杜军伟
- 作品数：8 被引量：25H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划新疆生产建设兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 实时定量PCR检测siRNA对小鼠巨噬细胞中FTH1基因表达的抑制作用被引量：1
- 2010年
- 目的通过实时定量PCR(real-ti me PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(si RNA)抑制目的基因表达的方法。方法化学设计合成对应于FTH1(ferritin heavy chain1,FTH1)基因表达mRNA的si RNA,经TurboFectTMin vitro Transfection Reagent转染小鼠RAW264.7巨噬细胞,48h后,提取总RNA,逆转录为cDNA。以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,定量检测FTH1的表达,比较干扰前后FTH1基因mRNA的量。结果 3种si RNA处理的小鼠巨噬细胞中FTH1基因的表达抑制率最高为97.60%。结论实时定量PCR方法的建立为研究布鲁氏菌在侵染巨噬细胞过程中FTH1的功能提供了有效途径。
- 杜军伟王远志陈创夫葛阳春唐利燕
- 关键词：实时定量PCRSIRNA
- 棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化被引量：14
- 2010年
- 为进一步探讨脱氢抗坏血酸还原酶的生物学功能,克隆棉花的脱氢抗坏血酸还原酶基因,对该基因进行了原核表达,并对重组蛋白进行纯化和分析。通过RT-PCR方法扩增脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,利用BamH I和Xhol I酶切位点将其克隆至组氨酸(histidine,His)融合蛋白表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(isopropy--βD-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物,并用亲和层析柱纯化重组表达的pET28a-DHAR蛋白。结果表明:重组体PET28a-DHAR经测序和酶切鉴定证实构建成功。导入大肠杆菌BL21进行表达,SDS-PAGE分析目的蛋白高效表达,相对分子量为26 kD左右,并获得了纯化的His-DHAR融合蛋白。
- 李学宁杜军伟李鸿彬
- 关键词：棉花克隆原核表达
- 铁蛋白重链多肽对RAW264.7细胞中凋亡相关基因表达的影响被引量：4
- 2010年
- 为了探讨铁蛋白重链多肽(ferritin heavy chain 1,FTH1)对RAW264.7细胞中凋亡相关基因表达的影响,采用RNA干扰和实时定量方法进行研究,首先提取RAW264.7细胞的总RNA,应用反转录PCR获得定量片段,制定标准曲线。将pSIREN-FTH1A/B转染到RAW264.7细胞,48 h后用绵羊种布鲁氏菌019株侵染4 h,实时定量PCR检测凋亡相关基因Mkl1、Birclb的表达,GAPDH作为内参基因,检测干扰前后凋亡相关基因mRNA的量。结果显示:转染pSIREN-FTH1的细胞被布鲁氏菌侵染后,Mkl1、Birclb基因mRNA的量较干扰前分别降低了76.3%、88.8%。FTH1可调节凋亡相关基因表达从而影响细胞凋亡的进程。
- 杜军伟王远志陈创夫葛阳春
- 关键词：布鲁氏菌巨噬细胞凋亡
- FTH1在B.ovis 019株侵染小鼠巨噬细胞中的功能研究
- 目的：布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患传染病。布鲁氏菌可长期寄生于巨噬细胞并抑制感染细胞的凋亡，引起人、畜多器官损伤和慢性感染，给人类健康和畜牧业和谐发展带来严重威胁。布鲁氏菌与巨噬细胞...
- 杜军伟
- 关键词：布鲁氏菌病慢性感染巨噬细胞
- 文献传递
- 利用荧光定量PCR检测B.ovis侵染巨噬细胞RAW264.7的相对数量
- 2010年
- 为了探讨布鲁氏菌胞内寄生的机制,采用荧光定量PCR方法对进入巨噬细胞的布鲁氏菌的数量进行检测,克隆了绵羊种布鲁氏菌019株的16SrRNA基因和小鼠巨噬细胞RAW264.7的GAPDH基因。以16SrRNA基因和巨噬细胞GAPDH做为内参基因,将二者的比值作为检测布鲁氏菌进入巨噬细胞数量多少的指标,建立绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞不同阶段的感染模式。结果表明:在绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞15min～1h,16SrRNA与GAPDH的比值缓慢上升,侵染1～4h中,16SrRNA与GAPDH的比值急剧上升,说明在此阶段,细菌侵入细胞中的数量显著增多。
- 葛阳春王远志陈创夫杜军伟
- 关键词：荧光定量PCR
- 布鲁氏菌外膜蛋白omp31基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在巨噬细胞中的表达被引量：6
- 2012年
- 为了构建一种具有指示作用的融合表达蛋白,将布鲁氏菌外膜蛋白omp31基因与EGFP基因融合后观察融合表达蛋白在巨噬细胞中的表达情况。从灭活的绵羊种布鲁氏菌019株菌液中获得omp31基因片段,克隆入融合表达载体pTY,构建重组质粒pTY-omp31,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过激光共聚焦显微镜观察融合蛋白能够在细胞内的表达。研究结果显示:重组质粒pTY-omp31经酶切及测序鉴定证明构建正确,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7得到了成功表达。
- 黄小强王慧葛阳春诸婷婷王远志陈创夫杜军伟
- 关键词：布鲁氏菌
- 载体表达的siRNA分子对小鼠巨噬细胞galactose-specific lectin基因表达的抑制作用
- 2010年
- 目的构建小鼠巨噬细胞半乳糖特异性凝集素(GSL)靶向的RNAi质粒载体,研究其对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的沉默作用。方法根据GSL核苷酸序列,合成3条特异性双链小干扰RNA(siRNA)分子,退火形成双链,分别连接到RNAi-Readyp SIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,转化大肠杆菌得到阳性克隆,经测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7及尾静脉注射BALB/c小鼠,应用实时定量PCR和免疫组化法评价siRNA载体对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的抑制作用。结果 siRNA载体对小鼠体内GSL基因的抑制率为84-96%,对巨噬细胞GSL基因的抑制率可达61.98%～83.02%。结论构建的siRNA载体能有效抑制目的基因在体内外的表达,该结果为分析半乳糖特异性凝集素在布鲁氏菌侵染过程中的功能奠定了基础。
- 葛阳春王远志陈创夫杜军伟胡圣伟
- 关键词：RNAI小鼠
- FTH1在布鲁氏菌侵染宿主细胞中的作用
- 2014年
- 为了探究布鲁氏菌侵染宿主巨噬细胞过程中铁蛋白(FTH1)生物学功能,本研究根据FTH1蛋白核苷酸序列,分别设计4条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,亚克隆到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体,并转染RAW264.7巨噬细胞,实时定量PCR筛选干扰效果最优的质粒;布鲁氏菌侵染干扰前、后的RAW264.7巨噬细胞,实时定量PCR检测布鲁氏菌基因16S rRNA和细胞凋亡相关基因的mRNA表达量。结果显示:获得了4条特异性siRNA分子,经测序正确,pSIREN-C siRNA质粒对FTH1干扰效果最高可达98%。干扰后布鲁氏菌侵染抑制率为84%,凋亡相关基因的mRNA表达量5个降低,3个上升。本研究表明:FTH1基因沉默后布鲁氏菌胞内的生存能力下降;布鲁氏菌侵染可以抑制细胞凋亡发生,FTH1基因沉默后细胞凋亡升高。
- 孙志华杜军伟刘娟许长萌韩玉霞关团陈创夫张辉
- 关键词：布鲁氏菌巨噬细胞凋亡
