施庚寿
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- mWAP-hLTF杂合基因座载体的构建及其在转基因小鼠乳腺中表达的研究
- 人乳铁蛋白(LTF)富含于人母乳初乳中,具有广谱抗菌、调节体内铁平衡、促进细胞生长等广泛生理作用。由于来源的问题,因而生产的成本很高,价格昂贵。利用动物乳腺生物反应器来生产不仅维持生产的成本低,而且产量高,能够进行翻译后...
- 施庚寿
- 关键词：细菌人工染色体乳清酸蛋白乳铁蛋白
- 文献传递
- 乳腺特异性表达载体及其构建方法
- 本发明公开了一种乳腺特异性表达载体及其构建方法。本发明提供的乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M<Sub>0</Sub>；M<Sub>0</Sub>自上游至下游依次为同源臂T<Sub>1</S...
- 陈红星施庚寿吴晓洁周颜荣黄培堂
- 文献传递
- 连续3次缺口修复构建小鼠乳清酸蛋白-人血清白蛋白杂合基因座
- 2012年
- 目的:构建人血清白蛋白(hSA)与小鼠乳清酸蛋白(mWAP)调控序列的杂合基因座。方法与结果:在pBR322载体上连入预先无痕连接的3对同源臂,利用基于Red同源重组系统的缺口修复(gap-repair)技术,分别对8kb的mWAP基因座3′调控区、16 kb的hSA基因组编码序列及13 kb的mWAP基因座5′调控区进行连续3次基因抓捕,最终将全长37 kb的乳蛋白杂合基因座构入pBR322载体;通过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,确定mWAP基因座中的编码序列被精确地置换为hSA的基因组编码序列。结论:构建了整合有mWAP-hSA杂合基因座的pBR322载体,为研究杂合基因座在乳腺中的表达效果及置换型基因座表达的可行性提供了数据。
- 吴晓洁林艳丽施庚寿熊福银周艳荣吕月蒙邓继先陈昭烈陈红星
- 关键词：人血清白蛋白细菌人工染色体
- 乳蛋白调控元件和乳腺表达载体的研究进展
- 2008年
- 利用转基因动物乳腺生物反应器生产重组蛋白是一项极具潜力和开发价值的生物技术,但成功的例子并不多,主要是由于乳蛋白的表达调控机制还未完全阐明,构建的表达载体不足以克服位置效应的影响,使得外源基因的表达难以预期。目前乳腺生物反应器研究的热点是对乳蛋白表达调控元件进行更深入的研究,构建基于酵母人工染色体、细菌人工染色体的经过修饰的乳蛋白基因座载体。简要综述了乳蛋白表达调控元件和表达载体的研究进展。
- 施庚寿陈红星邓继先
- 关键词：乳腺生物反应器乳蛋白调控元件
- 丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1和转录阻遏子NAC1存在相互作用
- 2007年
- 目的:研究与丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1(polo-like kinase1)相互作用的分子。方法:通过酵母双杂交技术初步确定可能与Plk1存在相互作用的靶分子,进一步通过蛋白分子的细胞亚定位、体内免疫共沉淀和GST-pull-down分析Plk1与候选蛋白之间的相互作用。结果:细胞亚定位表明,Plk1与转录阻遏子NAC1(transcriptional re-pressor nucleus accumbens-1,transcriptional repressor NAC1)在空间上存在相互作用的可能,酵母双杂交、体内免疫共沉淀、GST-pulldown分析均表明Plk1和NAC1存在相互作用。结论:Plk1和NAC1存在相互作用,二者的相互作用可能在细胞的发育分化、肿瘤及神经系统疾病的发生发展中起着重要作用。
- 熊福银温叶飞林艳丽周艳荣施庚寿田利源曾强成韩正滨邓继先陈红星
- 关键词：PLK1酵母菌双杂交系统技术相互作用
- 乳腺特异性表达载体及其构建方法
- 本发明公开了一种乳腺特异性表达载体及其构建方法。本发明提供的乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M<Sub>0</Sub>；M<Sub>0</Sub>自上游至下游依次为同源臂T<Sub>1</S...
- 陈红星施庚寿吴晓洁周颜荣黄培堂
- 文献传递
- 连续三步‘Gap-repair’构建小鼠WAP--人LF杂合基因座被引量：3
- 2008年
- 为了构建一个利用小鼠乳清酸蛋白(mWAP)基因座完整的上下游调控序列指导人乳铁蛋白(hLF)基因组序列在乳腺特异性高效表达的mWAP-hLF杂合基因座,我们采用了连续三步‘Gap-repair’的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无痕连接在一起的6个同源臂,构成能连续进行三次gap-repair的基因抓捕载体。然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的gap-repair技术,第一步从含mWAP基因座的细菌人工染色体(mWAPBAC)上亚克隆了8kb的mWAP基因3'端完整侧翼序列到抓捕载体上;第二步,从hLFBAC上亚克隆29kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)的hLF基因组序列;第三步,从mWAPBAC上亚克隆12kb的mWAP基因5′端完整侧翼序列,并使这3个基因片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起,形成一个全长约49kb的mWAP-hLF杂合基因座。经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,我们构建的这个杂合基因座,达到了原来mWAP基因座中mWAP基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hLF基因组序列精确置换的目的。这种连续三步gap-repair构建杂合基因座乳腺表达载体的技术,将为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供一种全新的思路和方法。
- 施庚寿吴晓洁熊福银周艳荣刘珠果邓继先陈红星
- 关键词：细菌人工染色体乳清酸蛋白人乳铁蛋白
