唐根云
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省科技计划工业攻关项目珠海市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 三种不同种属β-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母中克隆表达与酶活比较研究
- 利用纤维素酶水解纤维素生产燃料乙醇是一种有前景的技术,但是该技术需要内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡萄糖苷酶协同作用,才能起到较好的水解效果。然而产纤维素酶活性较高的微生物β-葡萄糖苷酶活性低,含量少,成为纤维素酶降...
- 唐根云
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶酿酒酵母
- 文献传递
- 绿色木霉BGL Ⅰ基因在酿酒酵母中的克隆表达及其纤维素乙醇发酵被引量：7
- 2009年
- 采用反转录PCR方法从绿色木霉AS3.3711的总mRNA中获得了编码β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGLⅠ)的基因bgl1。序列测定表明该基因片段长2 235 bp,编码744个氨基酸残基,与里氏木霉的bgl1序列完全相同。将其插入高拷贝数整合型表达载体PScIKP,构建了重组质粒PScIKP-bgl1。线性化后转化工业酿酒酵母AS2.489菌株,利用高浓度G418筛选高抗转化子,经SDS-PAGE蛋白电泳证明获得了能高效稳定分泌表达重组BGLⅠ的转化子。重组BGLⅠ酶能直接水解培养液中的纤维二糖,在84 h测得酶活最大值为0.978 u/mL。重组BGLⅠ酶最佳反应温度为60℃,最适反应pH为4.0～5.0,并且能以纤维二糖为惟一碳源发酵乙醇,发酵90 h能够用重铬酸钾氧化比色法检测到乙醇的体积分数为0.51%。结果表明:成功克隆并在酿酒酵母中表达了一种高活性的β-葡萄糖苷酶,对于工业上直接利用纤维素为惟一碳源发酵生产乙醇的研究有重要意义。
- 刘泽寰唐根云全艳彩龚映雪肖文娟王峻梅
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母乙醇
- 一叶萩型生物碱二聚体类化合物或其可药用盐及其制法和应用
- 本发明公开了一种一叶萩型生物碱二聚体类化合物或其可药用盐及其制法和应用。所述一叶萩型生物碱二聚体类化合物或其可药用盐具有如式(1)所示的化学结构：<Image file="DDA0000680449630000011.G...
- 叶文才陈卫民师蕾王英唐根云刘鑫董晓黄小杰张文
- 文献传递
- 绿色木霉EGⅢ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达被引量：2
- 2009年
- 通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%。将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析。结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达。
- 刘泽寰台艳唐根云全艳彩王峻梅肖文娟龚映雪
- 关键词：酿酒酵母绿色木霉
- 酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用被引量：6
- 2010年
- 构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2,克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec.该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.
- 龚映雪台艳肖文娟王峻梅唐根云全艳彩刘泽寰
- 关键词：纤维素生物转化绿色木霉内切葡聚糖酶纤维二糖水解酶
- 绿色木霉CBHⅡ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：7
- 2009年
- 采用反转录聚合酶链式反应的方法从绿色木霉中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)的编码基因cbh2.将该基因片段接入酿酒酵母整合型表达载体pScIKP中,得到重组质粒pScIKPc-bh2.电转化酿酒酵母菌株,通过G418浓度梯度筛选出高抗转化子.采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测CBHⅡ蛋白的表达,并采用羧甲基纤维素糖化力法检测重组CBHⅡ的酶活.实验结果表明:该基因大小为1 416 bp,编码有472个氨基酸残基,并已将序列提交GenBank,登录号为DQ864992.SDS-PAGE分析发现重组CBHⅡ成功分泌到了胞外,其相对分子质量约为70 000.培养液中的酶活最高可达7.71U/mL,其作用的最适pH值为5.0,最适反应温度为65℃,且具有较好的热稳定性.
- 刘泽寰全艳彩唐根云龚映雪肖文娟王峻梅
- 关键词：绿色木霉编码基因酿酒酵母
- 一叶萩型生物碱二聚体类化合物或其可药用盐及其制法和应用
- 本发明公开了一种一叶萩型生物碱二聚体类化合物或其可药用盐及其制法和应用。所述一叶萩型生物碱二聚体类化合物或其可药用盐具有如式(1)所示的化学结构：<Image file="DDA0000680449630000011.G...
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