刘文滨
- 作品数：12 被引量：61H指数：4
- 供职机构：复旦大学附属中山医院消化科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法 双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型。应用巢式RT PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP 1质粒并测序鉴定。应用脂质体介导重组质粒和 pcDNA3空质粒转染HSC ,经含 40 0 μg/mlG418的DMEM培养液筛选 3～ 4周 ,另设立空白对照组。Northernblot和Westernblot检测筛选后的HSC中TIMP 1表达情况 ;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性 ;应用Westernblot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析。结果 外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP 1的表达 ,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果。TIMP 1/GAPDH比值分别为 0 .67,2 .41和 2 .97(mRNA水平 ,P <0 .0 5)。TIMP 1/ β actin比值分别为0 .3 1,0 .98和 1.3 2 (蛋白质水平 ,P <0 .0 5)。外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性 ,酶活性分别为 0 .3 0 49,0 .14 11和 0 .1196(P <0 .0 5)。HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少。Ⅰ型胶原 / β actin比值分别为 0 .63 ,1.78和 1.92 (P <0 .0 5)。Ⅲ型胶原 / β
- 刘文滨王吉耀杨长青王逸青蒋炜贺伯明郭津生
- 关键词：肝星形细胞胶原梯度离心法基因重组技术细胞外基质
- 反义转化生长因子βⅡ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响被引量：14
- 2004年
- 目的 观察反义转化生长因子βⅡ型受作(TGF βRⅡ)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法 运用重组DNA技术中构建反义TGF βRⅡ真核细胞表达质粒,采用猪血清腹腔注射制备免疫性大鼠肝纤维化模型,实验动物分为肝纤维化模型组、反义TGF βRⅡ治疗组、pCDNA3对照组及正常对照组。反义TGF βRⅡ质粒和pCDNA3空质粒与糖化多聚赖氨酸偶联后经尾静脉分别导入大鼠体内,通过northern blot、RT-PCR、Western blot检测外源导入质粒在肝组织中的表达,检测血清转化生长因子β1(TGFβ1)、肝组织羟脯氨酸测定,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与Van Gieson染色观察反义TGF βRⅡ质粒对大鼠肝纤维化的影响。 结果 反义TGF βRⅡ表达质粒可在肝组织中获得确切表达,其表达可使反义治疗组血清TGF β1含量下降,反义TGF βRⅡ治疗组为(23.16 ± 3.13)ng/ml,模型组为(32.96±3.79)ng/ml,F=36.73,P<0.01。肝组织羟脯氦酸含量下降,治疗组为(0.17±0.01)mg/g,模型组为(0.30±0.03)mg/g,F=15.48,P<0.01。减少了肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积,治疗组Ⅰ型胶原为650.26±51.51,Ⅲ型胶原为661.5 8±55.28,模型组Ⅰ型胶原为1209.44±16.60,Ⅲ型胶原为1175.14±121.44,F值分圳为69.87、70.46,P<0.01。并促进反义治疗组肝脏病理形态一定程度的改善。
- 蒋炜王吉耀杨长青刘文滨王逸青贺伯明
- 关键词：质粒肝纤维化
- 实验性肝纤维化的反义基因治疗研究
- 王吉耀蒋炜刘文滨杨长青王逸青贺伯明
- 该课题应用重组DNA技术构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒，并将其转移至纤维化大鼠肝内和体外培养的大鼠肝脏星形细胞中，结果显示构建的反义TIMP-1表达质粒可在肝星形细胞中及肝纤维化大鼠体内确切表达，导致肝星形细胞培养...
- 关键词：
- 关键词：肝纤维化反义基因治疗
- NF-kB与肝星状细胞凋亡被引量：10
- 2001年
- 肝纤维化类似其他组织实质细胞的损伤修复过程,其本质是肝脏细胞外间质纤维生成和降解失平衡的结果.肝星状细胞(HSCs)是产生细胞外基质的主要来源,HSCs 的活化和增殖是肝纤维化发生的中心事件.越来越多的研究认为 HSCs 的活化和增殖与其凋亡受到抑制有关,而核因子 NF-kB 能抑制多种类型的细胞凋亡,且在激活态 HSCs 中活性持续存在,这样通过与核因子 NF-kB 的相互作用来促进 HSCs 的凋亡,最终减少 HSCs的数量以逆转肝纤维化的发展,将可能成为肝纤维化治疗的新的靶点.
- 刘文滨王吉耀
- 关键词：细胞学星形细胞脱噬作用NF-ΚB
- 反流性食管炎及食管癌患者活检标本p16基因表达及意义
- 2001年
- 陈贤鸿陈锡美刘文滨
- 关键词：反流性食管炎食管癌P16基因
- 原发性胆汁性肝硬化的临床及病理学特征被引量：25
- 2002年
- 目的分析原发性胆汁性肝硬化患者的临床及病理学特征,以有助于提高对该病的认识及诊断. 方法对37例原发性胆汁性肝硬化患者临床资料及其中20例肝穿刺病理资料进行回顾性分析. 结果原发性胆汁性肝硬化患者中女性35例,确诊时平均年龄为 50.4±8.9岁,常见临床表现多为黄疸(70.3%)、乏力(70.3%)、瘙痒(56.8%).所有患者γ-谷氨酰转肽酶(GGT)与碱性磷酸酶均有显著升高(中位值分别为467.50U/L和424.00U/L).94.6%(35/37)患者血清总胆汁酸水平、86.5% (32/37) 患者血清胆固醇、86.5%(32/37)患者血清IgM有明显升高.91.9%(34/37)患者血清线粒体抗体和(或)线粒体抗体M2亚型阳性.20例原发性胆汁性肝硬化患者肝穿刺病理主要表现为:纤维化85%(17/20)、小叶间胆管损伤65%(13/20)、单核细胞炎症65%(13/20)、碎屑样坏死50%(10/20)、胆色素聚集45%(9/20).应用非参数检验分析示GGT升高与病理分期(Z＝-3.099,P＝0.002)及小叶间胆管损伤程度相关(Z＝2.655,P＝0.01). 结论原发性胆汁性肝硬化中年女性多见,临床工作中需综合临床、生物化学、免疫学及病理情况及时准确诊断.而GGT可部分反映PBC的组织学改变的严重程度.
- 王吉耀蒋炜高虹贺伯明刘文滨
- 关键词：原发性胆汁性肝硬化病理学抗线粒体抗体Γ-谷氨酰转肽酶PBC
- 反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对大鼠肝星状细胞功能的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 观察反义转化生长因子 (TGF) βⅠ型受体 (TβRⅠ )表达质粒对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响。方法 双酶灌注和梯度离心法分离大鼠HSC ,将构建的反义TβRⅠ真核细胞表达质粒与 pcDNA3空质粒经脂质体转染培养活化的HSC ,通过RT PCR、Western印迹检测外源导入质粒在HSC中的表达 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法检测细胞增殖情况 ,ELISA法检测TGF β1含量变化 ,并应用Western印迹检测HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。结果 反义TβRⅠ真核细胞表达质粒可抑制活化HSC中TβRⅠmRNA及蛋白表达。与 pcDNA3转染组相比 ,反义TβRⅠ质粒表达可抑制HSC增殖 (P <0 .0 1) ,降低TGF β1含量 (P <0 .0 5 ) ,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌 (P <0 .0 5 )。结论 重组反义TβRⅠ表达质粒可在HSC中获得较好表达 ,并可显著抑制HSC增殖及细胞外基质分泌。
- 蒋炜王吉耀杨长青刘文滨王逸青
- 关键词：HSC反义鼠肝肝星状细胞真核细胞表达质粒
- 端粒酶逆转录酶在原发性结肠癌中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 探讨原发性结肠癌组织中端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)的表达和端粒酶活性的关系以及在结肠癌分子生物学诊断的临床意义。方法 用免疫组化和TRAP法分别观察 5 4例原发性结肠癌组织和正常结肠组织中hTRT和端粒酶的活性 ,比较分析它们的相关性。结果 hTRT阳性率83% (4 5 / 5 4) ,端粒酶活性阳性率 85 % (4 6 / 5 4) ,在结肠癌组中 3例术前化疗病人hTRT表达呈 2例弱阳性 1例阴性 ,结肠癌淋巴结转移的hTRT阳性率达 92 % ,10例正常结肠组织均为阴性。结论 hTRT在结肠癌中具有癌细胞的特征性 ,并与端粒酶活性呈正相关。hTRT可作为结肠癌诊断的敏感的指标 。
- 陈锡美刘文滨张霞
- 关键词：结肠肿瘤人类端粒酶逆转录酶端粒酶活性HTRT
- 溃疡性结肠炎患者基质金属蛋白酶-2,9和抑制因子-1,2的表达及其意义被引量：7
- 2003年
- 目的 在转录和蛋白水平检测基质金属蛋白酶 (MMP) 2 ,9和特异性组织抑制因子(TIMP) 1,2在溃疡性结肠炎 (UC)患者和正常志愿者肠粘膜中的表达情况及活性变化。方法 对病理证实的 2 2例UC和 2 0名健康志愿者在内窥镜下取活检 ,采用NorthernBlot和WesternBlot法分别对MMP 2 ,9及TIMP 1,2进行检测 ,并采用明胶酶谱法测定MMP 2 ,9活性。结果 MMP 2 ,9和TIMP 1在正常肠粘膜中均呈现低表达 ,在患者肠粘膜中表达显著升高 (P <0 .0 1) ,而TIMP 2在两种粘膜中的表达量无明显差别。明胶酶谱结果显示MMP 2 ,9在后者中的活性较前者中显著升高 (P <0 .0 5 ) ,且与炎症程度相关。结论 MMP 2 ,9在UC肠炎肠粘膜上皮重塑过程中具有重要作用 。
- 陈锡美刘文滨陈文骏王志荣朱风尚张霞
- 关键词：溃疡性结肠炎基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶组织抑制因子活组织检查
- 胃癌多药耐药相关蛋白基因及谷胱甘肽S转移酶-πmRNA表达和意义被引量：1
- 2001年
- 刘文滨陈锡美冯久贤李春海
- 关键词：胃癌多药耐药相关蛋白基因谷胱甘肽S转移酶MRNA
