张宏
- 作品数:8 被引量:26H指数:4
- 供职机构:第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金军队科研计划项目更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 反义DNA甲基转移酶1改变肝癌SMMC-7721细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性及其机理的研究被引量:3
- 2003年
- 目的 观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法 台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、bax和bad蛋白的表达。结果 转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞与转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞相比 ,活细胞率显著降低 (P <0 .0 5,P <0 .0 1) ,凋亡率显著增高 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。流式细胞仪结果显示 ,转入反义DNMT1基因片段的SMMC 772 1细胞 ,其bax和bad表达 ,尤其是bax的表达 ,明显高于转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞 ,但对bcl 2的表达无影响。结论 转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞对TRAIL的敏感性明显增强 。
- 李小安房殿春张宏杨金亮司佩任张汝刚杨柳芹
- 关键词:肝癌SMMC-7721细胞肿瘤坏死因子凋亡敏感性
- 正反义人DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶基因片段真核表达载体的构建被引量:6
- 2001年
- 张宏肖文华梁后杰
- 关键词:真核表达载体反义DNA
- 正反义人DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶基因真核表达载体的构建
- 目的:构建正义和反义人 DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶 [DNA(Cytosine-5)-methyltransferase,DNMT]基因真核表达载体。方法:用将限制性酶切位点添加到 PCR 产物分子上的方法,分别将 ...
- 肖文华张宏
- 关键词:甲基转移酶类反义基因
- 文献传递
- 人DNA MTase反义基因转染对肝癌细胞DNA MTase基因mRNA表达的影响被引量:6
- 2002年
- 目的 观察人DNAMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1内源性DNAMTase基因mRNA表达的影响。方法 将构建的包含正、反义DNAMTase基因片段的真核表达载体用脂质体法将其转染入肝癌细胞系SMMC 772 1 ;采用RT PCR法观察DNAMTase基因mRNA表达变化。结果 PCR法扩增外源性NeoR基因证实用脂质体法成功将重组载体转染入细胞 ;RT PCR法检测DNAMTase基因mRNA表达 ,显示转染反义DNAMTase基因片段的SMMC 772 1细胞中DNAMTase基因mRNA表达下调。结论 人DNAMTase反义基因转染是一种有效、可靠的抑制肝癌细胞系SMMC 772 1DNAMTase基因表达的方法。它为更多了解DNAMTase在肝癌发生。
- 张宏肖文华梁后杰房殿春杨仕明罗元辉
- 关键词:DNA甲基转移酶反义DNA肝癌细胞系
- 人DNA MTase反义基因转染诱导E-Cadherin基因启动子区域去甲基化被引量:2
- 2002年
- 目的 观察人DNAMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1E Cadherin基因启动子区域甲基化状态的影响。方法 采用脂质体法将已构建的包含正、反义DNAMTase基因片段的真核表达载体转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;用甲基化特异的PCR法检测E Cadherin基因启动子区域甲基化状态的改变。结果 PCR法扩增外源性NeoR基因证实用脂质体法成功将重组载体转染入细胞 ;甲基化特异的PCR法检测显示转染反义DNAMTase基因片段的SMMC 772 1细胞中的E Cadherin基因启动子区域呈现去甲基化状态。结论 人DNAMTase反义基因片段可诱导E Cadherin基因启动子区域去甲基化 ;实验结果有助于进一步了解DNAMTase在肝癌发展中的作用。
- 张宏肖文华梁后杰房殿春杨仕明罗元辉
- 关键词:反义DNAE-CADHERIN去甲基化SMMC-7721
- 人DNA MTase反义基因转染对诱导肝癌SMMC7-721细胞凋亡的影响被引量:4
- 2002年
- 目的 观察人DNAMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡的影响。方法 采用脂质体法将构建的包含正、反义DNAMTase基因片段的真核表达载体转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用MTT法绘制生长曲线 ;流式细胞法和原位末端标记法检测细胞凋亡改变。结果 PCR法扩增外源性NeoR基因证实用脂质体法成功将重组载体转染入细胞 ;生长曲线显示转染反义DNAMTase基因片段的SMMC 772 1细胞增殖速度减慢 ;流式细胞法测得其凋亡率由 3 1%增加到 13 5 %。末端标记法也显示其凋亡指数增加。结论 人DNAMTase反义基因转染可诱导肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡。
- 张宏肖文华梁后杰房殿春杨仕明罗元辉
- 关键词:DNA甲基转移酶反义DNA肝癌细胞系细胞凋亡肝癌SMMC-7721
- 反义甲基转移酶基因片段增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导对肝癌细胞的作用
- 2003年
- 目的 观察转入反义甲基转移酶 (DNMT) 1基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变。方法 使用脂质体法将真核表达载体 pCl neo转入肝癌SMMC 772 1细胞内 ,PCR法鉴定载体的转入 ,锥虫蓝排斥试验检测活细胞率 ,末端脱氧核苷酰转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL法 )检测细胞凋亡率。结果 PCR法证明载体成功转入肝癌SMMC 772 1细胞内 ,转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞与转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞相比 ,活细胞率显著降低 (P <0 .0 5 ) ,凋亡率显著增高 (P <0 .0 5 )。结论 转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞对TRAIL的敏感性明显增强。
- 李小安房殿春张宏肖文华司佩任张汝刚杨柳芹
- 关键词:肝癌癌细胞肿瘤坏死因子凋亡诱导配体DNA甲基化
- 人DNA MTase反义基因转染诱导E-钙黏附蛋白高表达被引量:8
- 2002年
- 目的 观察人DNAMTase反义基因转染后肝癌细胞系SMMC 772 1E 钙黏附蛋白表达的变化。方法 用基因重组技术构建包含人DNAMTase正、反义基因片段的真核表达载体 ;采用脂质体法将其转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用RT PCR法观察DNAMTase基因mRNA、E 钙黏附蛋白基因mRNA表达变化 ;以甲基化特异的PCR法检测E 钙黏附蛋白基因启动子区域甲基化状态的改变 ;以免疫组化和流式细胞法检测E 钙黏附蛋白表达变化。结果 正、反义真核表达载体构建成功并转染入SMMC 772 1细胞 ,其中DNAMTase基因mRNA表达减低 ,E 钙黏附蛋白基因mRNA表达上调 ,E 钙黏附蛋白基因启动子区域呈现去甲基化状态 ,E 钙黏附蛋白表达上调。结论 抑制DNAMTase基因的表达可使肝癌SMMC 772 1细胞中E 钙黏附蛋白基因启动子区域去甲基化和表达增加 ;DNAMTase通过诱导启动子区域高甲基化 ,可使E
- 张宏肖文华梁后杰房殿春杨仕明罗元辉
- 关键词:反义DNA甲基转移酶E-钙黏附蛋白基因转染