目的:分别构建信号转导与转录活化因子6(signal transducer and activator of transcription6,STAT6)过表达及RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,研究STAT6基因表达对人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:以人胚肾HEK293FT细胞cDNA为模板,PCR扩增STAT6基因的完整开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,化学合成针对STAT6基因的RNAi靶向单链片段,通过pLVTHm慢病毒载体三质粒包装系统对以上2种片段进行慢病毒颗粒包装;再用病毒感染结肠癌RKO细胞,获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株。RT-PCR和蛋白质印迹法检测稳定感染细胞株中STAT6基因的表达情况,CCK8法检测细胞活性的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果:成功构建STAT6-ORF和STAT6-RNAi慢病毒表达载体,并获得稳定表达STAT6的相应RKO细胞株。与对照组细胞相比,STAT6-ORF转染组细胞的增殖速度加快不明显(P=0.609),细胞迁移能力显著增强(P<0.01);而STAT6-RNAi转染组的细胞活性显著降低(P<0.001),迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:STAT6可能是促进结肠癌细胞增殖和迁移的重要转录因子。
