公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

刚地弓形虫多表位抗原基因在转基因番茄中的表达研究被引量：8: 2008年; 目的获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株。方法用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA转化法转化番茄子叶和下胚轴;经芽诱导、伸长以及生根的连续性抗性筛选和培育,获得Tg-MAG转基因番茄植株,练苗后移栽花盆中培育至开花、结果。用PCR、RT-PCR、蛋白质印迹(Western blotting)分别对Tg-MAG转基因植株进行DNA、RNA、蛋白水平的鉴定。结果获得的Tg-MAG转基因番茄植株经PCR和RT-PCR鉴定,得到预期360bp的Tg-MAG片段,经Western blotting筛选获得能正确表达预期相对分子质量(Mr)为11900的Tg-MAG重组蛋白,且8株具有免疫反应性,其中有2株于番茄果实中所表达的重组蛋白能与抗弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)单克隆抗体K7H3发生强免疫反应。结论获得Tg-MAG转基因番茄株系,在其果实中成功表达具有良好免疫反应性的Tg-MAG重组蛋白。; 周晓红黄小琴钟任佳朱巧珍赵莹郭瑜琪陈晓光; 关键词：刚地弓形虫转基因番茄

多重PCR快速检测金黄色葡萄球菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因及其临床应用被引量：4: 2009年; 目的建立金葡菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的多重PCR快速检测体系,了解耐药基因acc(6′)-Ie+aph(2″)、aph(3′)-Ⅲat ant(4′)-Ia在广州地区的流行分布。方法采用VITEK-60或PHOENIX-100微生物自动鉴定系统鉴定菌株及药敏试验,利用琼脂扩散法检测4种氨基糖苷类抗生素的耐药表型。通过优化PCR体系建立多重PCR并应用于检测金葡菌氨基糖苷类抗生素耐药基因。结果构建了四重PCR快速检测体系,124株金葡菌临床分离株中,acc(6′)-Ie+aph(2″)、aph(3′)-Ⅲa和ant(4′)-Ia的检出率分别为62.1%、32.3%和1.6%;所有庆大霉素、奈替米星以及阿米卡星耐药的金葡菌菌株均检测到上述3个耐药基因中的1个或1个以上基因;74株mecA阳性菌株中72株(97.3%)检测到acc(6′)-Ie+aph(2″)基因。结论所构建的多重PCR检测体系为临床实验室提供快速而有效的菌株耐药基因检测手段。编码AAC(6′)-APH(2″)双功能酶的acc(6′)-Ie+aph(2″)基因是金葡菌最重要的氨基糖苷类抗生素耐药基因,其次为aph(3′)-Ⅲa,ant(4′)-Ia则少见。; 黄革周晓红蒋文玲李运雄荣卡彬罗宪玲赵莹; 关键词：金葡菌多重聚合酶链反应

利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素基因型特异性靶片段: 2008年; 目的利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素(BoNT)基因型特异性靶片段质粒、菌株。方法自GenBank获取BoNT基因序列,利用DNAMAN、Lasergene、Vector NTI等多种生物信息学分析软件和BLAST等网上数据分析平台进行综合分析,以锚定BoNT/B与BoNT/E基因中的型特异性靶片段,分别设计合成5条和10条DNA短链,经重叠PCR扩增获得完整的靶片段,纯化后连接到pMD18-T载体上,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,质粒提取后进行酶切和测序鉴定。结果分析了全球已报道的60条BoNT基因序列(A、B、E、F型),于BoNT/B与BoNT/E基因中,分别锚定了215bp和360bp的靶片段,并设计合成其特异的检测引物对,经酶切、测序确证,成功合成具有型特异性的BoNT/B与BoNT/E靶片段。结论获得含有型特异性BoNT/B与BoNT/E靶片段的重组质粒pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E及其菌株。; 李莹杨春莉赵莹郭瑜琪刘昌政周晓红; 关键词：反向遗传学肉毒神经毒素克隆

植物偏爱密码子优化HPV18L1全长基因的克隆与弓形虫tSAG1在转基因番茄中的表达研究: 第一篇、植物偏爱密码子优化HPV18L1全长基因的克隆及其植物表达载体的构建。植物口服疫苗，成本低廉，使用简便，可规模化生产，且具有完整的真核细胞表达系统;果蔬类植物如番茄、香蕉等以其独具的可食（饲）性在疫苗...; 赵莹; 关键词：宫颈癌基因工程疫苗转基因番茄基因克隆; 文献传递

金黄色葡萄球菌苯唑西林及红霉素耐药基因多重PCR快速检测被引量：7: 2008年; 目的建立金黄色葡萄球菌苯唑西林和红霉素耐药基因的多重PCR快速检测体系,并进行临床应用评价,以了解耐药基因mecA、ermA、ermC在广州地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素。方法全自动仪器鉴定菌株及药敏试验,克林霉素耐药试验检测克林霉素诱导耐药,通过优化PCR反应体系建立多重PCR反应并应用于检测金黄色葡萄球菌耐药基因:mecA、ermA和ermC。结果成功构建四重PCR快速检测体系,临床评价所分离的124株金黄色葡萄球菌中,mecA、ermA、ermC检出率分别为59.7%、50%、33.9%;克林霉素诱导耐药菌株主要是ermC基因;苯唑西林耐药菌株中均能检测出mecA,红霉素耐药菌株中97.7%携带耐药基因ermA或/及ermC。结论所构建的多重PCR检测体系为临床实验室提供快速而有效的菌株耐药基因检测手段。mecA、ermA、ermC是本地区分离的金黄色葡萄球菌对苯唑西林和红霉素耐药的主要机制之一。; 黄革周晓红蒋文玲荣卡彬赵莹; 关键词：金黄色葡萄球菌多重PCR 耐药基因

植物偏爱密码子优化HPV18L1全长基因的重叠PCR合成被引量：6: 2009年; 目的以重叠PCR方法合成植物偏爱密码子优化后的人乳头瘤病毒18L1全长基因。方法自GenBank获取国内外所发布的HPV18L1全长基因序列,经生物信息学分析后选定目标序列,经Synthetic Gene Designer及JCat(JavaCodon Adaptation Tool)分析软件将此序列原始密码子改造为植物偏爱密码子,在C端加入蛋白纯化标签His-tag,获得改造后的HPV18L1全长序列(mHPV18L1)。结合酶切位点分析将mHPV18L1设计为204～477bp的五个大片段LS1-LS5,再将每个大片段分割成57～59bp的5～11个寡聚核苷酸短链,设计合成5对内引物和1对外引物,经重叠PCR扩增获得mHPV18L1全长基因,纯化后将其克隆入pMD18T载体,酶切、测序鉴定插入子。结果以重叠PCR成功扩增获得mHPV18L1全长,pMD18T-mHPV18L1重组质粒经酶切、PCR鉴定均得到预期1749bp大小的片段,并经测序验证。结论获得以植物偏爱密码子进行序列优化的mHPV18L1全长基因及其重组质粒pMD18T-mHPV18L1,为后续mHPV18L1的植物转化研究奠定了一定的工作基础。; 赵莹张丽仪刘昌政周晓红; 关键词：重叠PCR 密码子优化

全选清除导出

共1页<1>

赵莹