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嗜人性猪内源性反转录病毒感染性克隆感染人胚肾细胞HEK293后Stathmin蛋白差异表达分析: 2010年; 目的分析嗜人性猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retroviruses,PERV）感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.; 颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚; 关键词：猪内源性反转录病毒 HEK293细胞 STATHMIN

猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立被引量：2: 2011年; 为了解猪体内细胞免疫应答机制,本研究建立猪细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系。以五指山小型猪cDNA为模板,扩增IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的基因保守区,构建相应的重组质粒,并将其作为标准品构建标准曲线。结果显示,各标准曲线的相关系数r值均大于0.990,扩增效率为90%～105%;该检测方法的敏感性较高,IL-4检测下限为1copies/μL,IL-2、IL-10及IFN-γ检测下限达为102copies/μL;重复性较好,批内重复试验与批间重复试验变异系数均小于5%。本研究为病毒感染后猪体内免疫应答等研究提供方法。; 马玉媛郭逸颜奇坡叶小丽张启模郑霖田克恭章金刚; 关键词：实时定量RT-PCR

猪细胞因子检测方法的建立与初步应用: 细胞因子(Cytokine)是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质,细胞因子的检测可以用于多种疾病(感染、炎症、自身免疫病等)的辅助诊断及疫苗接种后的细胞免疫功能评价,对于研...; 郑霖; 关键词：细胞因子酶联免疫斑点试验荧光定量RT-PCR 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 文献传递

ELISPOT检测高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染后猪γ-干扰素的分泌情况被引量：2: 2010年; 目的:研究高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染后猪外周血单个核细胞(PBMC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应。方法:将仔猪接种PRRSV,于病毒接种前后各时间点分别采血并分离PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测PBMC分泌IFN-γ的情况。结果:猪感染高致病性PRRSV后,PBMC分泌IFN-γ的能力明显增强,对照组无明显变化。结论:该结果可为研究高致病性PRRSV致病机理提供参考,为评价PRRSV疫苗诱发的细胞免疫效应提供依据。; 郑霖马玉媛颜奇坡叶小丽郭逸田克恭章金刚; 关键词：酶联免疫斑点法猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 Γ-干扰素

ELISPOT技术在人类新发传染病疫苗研究中的应用: 新发传染病(EID)是指在过去20年中发病率增加或在不久的将来可能增加的人类传染病，包含“回潮”的老传染病和新出现的传染病。本文从原理、具体实验操作、技术优势和在新发传染病疫苗研究中的应用等几方面对ELISPOT技术进行...; 郑霖马玉媛田克恭章金刚; 关键词：新发传染病免疫血清学酶联免疫斑点法; 文献传递

猪细胞因子检测方法的建立与初应用: 细胞因子(Cytokine)是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，细胞因子的检测可以用于多种疾病(感染、炎症、自身免疫病等)的辅助诊断及疫苗接种后的细胞免疫功能评价，对于研...; 郑霖; 关键词：细胞因子检测酶联免疫斑点试验荧光定量RT-PCR

酶联免疫斑点法在新发传染病疫苗研究中的应用被引量：1: 2011年; 酶联免疫斑点法(ELISPOT)是一项具有较高敏感性和特异性的细胞免疫学检测技术,目前常用于疫苗开发中评价疫苗诱发的细胞免疫效应。我们就ELISPOT技术的原理、具体实验操作、技术优势,及其在新发传染病疫苗研究中的应用等进行综述。; 马玉媛郭逸郑霖田克恭章金刚; 关键词：酶联免疫斑点法新发传染病疫苗

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郑霖