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激光捕获显微切割纯化的人正常支气管上皮与肺鳞癌组织的定量蛋白质组学研究被引量：1: 2011年; 目的:建立肺鳞癌(human lung squamous carcinoma,HLSC)组织与正常支气管上皮(normal humanbronchial epithelial,NHBE)组织的差异蛋白质表达谱。方法:运用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从HLSC及NHBE组织中分别纯化HLSC和NHBE细胞,应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tagsfor relative and absolute quantitation,iTRAQ)和二维液相色谱-串联质谱技术分离、鉴定HLSC和NHBE的差异表达蛋白质。结果:共鉴定了96个HLSC和NHBE之间的差异表达蛋白质,其中在HLSC中上调的蛋白49个、下调蛋白47个。采用Western印迹对其中的两个差异蛋白质HSPB1和CKB进行了表达水平验证,结果与定量蛋白质组学研究的结果一致。结论:鉴定的肺鳞癌差异表达蛋白质为研究HLSC癌变机制奠定了基础。; 许艳曾谷清金龙玉汤参娥李萃肖志强; 关键词：肺鳞癌差异蛋白质激光捕获显微切割定量蛋白质组学 ITRAQ

重组CKB真核表达载体的构建及其稳定转染NCI—H520细胞系的建立: 2011年; 目的构建pEGFP—N1－CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI—H520中，建立稳定转染的NCI—H520细胞系，为后续研究奠定基础。方法以人CKBcDNA文库为模板，用PCR扩增人CKBcDNA的编码区，并将扩增的cDNA片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。重组子经酶切分析及测序鉴定后，用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI—H520，经G418筛选并建立稳定的转染细胞株，应用Westernblot检测转染前后该细胞株CKB基因的表达。结果pEGFP—N1－CKB经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确，真核表达载体构建成功；经Westernblot检测，重组质粒转染株中CKB基因的表达水平明显高于对照组，证实CKB基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达。结论成功构建了pEGFP—N1－CKB真核表达质粒，建立了稳定表达CKB的NCI-H520细胞系，为进一步研究CKB的生物学功能奠定了基础。; 曾谷清许艳易红李萃李茂玉汤参娥肖志强; 关键词：肌酸激酶转染

重组GSTP1真核表达质粒的构建及稳定转染NCI-H520细胞系的建立被引量：1: 2012年; 目的构建pcD N A3.1(+)/G STP1真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞N C I-H 520中,建立稳定转染的N C I-H 520细胞系,为后续研究奠定基础。方法以pD N R-LIB-G STP1为模板,用PC R扩增G STP1 cD N A的编码区,并将扩增的cD N A片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pcD N A3.1(+)中。重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系N C I-H 520,经G 418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用W estern blotting检测转染前后该细胞株G STP1基因在蛋白水平的表达。结果 pcD N A3.1(+)/G STP1经酶切鉴定及D N A测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经W estern blotting检测,重组质粒转染株中G STP1基因的蛋白表达水平明显高于对照组,证实G STP1基因已稳定转染到N C I-H 520细胞中并得到表达。结论成功构建了pcD N A3.1(+)/G STP1真核表达质粒,建立了稳定表达G STP1的N C I-H 520细胞系,为进一步研究G STP1的生物学功能奠定了基础。; 曾谷清许艳易红李萃李茂玉张鹏飞李国庆肖志强; 关键词：稳定转染

卵巢癌紫杉醇耐药的蛋白质组学研究(英文)被引量：4: 2010年; 目的:研究与卵巢癌紫杉醇耐药相关的蛋白质。方法:应用双向凝胶电泳( 2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS)寻找紫杉醇耐药细胞和敏感细胞的差异表达蛋白质。使用Western印迹技术对其中2个蛋白质进行验证。结果:通过对2组细胞总蛋白质双向凝胶电脉图谱进行分析,找到差异蛋白质点40个;通过质谱分析,24个蛋白质得到鉴定。这些蛋白质包括增殖细胞核抗原( PCNA)、nm23蛋白、prohibitin( PHB)分子伴侣蛋白、脂皮质素( annexin)、α-烯醇化酶(α-enolase)以及热休克蛋白( HSP)等。结论:通过蛋白质组学技术,发现了卵巢癌紫杉醇耐药细胞系和敏感细胞系之间差异表达蛋白质24个,这些差异蛋白质可能参与卵巢癌细胞紫杉醇耐药过程。; 曹兰琴黎欣张怡彭芳易红许艳李新国王前; 关键词：卵巢癌紫杉醇耐药蛋白质组学

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许艳