王华岩
- 作品数：61 被引量：105H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 猪BMP-15和GDF-9报告载体的构建及其组织特异性表达研究
- 本研究从猪的9种不同组织(卵巢、辜丸、胃脏、肝脏、肌肉、肾脏、心脏、胸腺、肺脏)中提取总RNA，采用定量RT-PCR方法检测上述两个基因的表达变化。再对猪卵母细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、小鼠成肌细胞(C2C12 )...
- 秦明鸣万千惠王华岩
- 关键词：转移生长因子基因表达协调控制生物学反应
- 文献传递
- CRISPR/Cas9介导的同源重组插入敲除人SH2B3基因被引量：1
- 2018年
- SH2B3基因的突变可以显著提高人干细胞向红细胞诱导分化的效率。该研究利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组插入敲除策略,建立了一种高效获得特定基因编辑类型的敲除SH2B3基因的方法。通过设计两个含有不同荧光标记和不同抗性基因的同源重组筛选载体和一个靶向SH2B3基因的CRISPR/Cas9敲除载体,共转染HeLa细胞,然后用嘌呤霉素和新霉素进行筛选,两周后一部分细胞用于分子生物学检测,另一部分细胞通过有限稀释法分离单细胞克隆。结果显示,在药物抗性筛选两周的HeLa细胞中,野生型SH2B3基因转录产物几乎检测不到,可以检测到重组型转录产物的表达。敲除效率的统计结果显示,在获得的19株SH2B3基因敲除细胞中,有11株细胞为双等位基因插入敲除。另外8株细胞为单等位基因插入敲除,其中有2株细胞的等位基因没有检测到突变,而剩余的6株细胞的等位基因都检测到有突变。因此,该研究的双插入敲除率为57.9%,双敲除率达到89.5%。该研究为构建SH2B3基因敲除的人多能干细胞系奠定了基础,也为建立一种高效、低成本的诱导红细胞的技术体系提供了有效的工具。
- 蔡元星王宁王思乐王华岩
- 关键词：同源重组
- 一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法
- 一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法，该系统由pGT-V1和pGT-V2两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的LoxP元件，其间分别含有正筛选标记基因Neo/GFP和Hyg/RFP，外侧含有一个负筛选标记基因T...
- 王华岩韩翠芹李军华
- 文献传递
- 一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法
- 一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法，构建了一种包含NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体pSP-NRAMP1-HA，以及一种基于该载体的包含NRAMP1基因的秦川牛成纤维细胞系，利用该细胞系作...
- 王华岩程祥邓捷马晓玲孟书燕来威锋
- 文献传递
- 诱导多能干细胞(iPS)的诱导培养与鉴定被引量：8
- 2010年
- 通过外源转录调控因子的诱导,使成体细胞重编程为胚胎干细胞(ES细胞)样的多能细胞,这种细胞称为诱导多能干细胞(iPS细胞),这一方法被称为iPS技术。目前,iPS技术已先后在小鼠、人、猕猴、大鼠和猪中成功应用,建立了相应的iPS细胞系,并获得了iPS细胞嵌合小鼠和四倍体克隆小鼠。尽管iPS与ES细胞在形态和生长特性上有许多相同之处,但iPS细胞的建立需要较独特的诱导培养体系和鉴定方法。以下结合近年来iPS技术的发展和本实验室的相关研究,对iPS细胞的建立和培养体系的优化进行了深入探讨。
- 成德雷蕾卢智娟李珍王华岩
- 关键词：诱导多能干细胞转录因子细胞重编程胚胎干细胞
- 一种猪羊水干细胞系的建立及检测方法
- 本发明提供了一种猪羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行机械分离纯化；3)检测并将分离纯化后的羊水干细胞进行培养，建立猪羊水干细胞系，本发明提供了一种...
- 王华岩卢智娟成德张淑金高志敏
- 不同实验室来源的猪iPS细胞系转录组表达谱分析
- Porcine induced pluripotent stem cells (piPSCs) have significant biomedical and agricultural applications andh...
- 王华岩
- 关键词：转录调控基因表达谱
- 肌肉增强子因子2对猪肌肉生长抑制素启动子活性的调节被引量：3
- 2012年
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,Mstn)是转化生长因子-β超家族的成员,在哺乳动物的骨骼肌生长和分化过程中起负调控作用,其转录调控受到多个基因的影响,其中肌肉增强子因子2(MEF2)是重要的调控因子之一。因此,对猪Mstn启动子上MEF2位点及其作用方式的探讨具有重要意义。首先,通过PCR方法扩增了猪Mstn基因上游1 969 kb的启动子序列,利用生物信息学方法分析该序列包含3个MEF2的结合位点;其次,采用逐步删除的方法获得5个长度不等的启动子,用荧光素酶报告系统评估了它们在小鼠成肌细胞C2C12中的活性。其次,转入含有MEF2结合位点的启动子片段和MEF2C表达载体,可以显著增强启动子活性2～6倍,高表达另一亚型MEF2A则启动子活性没有明显改变。最后,转入MEF2C表达载体,用实时定量PCR和Western blotting方法检测Mstn的转录和蛋白水平的变化,结果发现mRNA升高了2～4倍;在肌管细胞中,蛋白翻译水平也有显著升高。这些结果显示,MEF2C可以通过激活Mstn参与猪肌肉生长和发育阶段的调节。研究为Mstn基因的转录调控提供了有效的作用靶点和效应分子,为进一步探讨Mstn的功能调控提供了一种新的思路。
- 李佳邓捷张军林成德王华岩
- 关键词：转录调控启动子活性C2C12细胞
- Sall4表达调控及其启动子核心调控区的筛选
- 2016年
- 【目的】Sall4是一种锌指结构转录因子,对建立和维持动物多能干细胞具有重要意义。为探索猪Sall4的表达和转录调控机制,克隆了猪Sall4启动子,对其进行了功能验证和核心调控区的筛选。【方法】从猪基因组中克隆获得2.1 kb Sall4启动子片段,并构建相应的报告载体;将报告载体p E2.1转染不同种类的细胞,进行细胞特异性表达检测;采用实时荧光定量PCR方法,检测Sall4在猪不同组织和细胞中的表达变化;通过生物信息学方法,分析Sall4启动子上各种关键顺式作用元件和潜在的转录结合位点;将多能转录因子Oct4、Sox2、Klf4、Myc、Esrra/b和Smad与Sall4启动子共转染293T细胞,利用双萤光素酶报告系统检测Sall4启动子活性;采用DNA片段缺失的方法,构建一系列Sall4启动子片段缺失报告载体,将缺失片段载体分别转入293T细胞中,并利用双萤光素酶报告系统检测启动子的活性。【结果】Sall4在多能干细胞、生殖细胞和癌化肿瘤细胞中:包括P19、293T、CHO和Hela等细胞中特异性高表达。另外,通过实时荧光定量PCR检测结果显示,Sall4的表达具有明显的组织特异性,其在猪i PS细胞和生殖相关组织,如睾丸和卵巢组织中表达最高,而在脑、心、肝和肌肉等组织中的表达较低,表明该基因与细胞多能性维持具有互作关系。应用JASPAR和GPMiner软件分析发现,Sall4启动子上有TATA box、GC box、CAAT box等顺式作用元件,以及Oct4、Sox2、Klf4、Myc、Esrra/b、Stat3和Smad等多能转录因子的预测结合位点。其中,Oct4、Sox2和TGF-beta信号通路因子对Sall4启动子活性有较显著的激活作用,与对照组比较Sall4启动子活性提高了3倍;而Klf4因子对Sall4启动子活性有一定的抑制作用。采用分段PCR的方法,对2.1 kb启动子进行了片段缺失,分别构建了p L2.1、p L1.0和p L0.5等3个报告载体,检测结果发现,在p L2.1与p L1.0之间相差1 kb左右,但是启动子的活�
- 王亚娴杨藩王华岩
- 关键词：SALL4启动子多能性转录调控
- 通过形成类胚体诱导人羊水多能干细胞向心肌细胞分化被引量：12
- 2008年
- 由人羊水中分离羊水多能性干细胞，通过形成类胚体诱导其向心肌细胞分化。取人羊水标本进行体外培养，分离得到人羊水干细胞，已连续传代培养至42代，采用免疫细胞化学、RT-PCR和流式细胞仪技术对羊水干细胞的生物学特性进行检测。取10-15代羊水干细胞，悬浮培养使其形成类胚体，进而向心肌细胞诱导分化。培养的羊水干细胞呈成纤维样，表达部分胚胎干细胞特异标志基因，悬浮培养可形成类胚体。类胚体碱性磷酸酶（AP）检测呈阳性，表达三胚层特异标志基因fgf5、ζ-globin和α-fetoprotein。羊水干细胞形成类胚体后进行诱导，得到α-actin阳性细胞，表达心肌细胞特异标志基因Tbx5、Nkx2．5、GATA4和α—MHC。试验结果表明，从人羊水标本中可分离得到具有胚胎干细胞特性的细胞，经初步检测确定为羊水干细胞，并能通过形成类胚体诱导其向心肌细胞分化。
- 王晗陈帅程祥窦忠英王华岩
- 关键词：心肌细胞诱导分化
