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促黄体素(LH)对猪卵巢颗粒细胞细胞周期及类固醇激素分泌的影响被引量：5: 2011年; 为揭示促黄体素对猪卵巢颗粒细胞生长及类固醇分泌的影响,从当地屠宰场采集猪卵巢,选择表面直径大于6 mm的卵泡(优势卵泡)作为试验材料,将从其中获得的颗粒细胞进行体外培养,并在培养基中添加不同浓度(0 IU/ml、2 IU/ml和4 IU/ml)的促黄体素(LH),通过流式细胞仪、放射性免疫和定量PCR分别检测细胞周期的情况、类固醇激素的分泌和相关基因mRNA的表达。结果显示:高剂量的LH(4 IU/ml)可使G0/G1期的细胞数量由92.79%减少到86.12%;S期细胞数量由1.97%增加到8.43%,并能显著提高细胞周期依赖性蛋白激酶-4(CDK4)和细胞周期素-D2(Cyclin D2)的表达水平;高剂量的LH(4 IU/ml)能显著减少培养基中E2和P4的浓度,并能降低芳香化酶(P450arom)和胆固醇侧链裂解酶(P450scc)的表达。结果表明LH对猪卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素分泌有调控作用。; 王伟贺彧张海燕田宽校宋晓光王晶晶徐银学; 关键词：颗粒细胞促黄体素细胞周期类固醇激素

NOBOX基因的cDNA克隆及其特性分析(英文)被引量：2: 2009年; NOBOX(新生儿卵巢同源基因)是一个卵母细胞特异性表达的同源基因,在早期滤泡发生中起重要的作用。本研究结合电子克隆的方法,从猪卵母细胞中成功地克隆了NOBOX基因的全长cDNA序列(GenBank Accession No.FJ587509)。猪NOBOX基因的cDNA全长为1768 bp,包含1419 bp的开放阅读框。生物信息学分析表明NOBOX基因编码了472个氨基酸,分子量为51.08 kD,等电点为5.73。该蛋白定位于细胞核中,含有一个保守的结构域——cd00086。借助Clustalw软件,采用N-J算法构建了NOBOX蛋白的系统进化树,分析了不同物种间的进化关系。应用实时荧光定量PCR技术分析该基因在母猪不同组织、细胞及4种孤雌激活胚胎的表达模式,结果表明该基因在母猪各组织中均有不同程度的表达,其中在心脏、肾脏和卵母细胞中表达水平较高,推测其可能在心脏、肾脏和卵母细胞中发挥着重要的作用;NOBOX基因在胚胎发育阶段的表达水平高于G-V期的卵母细胞,表明在胚胎发育阶段pNOBOX的表达增强。; 李贵强李美丽方威王伟贺彧宋晓光徐银学; 关键词：CDNA克隆生物信息学分析基因表达

沉默Smad4基因表达抑制猪卵巢颗粒细胞增殖并使细胞G_1期阻滞被引量：2: 2010年; Smad4是TGF-β/Smad信号通路的核心下游信号分子.为探明Smad4基因对猪卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响,采用RNA干扰技术,设计并合成猪Smad4基因的靶向小分子干扰RNA,由LipofectamineTMRNAiMix介导转染体外培养的猪卵巢颗粒细胞.应用实时荧光定量PCR检测Smad4mRNA的干扰效果,应用MTT法、流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期的变化,同时应用荧光定量PCR检测转染前后CyclinD1、CyclinB、CyclinA2、CDK1、CDK2、CDK4等周期相关基因的mRNA表达量的变化.实验结果显示,靶向猪Smad4的特异性siRNA序列对Smad4mRNA表达的抑制率为79.85%(P<0.01);沉默Smad4可以显著抑制猪卵巢颗粒细胞增殖,并且改变细胞周期分布,G0/G1期细胞比例显著高于各对照组(P<0.05),S期细胞比例显著低于各对照组(P<0.05),细胞分裂被阻滞;转染36h后CyclinD1、CDK1的mRNA表达量显著低于对照组,CyclinA2、CDK2、CDK4极显著低于对照组,CyclinB差异不显著.综上所述,Smad4是影响猪卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期进程的重要基因之一.; 贺彧王伟张海燕赵永艳陈侠李新秀王莉徐银学; 关键词：SMAD4 颗粒细胞细胞增殖

Sox基因家族功能的研究进展被引量：14: 2008年; Sox(Sry-related high mobility group box)基因是由众多具有HMG-box保守基序构成的超基因家族,是与位于雄性动物Y染色体上的Sry基因同源的家族基因,在很多动物中都有表达。由于其编码的蛋白质具有结合DNA的能力,因而认为Sox基因家族是一类重要的转录调控因子。在个体发育过程中,Sox基因广泛参与了动物的早期胚胎发育、性别决定和分化、神经系统发育、软骨及多种组织器官的形成,具有重要的生物学功能。主要对Sox家族基因的功能及其研究进展进行简要的综述。; 江玲霞李纪委贺彧李美丽方威李贵强徐银学; 关键词：SOX基因家族性别决定与分化 HMG盒

RNAi抑制Smad4基因表达对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响被引量：1: 2010年; Smad蛋白家族是TGF-β/Smad信号通路中的重要成员,其中Smad4在该信号转导途径中起着关键作用。本研究利用RNAi技术沉默Smad4基因,探讨其对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响。设计并合成靶向Smad4的小分子干扰RNA,在脂质体的介导下转染猪卵巢颗粒细胞,荧光定量PCR检测Smad4 mRNA的表达情况;MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法分析检测细胞活性;TUNEL(原位末端核苷酸标记法)及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax的mRNA表达水平。研究显示,Smad4-siRNA能有效抑制Smad4的mRNA表达(P<0.01),细胞活性由0.31减少到0.27,凋亡率由17.0%增加到22.1%,Bcl-2的mRNA表达显著下调。结果说明沉默Smad4基因可以促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡,其机制可能与调控Bcl-2表达有关。; 张海燕王伟贺彧王莉田宽校宋晓光徐银学; 关键词：SMAD4 RNA干扰细胞凋亡

沉默Smad4对猪卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响: 颗粒细胞是卵巢中十分重要的细胞，在其发育的不同阶段合成和分泌类固醇激素及多种生长因子，并通过自分泌/旁分泌途径发挥作用。颗粒细胞的生长发育，增殖分化对卵泡发育有重要影响。TGF-β/Smad信号通路是影响颗粒细胞生长发育...; 贺彧; 关键词：SMAD4 颗粒细胞细胞增殖细胞周期; 文献传递

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贺彧