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徐正中: 作品数：19 被引量：106H指数：6; 供职机构：扬州大学生物科学与技术学院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学文化科学生物学更多>>

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牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用被引量：16: 2010年; 以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。; 陈祥牛中伟徐正中孟闯孙林黄金林潘志明焦新安; 关键词：Γ-干扰素单克隆抗体

γ-干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较被引量：29: 2011年; 目的评价γ-干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应和比较皮试变态反应检测在牛结核病检疫过程中的效果。方法在牛结核病检疫过程中,953头奶牛同时进行γ-干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应检测,其中的190头奶牛进行了比较变态反应试验。结果在同步进行γ-干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应检测的953头奶牛中,两者的阳性符合数为147头,阳性符合率为63.8%(294/461),两者的阴性符合数为639头,阴性符合率为88.4%(1 278/1 445);在进行比较皮试变态反应的190头奶牛中,γ-干扰素试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为3头,阳性符合率为75%(6/8),阴性符合数为185头,阴性符合率为99.5%(370/372);单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为4头,阳性符合率为72.7%(8/11),阴性符合数为183头,阴性符合率为99.2%(366/369)。结论单纯颈部皮试变态反应有较高的检出率;同单纯颈部皮试变态反应相比,比较皮试变态反应有较好的特异性;γ-干扰素试验在保持较高灵敏度的同时,具有较好的特异性。; 陈祥徐正中时振华范峰蒋锁俊孟闯黄根成单锋丽焦新安; 关键词：牛结核

重组牛γ-干扰素单克隆抗体的研制被引量：14: 2009年; 为制备针对重组牛γ-干扰素(rBoIFN-γ)的单克隆抗体(mAb),以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BoIFN-γ为免疫原,用纯化的rGST-BoIFN-γ为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIFN-γ的mAb。结果获得13株稳定分泌抗BoIFN-γmAb的细胞株,命名为1C12、1F7、1G5、3E6、4D5、5E11、5G4、6F8、6G6、7E9、8D3、8F8和9G11。腹水的效价除单抗9G11外,其余效价都在1∶80 000以上;除5G4mAb亚类为IgG2b外,其余均为IgG1。Dot-ELISA结果表明,所得单抗只与融合蛋白rHis-BoIFN-γ和rGST-BoIFN-γ反应,而不与其它重组细胞因子和对照细菌反应,显示其良好的特异性。Western blot显示所获单抗能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时所获单抗均能与牛IFN-γ标准品反应。13株单抗均为针对rBoIFN-γ的特异性mAb,为进一步研究rBoIFN-γmAb在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定基础。; 张成全陈祥牛中伟杨卫冲徐正中孟闯潘志明黄金林焦新安; 关键词：原核表达单克隆抗体

DNA免疫法制备抗鸡IL-4单克隆抗体: 2017年; 为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检测抗原,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞株;采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆,体内诱生腹水法大量制备腹水单抗;采用ELISA、Western blot法分析mAbs的特异性。结果本研究共获得3株抗ChIL-4mAbs:1C11、5C1和3E10,其亚类分别为IgM、IgM和IgG2a,腹水效价为(1.6~6.4)×104。间接ELISA及Western blot结果显示,所获得的mAbs均只识别重组ChIL-4,而不能识别其他无关抗原,表明所获得的3株mAbs均特异性针对ChIL-4。该mAbs的获得为建立检测ChIL-4的生物学方法及进一步研究ChIL-4的生物学功能提供了有效的生物材料。; 戴华闫加庆张海霞徐正中陈祥焦新安; 关键词：ELISA 单克隆抗体

梅花鹿γ干扰素双单抗夹心ELISA方法的初步建立被引量：3: 2013年; 为利用抗牛γ干扰素(BoIFN-γ)特异性单克隆抗体(MAb)建立检测梅花鹿γ干扰素(CerIFN-γ)的双抗体夹心ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法从双阳型梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA中扩增出CerIFN-γcDNA,通过原核表达系统表达重组CerIFN-γ蛋白(rHis-CerIFN-γ);通过间接ELISA方法评价其与抗BoIFN-γMAb的反应性,筛选出与之反应最佳的两株MAb建立双抗体夹心ELISA检测方法。基因序列比对显示CerIFN-γ(JQ408441)与BoIFN-γ的同源性为95.6%,氨基酸序列的同源性为91.6%;SDS-PAGE检测结果显示CerIFN-γ在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效可溶性表达,大小为23 ku;间接ELISA结果显示42株MAb中有15株与rHis-CerIFN-γ反应性较好,其中1C12和5E11两株抗体结合活性最高;采用MAb 1C12为捕获抗体,以生物素标记的MAb 5E11为检测抗体建立的用于检测CerIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法可检出3.05 ng/100μL的rHis-CerIFN-γ。本研究所建立的检测CerIFN-γ双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究CerIFN-γ及相关疾病提供了实验手段。; 解晓莉徐正中孟闯单锋丽单法陈祥焦新安; 关键词：单克隆抗体夹心ELISA

沙门菌逃逸宿主天然免疫应答机制的研究进展被引量：4: 2020年; 沙门菌是重要的食源性病原菌,其流行严重威胁着全球公共卫生安全。天然免疫应答对于宿主抵御沙门菌的感染具有重要的作用,但是沙门菌已演化出一系列逃逸宿主天然免疫应答的策略,使其在宿主体内定植,并得以持续性感染。本文对由受体(TLRs、NLRs和RIPs)、细胞因子(IL-22和IL-4)和哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路介导的沙门菌逃逸天然免疫应答的机制研究进展进行阐述,期望为沙门菌的预防与治疗提供新的研究思路。; 徐诺周帮月史艺潘兴元秦涛徐正中阴银燕; 关键词：沙门菌免疫逃逸 TOLL样受体

牛γ干扰素的表达及其抗病毒活性测定: 通过RT-PCR从经ConA刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛γ-干扰素(BoIFN-γ)cDNA，克隆到真核载体pVAXl中，测序结果显示pVAXl中的插入序列BoIFN-γ基因与已报道序列一致。用重组质粒p...; 徐正中陈祥孟闯孙林黄金林潘志明耿士忠焦新安; 关键词：基因表达抗病毒活性重组质粒

牛γ干扰素的表达及其抗病毒活性测定被引量：11: 2011年; 通过RT-PCR从经ConA刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛γ干扰素(BoIFN-γ)cDNA,克隆到真核载体pVAX1中,测序结果显示pVAX1中的插入序列BoIFN-γ基因与已报道序列一致。用重组质粒pVAX1-BoIFN-γ转染COS-7细胞并进行间接免疫荧光试验鉴定,结果显示BoIFN-γ在COS-7细胞中得到成功表达。将BoIFN-γ基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+)、pGEX-6p-1后,分别转化重组表达菌BL21(DE3)、BL21后,通过对表达条件的优化,SDS-PAGE分析表明两种重组蛋白均可实现可溶性表达,大小分别为23 kDa和43 kDa。将含信号肽BoIFN-γ基因克隆到转座载体pFastBacTM1中并转化DH10Bac,通过位点特异性转座将BoIFN-γ基因整合到穿梭载体Bacmid中并通过脂质体转染Sf9昆虫细胞,产生重组杆状病毒rBac-BoIFN-γ,重组病毒传代扩增感染Sf9细胞后,通过间接免疫荧光试验证实BoIFN-γ在杆状病毒系统中获得表达。使用MDBK/VSV细胞系统测定rHis-BoIFN-γ、rGST-BoIFN-γ以及rBac-BoIFN-γ的抗病毒活性,其效价分别达到8.389×107 U/mg、6.554×105 U/mg、4.096×104 U/mL,3种具有较高的抗病毒活性重组牛γ干扰素的获得为其开发应用提供了重要的生物材料。同时使用单克隆抗体5G4和3E6,建立了BoIFN-γ的双抗夹心ELISA检测方法并绘制了标准曲线,可定量分析BoIFN-γ的抗病毒活性,为其临床应用及相关研究提供了重要的方法。; 徐正中陈祥单锋丽孟闯孙林黄金林潘志明耿士忠焦新安; 关键词：杆状病毒系统抗病毒活性 ELISA

ZntR调控副溶血弧菌锌稳态、氧化应激抗性和毒力: 2024年; 【目的】探究金属调节因子ZntR对副溶血弧菌金属稳态的调控作用,明确其对细菌氧化应激抗性和毒力的影响。【方法】采用生长曲线分析和菌体内金属含量测定方法,探究ZntR对副溶血弧菌金属稳态的调控作用;通过生长曲线分析探究ZntR对副溶血弧菌氧化应激抗性的影响;利用斑马鱼竞争感染试验评估ZntR对副溶血弧菌毒力的影响;通过转录组测序鉴定ZntR调控的基因。【结果】zntR基因缺失株(ΔzntR)在锌、镍过量和铁限制条件下表现出生长缺陷,其生长缺陷均与锌稳态紊乱有关;在ΔzntR中超表达zntA促进其在锌、镍过量和铁限制条件下的生长;在锌过量的情况下,ΔzntR对H2O2诱导氧化应激的抗性减弱;在斑马鱼竞争感染试验中,ΔzntR的毒力下降;转录组测序结果显示,ZntR调控一些毒力相关基因的表达。【结论】ZntR调控副溶血弧菌锌稳态,并促进细菌氧化应激抗性和毒力。; 王梦娴翟怡梦邱军徐正中陈祥郑成坤焦新安; 关键词：副溶血弧菌毒力

小鼠Flt3配体的原核表达及其在不同亚型树突状细胞制备中的应用被引量：2: 2016年; 目的原核表达小鼠Flt3配体,分析其在不同亚型DCs体外诱导中的应用潜能,为不同亚型DCs的深入研究提供实验资料。方法 PCR扩增flt3l基因,构建pCold-flt3l质粒,转化大肠埃希菌BL21（DE3）诱导表达并纯化。重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,并用于小鼠骨髓源DCs的诱导制备,流式细胞术分析不同DC亚型相关分子标志以及CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,同时ELISA测定IL-12和IFN-α的表达。结果 SDS-PAGE结果表明目的蛋白成功表达,纯化后纯度达93.3%,Western blot结果表明其具备良好的免疫反应性。同时,该蛋白能诱导小鼠骨髓细胞分化为较高比例（约60%）的DCs,且包含cDCs（ CD11c＋CD45RA-）和pDCs（ CD11c＋CD45RA＋）亚型；LPS刺激后2种DC亚型均上调CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,且分泌较高水平的 IL-12和IFN-α。结论本研究成功获得重组小鼠Flt3配体蛋白,可用于制备具有良好生物学功能的cDCs和pDCs亚型,为下一步研究提供基础材料。; 孟闯王小燕徐正中刘佳莹胡茂志潘志明陈祥焦新安; 关键词：树突状细胞 FLT3配体

徐正中

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