目的利用毕赤酵母真核系统表达Ⅰ～Ⅳ型登革病毒E蛋白Ⅲ区（DENV-1—4 ED Ⅲ），获得可分泌表达的重组蛋白ED Ⅲ。方法PCR分别扩增Ⅰ～Ⅳ型DENV EDⅢ区基因，构建至pPIC9K毕赤酵母表达质粒。酶切线性化后电转化毕赤酵母菌GS115，涂板后经G418梯度浓度筛选，获得多株抗G4184．0mg／ml的高拷贝菌株，扩大培养后，利用甲醇诱导分泌表达重组蛋白，表达上清用Ni—NTA亲和树脂纯化后以免疫印迹鉴定。结果成功构建pPIC9K—DENV-1～4 ED Ⅲ重组质粒，高拷贝菌株经甲醇诱导后分泌表达Ⅰ～Ⅳ型DENV EDⅢ重组蛋白，纯化后获得的可溶性重组蛋白经变性凝胶电泳，相对分子质量约为12×10^3，与实际相符。免疫印迹鉴定结果表明该重组蛋白能与抗His单抗和抗Ⅰ～Ⅳ型DENV小鼠血清特异结合。结论成功通过毕赤酵母高效分泌表达I～Ⅳ型DENV EDⅢ蛋白，这些重组蛋白可进一步用于疫苗、诊断试剂和E蛋白生物学功能的研究。
