胡接力 作品数:79 被引量:66 H指数:5 供职机构: 重庆医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 中国博士后科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 历史地理 轻工技术与工程 更多>>
一种新的DNA分子克隆方法 被引量:10 2011年 DNA分子克隆是基本的分子生物学实验技术,传统的分子克隆方法大多需经过酶切链接过程,但在某些情况下,没有合适的酶切位点往往会成为阻碍克隆进行的障碍.本文描述了一种新的分子克隆方法,称为不依赖酶切和链接的分子克隆(RLIC).利用RLIC,将3种不同大小的DNA片段克隆到3种不同载体,证明了这种方法的有效性和可靠性.由于该方法不受限制性酶切序列限制,省去了酶切连接步骤,因此具有很大的灵活性和简便性,在分子生物学研究方面有广泛应用前景. 黄媛 陶颖 张文露 黄爱龙 胡接力关键词:DNA 分子克隆 HBV DNA环化结构在体外的复制表达水平优于HBV线性结构的表达质粒 2013年 为了研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA环化结构与HBV线性结构的表达质粒在体外复制表达水平的差异,采用3种含有HBV全长DNA的表达质粒与自连环化的HBV DNA分别转染Huh7细胞.5 d后收集转染处理过的Huh7细胞和细胞上清,从感染细胞中抽提纯化HBV复制中间体进行Southern印迹分析,并将细胞培养上清进行ELISA分析.结果显示,HBV DNA通过环化后转染Huh7细胞,可高效地进行转录和复制表达,且优于质粒转染的效果.证明在细胞中,HBV DNA环状结构的复制表达能力优于HBV线性结构的表达质粒. 马其欢 杜茜 龚旭阳 胡接力 黄爱龙 蔡雪飞关键词:乙型肝炎病毒 人体对新型冠状病毒的免疫应答 被引量:1 2022年 作为新发突发传染病,新型冠状病毒感染流行已经且正在对全球造成巨大影响。免疫系统是人体抵御新冠病毒感染的自然武器。研究和认识人体的免疫反应,对于我们更好地应对新冠肺炎疫情流行很重要。得益于全球研究者的投入,我们在较短时期内,对新冠病毒感染后的免疫反应有了较广泛和深入的理解,本文将对这些进展做一简述。 黄爱龙 胡接力关键词:新型冠状病毒 天然免疫 适应性免疫 慢性乙型肝炎病毒感染与细胞免疫 2023年 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的持续感染是机体未能有效建立HBV特异性免疫的结果,这种情形也可称为机体对HBV的免疫耐受。成人急性感染HBV时,绝大多数可以发生正常的特异性免疫应答,因而得以自愈。围产期感染HBV,绝大多数导致慢性化,提示存在HBV特异性免疫应答异常。典型的特异性免疫应答包括4个过程:抗原提呈、特异性CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞激活以及B细胞激活。慢性HBV感染时,机体的免疫应答异常必然涉及这4个过程的部分或者全部。本文主要讨论了慢性HBV感染与细胞免疫的关系,希望为进一步思考HBV特异性免疫重建路径与策略提供参考。 胡接力 黄爱龙关键词:乙型肝炎病毒 慢性感染 免疫耐受 细胞免疫 重要病毒性传染病的诊断与防治策略 黄爱龙 陈娟 胡接力 龙泉 该项目主要围绕乙肝和新冠肺炎两种疾病的诊断与防治,针对造成乙肝难以治愈的瓶颈问题,鉴定参与HBV复制周期中关键过程的宿主因子,研究其作用和调控机制,以发现抗HBV的有效靶点;针对新冠肺炎防控中的关键问题,研发SARS-C...关键词:关键词:病毒性传染病 抗体检测试剂 药物防治 NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究 2019年 目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000)。NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50%(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92%(t=31.59,P=0.001)。NR6A1N(NR6A1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P>0.05)。NR6A1C(NR6A1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P>0.05)。结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子II的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制。 魏强 魏霞飞 甘春杨 张文露 黄爱龙 胡接力关键词:乙肝病毒 核受体 增强子 重组HBc融合蛋白 本发明公开了一种重组HBc融合蛋白,融合蛋白从N端到C端依次含有蛋白(X)、接头肽(L)和人乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc),接头肽(L)的氨基酸序列为:Gly-Ser-(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n-Gly... 胡接力 黄爱龙 陈江燕文献传递 乙型肝炎病毒密码子偏好性及影响因素分析 被引量:4 2020年 目的分析乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型密码子使用偏好性及其影响因素,探讨HBV密码子使用模式与宿主、病毒进化的关系。方法从GenBank数据库中收集47株HBV的全基因组序列,利用EMBOSS、SPSS24.0、MEGAX等软件对其密码子偏好性进行统计分析。结果HBV各蛋白编码序列的ENC值为56.37-58.74,CAI值为0.678-0.697,GC3含量为0.474-0.506。RSCU>1的密码子共27个,主要以U/C结尾。高频使用密码子为UCU、CCU和AGC,低频使用密码子为CUA、CCG、CGA、ACG和UCG。ENC绘图显示47株病毒均位于预期曲线之下。中性绘图分析表明GC12与GC3无显著相关性(R2=0.005,P<0.01)。PR2绘图显示第三位碱基T和C含量较高。对应分析显示这些病毒的密码子偏好性受碱基组成影响的可能性较小。利用CAI值和卡方检验的方法确定GAC和GAA为上述毒株的最优密码子。密码子使用频率比值表明B、C基因型与人类的密码子偏好性相近,而聚合酶(P)、表面(S)基因与人类的密码子偏好性存在一定的差异,以P基因差异更大。系统发生分析显示,HBV毒株分类的进化越相近,其密码子偏好性越相似。结论B、C基因型HBV偏爱使用U/C结尾的密码子,其密码子偏好性主要受到自然选择的影响。结合密码子偏好性与密码子优化可能有助于理解HBV进化过程和对最适宿主的选择机制。 吴炜倩 胡源 胡接力 黄爱龙 涂增关键词:乙型肝炎病毒 进化 HBV逆转录酶特定变异对其药物敏感性的影响 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全球性公共卫生问题,核苷类似物是目前治疗慢性乙肝的重要药物,但长期使用核苷类似物易发生耐药,耐药己成为乙肝抗病毒治疗中的重要热点问题。耐药现象的一个重要原因... 胡接力关键词:恩替卡韦 阿德福韦 耐药突变 药物敏感性 文献传递 用于序列特异性蛋白酶检测的分子开关 本发明公开了用于序列特异性蛋白酶检测的分子开关,属于蛋白检测领域。本发明的分子开关包括依次用接头连接的HiBiT突变体、LgBiT和SmBiT;HiBiT突变体和LgBiT之间的接头含有识别切割序列。前述HiBiT突变体... 胡接力 黄爱龙 李杰