禄亚洲
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西藏大学农牧学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
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- 陆地棉纤维中GhGMPase2基因克隆、序列分析及原核表达
- 2013年
- 从陆地棉纤维中克隆GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GhGMPase2)基因,并进行序列分析及原核表达。利用RT-PCR技术进行基因克隆,构建原核表达载体pET28a-GhGMPase2并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。研究结果表明,从陆地棉花纤维中克隆得到棉GhGMPase2基因,该基因的开放读码框为1 086bp,编码包含362个氨基酸的蛋白质,分子质量约为40ku。序列分析结果表明,GhGMPase2蛋白具有较高的保守性,具有典型的糖酰基转移酶转移酶A家族(GT-A)结构域和左手平行的β-的螺旋(LbetaH或LBH)域,它们分别属于糖酰基转移酶家族2(GT-2)超家族和LBH超家族。进化树分析的结果显示,棉花GhGMPase2与烟草NtGMPase在进化上亲缘关系较近。经过原核表达载体pET28a-GhGMPase2的诱导表达和SDS-PAGE分析显示,获得分子质量约为40ku的重组GhGMPase2蛋白。GMPase2基因的克隆、序列分析及原核表达为进一步研究其参与棉花纤维发育过程中的重要功能奠定基础。
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- 关键词：棉花纤维克隆原核表达
- 棉花抗坏血酸从头合成途径中VTC2基因的克隆及其功能的初步分析
- 目的： GDP-L-半乳糖磷酸化酶（GGPase）是抗坏血酸（AsA）从头合成途径中的关键酶，对于维持植物细胞内抗坏血酸的平衡发挥着重要作用。克隆棉花GDP-L-半乳糖磷酸化酶基因，转化真核和原核表达载体，在基因表达水平...
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- 关键词：棉花纤维植物抗逆性植物激素
- 文献传递
- 棉花GhGGPase基因克隆、序列分析及原核表达
- 2013年
- 【目的】棉花GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GhGGPase)基因的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从棉花纤维中克隆棉花GhGGPase基因,进行生物信息学分析,构建原核表达载体pET28a-GhGGPase,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。【结果】从陆地棉纤维组织中扩增得到L-半乳糖磷酸化酶基因的cDNA开放读码框为1 350 bp,为包含450个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为49 kDa。对氨基酸序列进行生物信息学分析,GhGGPase蛋白具有组氨酸三聚体(HIT)蛋白超家族的主要特性的结构域。进化树分析的表明棉花GhGGPase与柑橘CuGGPase在进化上亲缘关系上较近。成功构建了pET28a-GhGGPase原核表达载体;获得分子质量约为49 kDa左右的重组蛋白GhGGPase。半定量RT-PCR的组织表达特异性分析表明GhGGPase基因与棉纤维的快速伸长发育密切相关。【结论】GhGGPase基因的克隆、序列分析和重组蛋白的诱导表达为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。
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- 关键词：棉花纤维原核表达
- 棉花GhGGPase2基因克隆、功能序列分析、原核表达及烟草的遗传转化被引量：1
- 2016年
- 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到L-半乳糖磷酸化酶基因(Gh GGPase2)的c DNA开放阅读框为1 335 bp,为包含445个氨基酸的蛋白质,分子质量约为49 ku。利用软件进行蛋白质序列分析,Gh GGPase2蛋白具有组氨酸三聚体(HIT)蛋白超家族的主要特性的结构域。进化树分析的结果表明棉花Gh GGPase2与猕猴桃Ad GGPase在进化上亲缘关系上较近。构建原核表达载体p ET28a-Gh GGPase2并转化大肠杆菌,将重组载体p ET28a-Gh GGPase2导入大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG诱导表达后经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为49 ku左右的诱导表达蛋白Gh GGPase2。将Gh GGPase2基因构建到植物真核表达载体p CAMBIA2300中,利用农杆菌通过叶盘法转化烟草,经PCR分子鉴定,获得了含Gh GGPase2转基因烟草植株。研究结果将为进一步阐明该基因的生物学功能奠定基础。
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- 关键词：棉花纤维原核表达克隆
