于敏
- 作品数：2 被引量：18H指数：2
- 供职机构：上海医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：化学工程医药卫生更多>>
- 重组葡激酶(r-Sak)的分离、纯化和结晶被引量：17
- 1997年
- 通过葡激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 ,表达产物 r- Sak以可溶性、活性状态存在于胞浆内。本文报道用离子交换和凝胶过滤纯化 r- Sak的简易路线 ,从每升发酵液可得纯度 98%以上 ,比活性 10万 HU/ mg的 r- Sak30 0 mg以上 ,比国外报导道 6倍。r- Sak的理化特性和 N末端 15个氨基酸顺序与天然 Sak十分相似。利用纯化的 r- Sak已成功地制备了晶体。
- 汤其群张小璇于敏宋后燕
- 关键词：葡激酶纯化药物
- 一种新型葡激酶分子的设计基因构建表达纯化及性质研究被引量：2
- 2000年
- 在葡激酶构效关系的研究过程中发现 ,葡激酶易形成二聚体 ,甚至多聚体 ,不利于葡激酶的临床应用。为了探究聚合体的形成机制以研制不易聚合的新型葡激酶分子 ,在葡激酶X射线晶体衍射结构模型的基础上 ,采用分子对接软件GRAMMV1 0 3,以高分辨率整体对接方式预测了葡激酶二聚体可能的结合区。结合区主要有两种可能的形成方式 ,通过强疏水相互作用及氢键结合。根据模型设计了旨在降低聚合能力的葡激酶突变体RGD -Sak ,将F1 1 1置换为D1 1 1 ,并且改变K1 0 9为R1 0 9,恰好使分子中形成RGD结构 ,使新型分子还可能具有抑制血小板聚集作用。利用定点突变及DNA重组技术 ,构建了RGD -Sak基因 ,并利用大肠杆菌原核表达系统进行了高效表达。RGD -Sak以包涵体形式存在 ,包涵体经洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,稀释复性 ,离子交换色谱一步分离得到电泳纯的RGD -Sak ,纯度达 95%以上 ,分子量与理论值相符 ,比活性 5× 1 0 4 HU/mg。RGD -Sak与纤溶酶形成的复合物催化纤溶酶原的Km、Kcat值分别为 1 2 40 μmol/L、 0 81s- 1 。RGD -Sak显示了很弱的聚合能力。此研究为研制防止二聚体形成的新型葡激酶分子打下了基础。
- 宋钢于敏莫炜宋后燕
- 关键词：葡激酶分子设计定点突变基因构建溶栓药物
