李光源
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- 发文基金：长春市科技发展计划项目吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B基因疫苗的构建及其诱导小鼠细胞免疫应答
- 2007年
- 目的：构建、制备单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B DNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答效果。方法：利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1 gB14-507氨基酸序列的一段基因。定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中，构建出重组真核表达质粒pcDNA3-gBt，并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。于BALB/c鼠注射免疫3次，抗体分析CD4＋、CD8＋T细胞亚群的变化，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）/碘化丙碇（PI）双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果：PCR及测序鉴定结果显示，插入的克隆基因与GenBank中HSV-1F株gB基因序列一致，证实了HSV-1 gBt核酸疫苗的构建；pcDNA3-gBt免疫组BALB/c鼠的CD4＋T细胞数较空质粒（pcDNA3）对照组和生理盐水对照组增加，CTL活性也较对照组明显增强，但是pcDNA3-gBt免疫组BALB/c鼠的CD8＋T细胞、CD4＋/CD8＋T细胞比值与对照组比较差异均无显著性（P〉0.05）。结论：HSV-1 gBt核酸疫苗诱导较强的细胞免疫应答。
- 李光源贺冰冯非孟祥俊宋忆淑王晓祺
- 单纯疱疹病毒1型糖蛋白B基因疫苗的构建被引量：10
- 2004年
- 目的 :构建用于治疗和预防单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗 ,探讨单纯疱疹病毒 1型糖蛋白 B(HSV-1gp B)基因作为基因疫苗的可能性。方法 :利用 PCR技术从 HSV- 1SM4 4毒株基因组中扩增出编码 HSV- 1gp B去除 N端部分信号肽序列 (39bp)的基因片断 (2 6 73bp) ,定向插入真核表达质粒 pc DNA3载体中 ,构建出重组真核表达质粒 pc DNA- gp B,并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。结果 :双酶切重组质粒 pc DNA- gp B,电泳可见两条带 ,分别为目的基因 (2 70 0 bp)和线性质粒 pc DNA3(5 4 0 0 bp) ;以重组质粒 pc DNA- gp B为模板进行 PCR扩增 ,在 2 70 0 bp位置扩增出特异的产物 ;测序结果表明 ,克隆基因插入方向正确 ,与 Gen Bank中登录的 HSV- 1F株 gp B基因序列比较 ,同源性达 99.5 %。结论 :利用 PCR技术从 HSV- 1SM4 4株基因组中扩增出编码 HSV- 1gp B去除 N端部分信号肽序列 (39bp)的基因片断 (2 6 73bp) ,成功地构建了 HSV- 1基因疫苗pc DNA- gp B。
- 孟祥俊贺冰冯非李光源毕军
- 关键词：单纯疱疹病毒1型DNA疫苗
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的构建及细胞免疫学研究被引量：3
- 2005年
- 目的:构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)糖蛋白BDNA疫苗,检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法:PCR扩增编码HSVⅠgB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp),定向插入pcDNA3载体中,构建pcDNA3gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切及测序鉴定。于BALBc小鼠注射免疫3次,观察小鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的变化,CFSEPI双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果:双酶切分析结果为目的基因(2.7kb)和线性质粒pcDNA3(5.4kb);PCR扩增结果为特异产物(2.7kb);测序结果与GenBankgB基因序列同源性达99.5%;CTL活性增强;BALBc小鼠脾CD4+T细胞增加。结论:经鉴定证实了HSVⅠgB基因疫苗的构建;HSVⅠgB基因疫苗可以诱导较强的细胞免疫应答,应用于预防HSVⅠ的感染具有良好的前景。
- 李光源贺冰冯非孟祥俊宋忆淑王晓祺
- 关键词：单纯疱疹病毒DNA疫苗流式细胞术CFSE
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型截短糖蛋白B基因序列的克隆及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus I,HSV-I)SM44株截短糖蛋白B基因序列,为研制联合基因疫苗奠定基础,用于角膜炎的防治。方法利用聚合酶链反应(polymerase chain response,PCR)技术从感染HSV-I SM44株的vero细胞中扩增出HSV-gBt编码基因,经双酶切鉴定后将目的基因定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA3-gBt,并对其进行酶切分析和测序鉴定。结果对pcDNA3-gBt双酶切后,电泳可见目的基因(1.5kb)和线性质粒pcDNA3(5.4kb)两条带;测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与基因库中登录的HSV-1F株gB基因序列比较,同源性达99.5%。结论经证实成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA3-gBt。
- 冯非贺冰孟祥俊李光源
- 关键词：单纯疱疹病毒属角膜炎糖蛋白类
