陈清英
- 作品数：19 被引量：75H指数：6
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金四川省教育厅自然科学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达被引量：4
- 2005年
- 目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值。方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行。以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,与骨架质粒pAdEasy1同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达。结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653bp个核苷酸,同源性比较该序列正确。②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL。③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经干细胞扩增出653bp的带。结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达。
- 闫乃红陈清英曹桂群卢亦路张发强袁琼兰夏庆杰
- 关键词：神经系统干细胞脑源性神经营养因子
- 唐氏综合征合并高度近视眼1例
- 2006年
- 彭海鹰陈清英夏庆杰邹云春刘陇黔
- 关键词：高度近视眼唐氏综合征眼底镜检查视力异常足月顺产眼球震颤
- RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药被引量：7
- 2008年
- 目的筛选高效dsRNA/mdr1,以备研究RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药之用。方法首先根据siRNA设计原则,以多药耐药基因(mdr1)为靶基因,设计并选择4~5条siRNA/mdr1,经BLAST后体外转录法合成dsRNA/mdr1,用Oligofectamine试剂分别转染HepG2/mdr1,然后从mRNA、蛋白(P-gp)表达水平和细胞功能变化评价HepG2/mdr1耐药性被逆转的程度,比较各个dsRNA/mdr1的逆转效率,筛选出有效的siRNA/mdr1。结果成功合成5条dsRNA/mdr1(其中1条为阴性对照),dsRNA/mdr1-4mRNA表达(18.73±1.33)%、蛋白表达变化(79.1±1.6)%^(16.8±0.4)%与其他各组细胞比较,有显著性差异;细胞内柔红霉素(DNR)累积量也较其他组明显增加(平均荧光强度79.58,阳性率84.25%,P<0.05)。结论体外转录法结合脂质体转染适用于筛选高效siRNA,肯定了siRNA干扰序列能够有效阻抑mdr1基因编码蛋白p170的功能。
- 潘光栋严律南王新平杨家印夏庆杰闫乃红陈清英张发强
- 关键词：肝细胞癌多药耐药RNA干扰
- 人内皮抑素重组腺病毒的构建及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:利用Adeasy1系统,构建并鉴定人内皮抑素(hES)重组腺病毒。方法:从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES中将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrackCMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达。结果:重组腺病毒载体经PCR鉴定正确,病毒滴度为1×108PFU/ml。结论:成功构建了人内皮抑素重组腺病毒Ad-ASP-hES,为内皮抑素基因治疗新生血管的进一步研究奠定了基础。
- 闫乃红陈清英曹桂群王玲张发强夏庆杰
- 关键词：内皮抑素腺病毒转染293细胞
- 女性A型血友病F基因突变分析被引量：2
- 2006年
- 报道罕见的女性A型血友病1例,并对其凝血因子进行基因突变分析。患者,女,65岁,因为跌倒后右胸痛2d入院,院内查体提示胸壁皮下血肿,双下肢等长,髋屈曲及内旋受限。测定凝血指标提示APTT61.3s,正常血浆纠正后为41.3s,而PT、FIB、TT均正常。有既往出血史。F活性为2%,F活性为200%,vWF:Ag为120%,vWF:RCof100%,vWF:CBA128%,F结合分析正常;髋关节X片提示:双侧髋臼发育不良,髋关节骨关节炎。临床诊断为血友病A型。提取该患者外周血DNA,根据NM000132之凝血因子F基因序列设计合成了其第14外显子特异的引物,行聚合酶链反应扩增,并对扩增产物进行测序分析,测序结果与标准序列进行比较,发现该患者出现4111A→C杂合突变,使1314位氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸,产生一错意突变,该突变未见其它文献报道。
- 周静闫乃红贾永前卢亦路余江曹桂群陈清英王玲张发强夏庆杰
- 关键词：基因突变女性
- 绿色荧光蛋白标记对大鼠骨髓间充质干细胞生长的影响被引量：9
- 2007年
- 目的:观察腺病毒pAdEasy系统携带绿色荧光蛋白对骨髓间充质干细胞的标记效率及标记对骨髓间充质干细胞生长的影响,为进一步追踪研究骨髓间充质干细胞奠定基础。方法:实验于2006-11/2007-03在四川大学华西组织胚胎学与神经生物学实验室完成。①实验材料:成年雄性SD大鼠,体质量100～120g,由四川大学实验动物中心提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,传代扩增,应用免疫细胞化学方法对培养的骨髓间充质干细胞进行鉴定。将生长到约80%融合的第3代骨髓间充质干细胞随机分为绿色荧光蛋白标记组和对照组。绿色荧光蛋白标记组加入1:100稀释的腺病毒(pAdEasy-1-pAdTrack-CMV)上清液,对照组加入磷酸盐缓冲液。③实验评估:观察绿色荧光蛋白标记对骨髓间充质干细胞生长曲线的影响。结果:体外培养的原代骨髓间充质干细胞24h内可见有少量贴壁细胞,8～10d左右达到70%～80%汇合。免疫细胞化学检测第3代骨髓间充质干细胞显示,CD44和CD90表达阳性,而CD14和CD34表达阴性。生长曲线表明,绿色荧光蛋白标记对骨髓间充质干细胞增殖无明显影响。结论:腺病毒pAdEasy系统携带绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞效率高,标记后对细胞的生长无明显影响。
- 杨朝鲜周玲马芳夏庆杰陈清英
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- PPAR-γ经其配体激活后对胆管癌细胞侵袭力的影响及相关基因表达的调控
- 2007年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)经其配体吡咯列酮(pioglitazone,PGZ)激活后,对胆管癌细胞体外侵袭力的影响及机制。方法体外培养人肝门胆管癌细胞系QBC939细胞。实验分为实验组(又分为不同PGZ浓度组)和对照组(无PGZ干预);MTT法检测PGZ对QBC939细胞的增殖抑制率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PGZ对QBC939细胞基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响;Matrigel侵袭实验和过河实验检测PGZ对QBC939细胞体外侵袭力和运动能力的影响。结果MTT结果显示干预12h、其PGZ5～40μmol/L时,细胞毒性作用不明显(P>0.05)。荧光定量PCR结果显示,PGZ能分别下调和上调MMP-7 mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,但TIMP-1 mRNA在实验组和对照组之间的差异无统计学意义。Matrigel侵袭实验和过河实验显示,随着PGZ浓度的升高,透过Matrigel膜的QBC939细胞数减少、过河时间延长,有剂量-效应关系(P<0.01)。结论PPAR-γ经其配体PGZ激活后能抑制QBC939细胞的体外侵袭力,其机制可能与调控MMP-7的表达及抑制细胞运动有关。
- 李敏程南生熊先泽吴良洪陈清英张发强曹桂群
- 关键词：胆管癌过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ吡咯列酮侵袭力
- 过氧化物酶体增殖物激活受体γ在肝门部胆管癌中的表达及其配体对胆管癌细胞生长的抑制作用被引量：8
- 2005年
- 程文程南生熊先泽夏庆杰陈清英闫乃红
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体Γ肝门部胆管癌配体胆管癌细胞QBC939PPAR-Γ
- 成都地区HBV基因型分布研究被引量：7
- 2007年
- 目的调查成都地区乙型肝炎患者外周血中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况。方法以长片段高保真聚合酶链反应(LA-PCR)扩增乙肝病毒S基因区,结合双脱氧链末端终止法(Sanger)测序技术对该地区90例乙型肝炎患者感染的HBV进行基因分型;同时与常用的基因型特异引物扩增分型法获得的分型结果进行比较,做重复试验以证实所用方法的可靠性和准确性。结果S基因直接测序法检测成都地区人群HBV基因分型结果为B基因型57例(63.3%)、C型30例(33.3%),D型3例(3.3%),无其他基因型和混合型;基因型特异引物分型法除榆出23例(25.5%)混合基因型外,其他各例结果均与S基因测序法吻合。结论成都地区HBV优势基因型以B型为主,C型次之,偶见D型。S基因直接测序法能准确鉴定HBV基因型,并较好地反映HBV基因组变化的准种特征,总体上优于型特异引物分型法,此结论具有统计学意义(P<0.001)。
- 卢亦路王玲张发强陈清英夏增亮胡迪夏庆杰
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型
- 短发夹RNA／mdr1表达载体的构建及体外表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建短发夹RNA（shRNA）／mdr1的质粒表达载体并验证其体外表达效率。方法按照pSUPER的设计要求合成mdr1基因RNAi靶序列的64bp寡核苷酸序列，退火后双酶切法（BglⅡ和HindⅢ）克隆，得到质粒pSUPER-shRNA／mdr1，转染感受态大肠杆菌，筛选阳性克隆，测序证实后扩增培养并提取，然后转染融合达90％以上的HepG2／mdr1细胞，阴性载体为对照组，实时聚合酶链反应（Real-timePCR）、流式细胞术检测mdr1基因mRNA、P-gp表达、细胞耐药性等功能变化。结果成功构建质粒载体pSUPER-shRNA／mdr1，基因测序证实靶序列插入正确；HepG2／mdr1-si组mdr1基因的mRNA表达水平是耐药株HepG2／mdr1组的56分之一；HepG2／mdr1-si组细胞和阴性对照组HepG2／mdr1细胞的P-gP表达率分别为11.0％和98．6％，P〈0．05；HepG2／mdr1组细胞耐药倍数从62．5下降到1．4，相对逆转效率99．34％；细胞内DNR累积量也明显增加，与对照组比较（79．32％比37．96％），P〈0．05。结论多药耐药基因mdr1质粒表达载体pSU-PER-shRNA／mdr1能在HepG2／mdr1内稳定表达，并逆转其耐药性。
- 潘光栋严律南夏冬杨家印夏庆杰闫乃红陈清英
- 关键词：多药耐药基因质粒
