于敏
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 酶切位点缺失的跨膜型TNF-α突变体的构建及其功能的研究被引量：2
- 2010年
- 采用重叠PCR技术,构建TNF转化酶(TACE)酶切位点缺失的Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体,并构建Δ1-12tmTNF-α-pcDNA3.0和Δ1-9,K11EtmTNF-α-pcDNA3.0重组质粒。通过ELISA、MTT、Western blot技术,研究2种突变体生物学功能的变化。结果显示Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α都不能被TACE剪切,Δ1-12tmTNF-α的胞毒效应明显低于野生型,且不能诱导NF-κB活化。而Δ1-9,K11EtmTNF-α既保留了野生型tmTNF-α的胞毒效应,又能诱导NF-κB活化。以上表明Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体既丧失被酶解的能力,又能保留tmTNF-α正反向信号传递能力,为进一步研究tmTNF-α生物学功能提供了有力的工具。
- 陈克清刘牧云刘涛于敏冯玮姜晓丹李卓娅王晶
- 关键词：TMTNF-Α酶切位点
- 脂筏对跨膜型TNF-α信号的影响被引量：4
- 2010年
- 目的构建仅定位在脂筏内或外的tmTNF-α突变体,研究脂筏与tmTNF-α生物学功能的关系。方法通过重组PCR,构建C-47A-tmTNF-α-pIRES2-EGFP,cav-tmTNF-α-pIRES2-EGFP重组质粒。采用激光共聚焦观察定位、蔗糖密度梯度离心法提取脂筏、MTT比色法检测胞毒。结果获得了预期突变,且无任何其它点突变,移码及缺失突变的突变体。tmTNF-α部分定位在脂筏内,效应细胞的胞毒与tmTNF-α定位在脂筏内外无关,而破坏靶细胞脂筏结构导致胞毒效应下降,且与ICAM-1相关。结论效应细胞的胞毒与脂筏无关,而靶细胞与脂筏密切相关,该研究有助于进一步认识tmTNF-α介导的生物学功能与脂筏间的关系。
- 刘涛陈克清张述于敏冯玮姜晓丹尹丙姣李卓娅王晶
- 关键词：脂筏信号
- TNFR1及其突变体重组质粒的构建及肿瘤生物学功能的研究
- 2011年
- [目的]构建TNFR1及其突变体重组质粒,研究TNFR1胞浆段结构域与sTNF-α肿瘤生物学功能的关系。[方法]通过RT-PCR和重叠PCR,构建TNFR1-pEGFP-N1,Y236A-TNFR1-pEGFP-N1、ΔNSD-TNFR1-pEGFP-N1和ΔDD-TNFR1-pEGFP-N1。采用荧光显微镜观察TNFR1内吞、流式细胞术检测表达率、MTT比色法检测胞毒。[结果]获得了TNFR1全长基因及相关突变体的重组质粒,无任何其他点突变,移码及缺失突变。以这些质粒为工具进行生物学检测,提示野生型TNFR1可以介导sTNF-α内化,Y236A-TNFR1却不能,ΔNSD-TNFR1和ΔDD-TNFR1同样影响sTNF-α对靶细胞的胞毒作用。[结论]TNFR1内化结构域、NSD和DD功能域对sTNF-α杀伤肿瘤细胞的功能起着重要的作用。该研究有助于进一步认识sTNF-α介导的杀瘤效应与TNFR1的关系,并为深入研究tmTNF-α通过TNFR1介导的杀瘤机制提供重要的实验工具,从而为肿瘤基因治疗提供新的靶点。
- 陈克清于敏胡雪娜冯玮姜晓丹尹丙姣李卓娅王晶
- 关键词：内吞重组质粒
- 质粒电穿孔转染条件的选择被引量：11
- 2009年
- 杨薇王迪陈克清于敏王桂华胡俊波王晶
- 关键词：电穿孔转染质粒
