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猪圆环病毒2型与猪圆环病毒相关性系统疾病的回顾及展望被引量：21: 2015年; 猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起猪的免疫抑制,是猪圆环病毒相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的主要病原,给养猪业带来了巨大的经济损失。文中从PCV2的进化历程、编码蛋白、对免疫系统的影响及技术防控四方面入手,对PCV2及PCV2-SD进行了全面回顾与展望。; 顾金燕邢刚雷静刘斐周继勇; 关键词：PCV2 进化历程编码蛋白

猪源转录因子AP-2δ通过增强rep基因启动子活性促进猪圆环病毒2型的复制被引量：1: 2018年; 本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)能否借助rep基因启动子区的转录因子结合位点调控自身基因转录,并寻找参与这一调控过程的宿主因子。凝胶迁移实验证实rep基因启动子具有核蛋白结合活性。DNA-pull down联合液相-串联质谱分析鉴定到了可与rep基因启动子结合的猪源转录因子AP-2δ(Porcine transcription factor AP-2δ, poTFAP2δ)。双荧光素酶报告基因试验、实时荧光定量PCR、免疫印迹及间接免疫荧光等试验证明poTFAP2δ不仅可以特异性地增强rep基因启动子活性,而且可以在PCV2感染过程中促进rep和cap基因的转录、翻译及PCV2病毒滴度。文中揭示了PCV2利用宿主蛋白促进自身增殖的分子机制,为进一步从病毒与宿主互作角度阐明PCV2的致病机制提供新的研究思路,亦为PCV2高效疫苗的研制提供理论基础。; 王越宋东峰林翠李佳容王胜男顾金燕周继勇

GST pull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4潜在互作蛋白: 2019年; 猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4。将质粒转染293T细胞表达ORF4后,通过GSTPull-down试验捕获细胞内潜在与ORF4互作的蛋白库。经SDS-PAGE分离及银染后,对所得的特异性条带进行质谱鉴定,筛选出5个与ORF4潜在互作的蛋白,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6催化亚基、α心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14样蛋白5和肌球蛋白myosin 9。上述研究结果为深入揭示ORF4在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与方向。; 林翠唐雯顾金燕顾金燕金玉兰廖敏廖敏; 关键词：猪圆环病毒2型

PCV2类ISRE和Cap蛋白N-糖基化位点的生物学功能研究: 猪圆环病毒2型(Porcinecircovirusetype2，PCV2)是圆环病毒科圆环病毒属的重要成员，它是闭合环状的单链DNA病毒，无囊膜，基因组全长1767bp或1768bp，采取滚环复制模式，它的三个主要开放阅...; 顾金燕; 关键词：猪圆环病毒2型生物学功能特异性免疫 CAP蛋白; 文献传递

PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性研究: 猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来发现的一种重要的动物病原,适量的猪干扰素能促进其在细胞中的增殖。为了揭示PCV2 Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件(vISRE)的生物学功能,本研究应用感染性克隆技术构...; 曹瑞兵顾金燕张羽陈溥言; 关键词：猪圆环病毒2型基因突变生物学特性; 文献传递

猪OAS2抗日本脑炎病毒的活性研究: 在亚洲和一些其他地区,日本脑炎是危害重大的人畜共患病.2'-5'寡腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylate synthetase,OAS)为一种干扰素诱导的抗病毒蛋白.本试验利用PCR方法获得OAS2基因OR...; 朱丹连雪顾金燕曹瑞兵陈溥言; 关键词：日本脑炎抗病毒活性; 文献传递

PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性研究: 猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来发现的一种重要的动物病原,适量的猪干扰素能促进其在细胞中的增殖.为了揭示PCV2 Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件(vISRE)的生物学功能,本研究应用感染性克隆技术构建了2株vI...; 曹瑞兵顾金燕张羽陈溥言; 关键词：猪圆环病毒2型基因突变; 文献传递

猪YTHDF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1: 2019年; YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m^6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m^6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。; 黄童杜柳阳张宇顾金燕周继勇; 关键词：原核表达多克隆抗体

PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性被引量：3: 2009年; 【目的】为了初步揭示PCV2Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件(vISRE)的生物学功能。【方法】应用感染性克隆技术构建了2株vISRE点突变的重组PCV2,对突变病毒在PK15细胞上的增殖特性、遗传稳定性及对干扰素刺激的反应特性进行了分析。【结果】Rep基因启动子区vISRE点突变后PCV2仍可在PK15细胞中正常复制,但病毒滴度比亲本毒株下降。PCV21740G-C在PK15细胞上3至10代之间遗传稳定,PCV21741A-T在PK细胞上第3代病毒保持突变基因的特征,但传至第7代时1743和1744位的AC突变为TT,并一直保持到第10代。100U/mL的PoIFN-α处理感染病毒的PK15细胞后,亲本毒株和2个突变毒株的阳性感染细胞数量均有增加,但亲本毒株病毒粒子数的增加显著高于2个突变毒株。【结论】Rep基因启动子区vISRE的突变影响PCV2在PK15上的增殖和对干扰素刺激的反应,推测其可能在干扰素促进病毒增殖中发挥调控作用。; 顾金燕曹瑞兵张羽陈溥言; 关键词：猪圆环病毒2型基因突变

海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响被引量：2: 2009年; 研究了饲料中添加海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响。144只AA肉鸡，随机分为2组，分别在饲料中添加0、200ms／kg海生素，试验期42d，每周末每组取试验鸡6只，颈动脉放血致死。取胸腺、腔上囊、脾脏，Bouin液固定，制作石蜡切片，HE染色，显微观察并摄影。结果：7日龄和42日龄试验组的胸腺指数高于同日龄的对照组，差异极显著（P〈0．01）；7日龄试验组腔上囊的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）；35日龄试验组脾脏的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）。1～6周龄试验组中，胸腺、腔上囊和脾脏的组织结构也有不同程度的变化。其中脾的组织结构变化比较明显．尤其是脾小体变化甚为明显。试验表明：添加海生素能部分增加肉鸡免疫器官指数，促进免疫器官发育。; 吴鹏王珏周斌曹瑞斌顾金燕张羽陈溥言; 关键词：海生素免疫器官

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顾金燕