李志艳
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 牛β-酪蛋白基因的克隆及乳腺特异性表达载体的构建被引量：1
- 2005年
- 利用PCR技术分3段克隆了长约9．7kb的牛β-酪蛋白基因,分另4克隆在pGEM-T easy Vector的T位点。经NCBI Blastn分析,与牛β-酪蛋白基因相应区段的同源性为98％。这3段序 列包含完整的5’侧翼序列、前8个外显子及第8个内含子的部分序列。以此构建了两个乳腺特 异性表达栽体:利用第1段和第2段共有的酶切位点将两段融合,作为5’调控区(6．8kb),第3段 和实验室已有的600 bp的加尾信号通过重组PCR拼接作为3’调控区(3．4kb)构建了一乳腺特异 性表达栽体;以第一段作为5’调控区,实验室已有的600bp加尾信号作为3’为调控区构建了另一 乳腺特异性表达载体。可以应用于进一步乳腺生物反应器的研制。
- 杨瑞锋刘金龙安志兴李志艳张涌
- 关键词：克隆
- 牛乳腺核基质附着区的克隆及其功能研究
- 2006年
- 从奶牛的全血中提取基因组DNA,参照GenBank已有序列,通过Prim er5.0和Vector 7.0辅助设计一对引物,克隆了牛乳腺核基质附着区(BMR s)。利用生物学软件对其进行初步分析后,TA克隆于pMD 18-T vector上。上下游引物5′端分别引入Kpn2Ⅰ和XhoⅠ酶切位点,将所得的BMR s克隆到pEGFP-C1的报告基因下游,构建成表达载体pBE,脂质体法转染牛耳成纤维细胞。以转染pEGFP-C1的牛耳成纤维细胞作为对照,发现所克隆的BMR s功能明显,在消除位置效应、增强报告基因表达方面具有一定的作用。
- 杨瑞锋舒建洪李志艳刘金龙张涌
- 关键词：核基质附着区克隆细胞表达
- Alpha 1抗胰蛋白酶核基质附着区增强RNA聚合酶Ⅱ依赖的转录
- 2007年
- 核基质附着区是一种真核生物的DNA元件,能调控染色体结构和活性。为研究体内MAR相关的染色质准入和转录调控,从人基因组中克隆了Alpha1抗胰蛋白酶核基质附着区(α1-ATMAR)并将其连入pEGFP-C1载体。分别以空载体和携带MAR的载体通过脂质体法转染人胚肾293细胞系。经G418筛选20天的细胞池用作实验分析。半定量RT-PCR及荧光显微镜观察显示此MAR能够增强临近基因的表达。进一步用染色质免疫共沉淀(ChIP)共定位CMV启动子和RNA聚合酶Ⅱ(RNAPⅡ),PCR结果显示存在MAR元件时,更多的RNA聚合酶Ⅱ被富集到启动子区。ChIP方法可用于证实MAR介导的转录激活,在实时检测方面比RT-PCR提供了更多动力学信息。这项技术为进一步研究基因表达调控提供了技术平台。
- 李志艳张涌
- 关键词：核基质附着区转录调控
