有表达差异（１．７倍以上）。在老年大鼠肾组织中表达增加的基因有７１条，其中１６条（２２．５％）为应激反应相关或炎症相关基因，１７条（２３．９％）为细胞外基质代谢／细胞骨架／肿瘤相关基因。在衰老大鼠肾组织表达下降的基因有５３条，其中９条（１６．９％）为能量代谢相关基因，１２条（２２．６％）为蛋白质合成／代谢相关基因，６条（１１．３％）为细胞周期／有丝分裂相关基因，４条（７．５％）为ＤＮＡ／ＲＮＡ损伤修复基因。
- 于志恒白雪源陈香美李非朱晗玉
- 关键词：衰老肾脏基因表达谱基因芯片
- 人钠/二羧酸协同转运蛋白1基因融合表达及其抗体制备被引量：14
- 2002年
- 利用DNA重组技术 ,将编码人钠 羧酸协同转运蛋白 1(hNaDC1)抗原表位区 (W138 Q2 19)的cDNA克隆至融合表达载体pGEX 5X 1,构建重组质粒pGEX hNaDCL6 .在大肠杆菌BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,获得谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hNaDC1重组融合蛋白的表达 .以谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的GST hNaDC1.以此为免疫原制备的抗hNaDC1抗体可特异性识别人类和大鼠肾组织以及小肠组织中天然的钠 二羧酸协同转运蛋白 1.利用该抗体 ,首次证实了hNaDC1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘 ,与大鼠钠 二羧酸协同转运蛋白 1(SDCT1)分布一致 .
- 何娅妮陈香美于志恒吕杨师锁柱朱晗玉彭丽霞
- 关键词：抗体
- 纤溶酶原激活物抑制物-1基因转导对肾小球系膜细胞外基质积聚的影响被引量：21
- 1999年
- 目的 利用体外基因转染技术使纤溶酶原激活物抑制物 1(PAI 1)基因过表达 ,直接观察局部PAI 1对大鼠系膜细胞外基质 (ECM)积聚的影响 ,解析ECM积聚的分子机制。方法 以绿色荧光蛋白 (GFP)为报告基因 ,构建PAI 1/GFP融合基因真核表达载体 ,利用脂质体将外源PAI 1cDNA导入体外培养的大鼠系膜细胞。在活细胞状态下 ,动态观察外源基因的表达。用Northern杂交、ELISA方法检测大鼠系膜细胞纤维连接蛋白 (FN)、层连蛋白 (LN)及IV型胶原表达。结果 PAI 1基因转染后 ,转染组大鼠系膜细胞中的培养上清PAI活性明显增高 ,到 2 4小时达最高值 ( 8.16± 0 .62 )IU/ml,与对照组 ( 2 .2 7± 0 .19)IU/ml相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。同时基因转染组FN( 0 .5 1±0 0 3 )、LN( 1.2 6± 0 .0 7)及Ⅳ型胶原 ( 0 .98± 0 .0 8)水平均较对照组明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 首次建立了系膜细胞PAI 1的过度表达体系 ,证实细胞过度表达PAI 1可以直接导致ECM的积聚。局部PA/PAI活性的变化可能是调节系膜细胞ECM积聚与降解的重要因素。
- 于志恒陈香美廖洪军叶一舟傅博
- 关键词：肾小球膜PAI-1
- 纤溶酶原激活物抑制物-1/绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在系膜细胞的表达被引量：5
- 1999年
- 目的 以绿色荧光蛋白（ Ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ， Ｇ Ｆ Ｐ） 为报告基因，构建纤溶酶原激活物抑制物１（ Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ１ ， Ｐ Ａ Ｉ１） 与 Ｇ Ｆ Ｐ融合基因的真核表达质粒，在活细胞状态下观察 Ｐ Ａ Ｉ１／ Ｇ Ｆ Ｐ融合蛋白在大鼠系膜细胞中表达 。方法 利用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术，从含有编码人类 Ｐ Ａ Ｉ１（ｈ Ｐ Ａ Ｉ１） 全长ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列的质粒ｐ Ｕ Ｃ１９ Ｐ Ａ Ｉ１ 中扩增出ｈ Ｐ Ａ Ｉ１ 的编码区全长ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列，定向克隆至真核表达载体ｐ Ｃ Ｍ Ｘ Ｇ Ｆ Ｐ。利用脂质体为转染载体，将表达质粒转染至体外培养的大鼠系膜细胞。利用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交、 Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹、荧光显微镜直接观察以及纤维蛋白平板等方法检测 Ｐ Ａ Ｉ１／ Ｇ Ｆ Ｐ融合基因在大鼠系膜细胞的表达。结果 转染组大鼠系膜细胞 Ｐ Ａ Ｉ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达、细胞培养上清 Ｐ Ａ Ｉ１ 活性均较对照组明显增高。大鼠系膜细胞表达的融合蛋白 Ｐ Ａ Ｉ１／ Ｇ Ｆ Ｐ 对尿激酶型纤溶酶原激活物（ｕ Ｐ Ａ） 有明显的抑制活性，并能在荧光显微镜下激发绿色荧光。?
- 于志恒陈香美廖洪军叶一舟付博
- 关键词：PAI-1绿色荧光蛋白系膜细胞肾小球
- 金属蛋白酶组织抑制剂1基因转染对系膜细胞表达纤连蛋白和Ⅳ型胶原的影响被引量：14
- 2002年
- 目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1对大鼠肾小球系膜细胞表达纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原的影响。方法 应用亚克隆技术构建正义pLXIN-TIMP-1(PLT)和反义pLXIN-ATIMP-1(PLA)两个逆转录病毒载体,经PA317细胞包装后,得到高滴度的病毒上清,分别感染大鼠系膜细胞,用PCR及Northern杂交鉴定外源基因的整合和表达。Northern杂交及ELISA方法检测大鼠系膜细胞内源性TIMP-1、FN和Ⅳ型胶原的表达。结果 外源TIMP-1基因稳定整合到大鼠肾小球系膜细胞中,并获得高效表达。感染正义TIMP-1基因后,大鼠系膜细胞内源性TIMP-1表达没有变化,细胞外基质成分FN和Ⅳ型胶原的蛋白质水平的表达明显增高;与之相反,感染反义的TIMF-1基因后,大鼠内源性TIMP-1下调,细胞外基质成分FN和Ⅳ型胶原的蛋白质水平的表达明显降低。然而,上述系膜细胞FN和Ⅳ型胶原的mRNA水平均没有变化。结论TIMP-1过表达引起FN和Ⅳ型胶原增多,反义TIMP-1则使FN和Ⅳ型胶原的表达下调。提示反义TIMP-1可通过促进肾脏细胞外基质降解而减轻其积聚,为进一步在某些纤维化肾脏疾病中应用反义TIMP-1进行基因治疗奠定一定的实验基础。
- 林洪丽于志恒傅博吕杨陈香美
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制剂1基因转染纤连蛋白肾小球系膜细胞
- 肾结石大鼠钠/二羧基转运蛋白1的表达及枸橼酸钾防治机制的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 研究肾组织钠/二羧基转运蛋白1(SDCT1)与低枸橼酸尿的关系以及枸橼酸钾的干预作用,探讨肾结石发病的分子机制和防治措施。方法 雄性Wistar大鼠分为对照组、肾结石组及枸橼酸钾干预组。血、尿枸橼酸和草酸采用酶法测定,Northern blot检测大鼠肾组织SDCT1mRNA水平的改变,免疫组织化学观察SDCT1在肾组织的分布及表达变化。结果 与对照组比较,肾结石组第3天尿草酸水平显著升高,枸橼酸水平显著降低,同时肾组织SDCT1mRNA及其蛋白水平上调。第7天SDCT1mRNA及其表达产物增加更为显著,同时尿枸橼酸水平进一步降低,尿钙排泄显著增加,87.5％大鼠有中-大量的草酸钙结石形成。第14天上述改变更为明显,结石形成率达100％。枸橼酸钾干预组各时间点尿草酸水平与肾结石组差异无显著性意义,但尿枸橼酸水平显著高于肾结石组及对照组,肾组织SDCT1mRNA及蛋白表达显著低于肾结石组,与对照组差异无显著性意义;结石形成率显著低于肾结石组;肾小管扩张、炎细胞浸润等病变也明显减轻。结论 肾组织SDCT1表达上调可能是低枸橼酸尿的重要原因,与肾结石的形成有密切关系。枸橼酸钾可下调肾结石大鼠肾组织SDCT1的表达,对肾结石的形成具有明显的干预作用。
- 何娅妮陈香美于志恒吕杨师锁柱王兆霞朱晗玉彭丽霞
- 关键词：肾结石枸橼酸钾
- 国产重组人促红细胞生成素临床疗效观察被引量：1
- 1997年
- 采用随机对照的方法，观察了２５例（对照）和２４例（开放）国产重组人促红细胞生成素（ＥＰＯ）对慢性肾功能衰竭肾性贫血患者的疗效和副作用。结果表明，采用皮下和静脉给药的方法，用国产ＥＰＯ治疗慢性肾功能不全肾性贫血患者总有效率为９３．９％，显效率为６７．３％，有效率为２６．５％，无效率为６．１％，与进口ＥＰＯ疗效相当。国产ＥＰＯ不良反应：透析器凝血发生率为４．０％，内瘘堵塞发生率为８．５％，与进口ＥＰＯ相比无明显差异。
- 陈香美廖洪军高原王美玲李红梅冯均才于志恒刘述文卢英杰周美华周婧
- 关键词：促红细胞生成素药物疗法肾功能衰竭慢性
- 人钠/二羧基转运蛋白1在肾组织的表达变化及其与肾结石发病的关系被引量：12
- 2001年
- 目的 研究肾组织钠 /二羧基转运蛋白 1(hNaDC1)表达变化与肾结石发病的的关系。方法 85例肾结石患者分为、尿枸橼酸正常结石组和低枸橼酸尿结石组。并设 5 0例对照为非结石患者。采用RT PCR及Northern印迹法检测其中部分肾结石患者肾组织的hNaDC1mRNA水平 ;免疫组化检测hNaDC1蛋白表达的变化 ;常规生化方法测定血、尿枸橼酸、草酸等生化指标。结果 低枸橼酸尿结石组结石复发率 (36 .1% ) ,显著高于尿枸橼酸正常结石组 (16 .3% ,P <0 .0 1)。hNaDC1mRNA在正常肾组织中有表达 ,分布于近端肾小管刷状缘 ;低枸橼酸尿结石患者hNaDC1mRNA/18sRNA比值 (0 .6 5± 0 .2 1)显著高于对照组 (0 .36± 0 .11,P <0 .0 1) ;而尿枸橼酸正常结石患者 (0 .4±0 .13)与对照组比较差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;低枸橼酸尿结石组hNaDC1蛋白表达也显著高于对照组及尿枸橼酸正常结石组 (P <0 .0 1) ,而后两组间差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。低枸橼酸尿结石组尿pH值、尿钠水平显著低于尿枸橼酸正常结石组和对照组 ;尿钙、尿草酸水平均显著高于对照组 ,与尿枸橼酸正常结石组无显著差异。结论 肾组织hNaDC1表达上调可能是低枸橼酸尿的重要原因 。
- 何娅妮陈香美于志恒吕杨
- 关键词：肾结石单糖转运蛋白质类肾组织
- 凝血酶上调人肾小球系膜细胞PAI-1表达的细胞内信号转导研究被引量：11
- 1999年
- 为探讨转录因子活化子蛋白１（ＡＰ－１）和相关的信号转导分子在凝血酶诱导人肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）表达中的作用，采用纤维蛋白平板法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、凝胶电泳阻滞实验（ＥＭＳＡ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法，分别检测凝血酶刺激培养的人肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１蛋白质活性和ｍＲＮＡ表达情况，以及ＡＰ－１ＤＮＡ连接活性和ＡＰ－１组成蛋白质ｃ－Ｊｕｎ、ｃ－Ｆｏｓ量的变化。结果发现：①凝血酶呈浓度依赖性的方式促进肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１蛋白质活性和ｍＲＮＡ表达，其效应能被凝血酶的特异性拮抗剂水蛭素阻断；②凝血酶能明显促进转录因子ＡＰ－１的ＤＮＡ连接活性；③ｃｕｒｃｕｍｉｎ、ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ均能在不同程度上抑制ＡＰ－１的ＤＮＡ连接活性，并进而部分逆转凝血酶上调系膜细胞ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达的效应。研究表明，转录因子ＡＰ－１在凝血酶上调人肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１表达的信号转导过程中起着重要的作用，蛋白激酶Ｃ和蛋白酪氨酸激酶可能是凝血酶介导系膜细胞ＡＰ－１活化及ＰＡＩ－１表达的上游信号。
- 何庆南陈香美叶一舟傅博于志恒
- 关键词：肾小球系膜细胞凝血酶PAI-1
