麻粉莲
- 作品数：31 被引量：41H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 目的表达纯化人博卡病毒（human Bocavirus，HBoV）VP2蛋白，采用杂交瘤方法制备抗HBoVVP2蛋白的单克隆抗体。方法应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白，并用固定化金属亲和层析，纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠，利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞，并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定。结果表达并纯化获得了重组HBoVVP2蛋白，利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体，抗体效价达到1：4×10^5。结论利用HBoVVP2蛋白免疫制备了单克隆抗体，并具有较高的效价。本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础。
- 赵智慧薛鹏浩魏建民张骞郑文芝麻粉莲袁武梅郑丽舒
- 关键词：人博卡病毒
- 人白细胞介素7在CHO细胞中的表达及活性鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的:用CHO细胞表达人白细胞介素7(IL-7),并验证其促细胞增殖功能。方法:构建表达质粒pc DNA5/FRT-IL-7,用Lipo2000将辅助质粒p OG44和表达质粒共转染Flp-In-CHO细胞,潮霉素B筛选并单克隆化稳定表达目的蛋白的细胞;通过Western印迹、ELISA方法验证上清中的目的蛋白,并对其定量;用流式细胞仪检测该蛋白促外周血单核细胞增殖的能力。结果:获得了2株稳定表达IL-7的细胞,IL-7的表达量均为3 mg/(L·d);流式细胞术检测表明,所表达的IL-7的促外周血单核细胞增殖能力强于R&D原核系统表达的IL-7。结论:获得了稳定表达人IL-7的CHO细胞系,且表达的蛋白具有促外周血单核细胞增殖的功能。
- 李金松麻粉莲张骞郑丽舒
- 关键词：CHO细胞外周血单核细胞
- 人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白的原核表达及纯化
- 目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为后期的拮抗NS1蛋白的短肽筛选工作奠定基础。 方法(1)用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34/(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原核表达载体pTXB...
- 麻粉莲
- 关键词：H1N1亚型NS1蛋白原核表达纯化
- 文献传递
- 北京地区呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒流行病学和基因进化分析被引量：4
- 2022年
- 目的分析北京地区呼吸道感染住院儿童人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)的流行病学特征,阐明遗传进化特点。方法采用real-time PCR方法对2017—2019年北京友谊医院呼吸道感染住院患儿的2848份鼻咽抽吸物样本进行HBoV1核酸检测,结合临床信息进行流行病学分析;利用巢氏PCR方法扩增HBoV1的NP1和VP1基因,分析序列同源性;构建VP1的最大分支可信度树和种群进化图,进行时间进化分析。结果2848份样本中检出HBoV1阳性样本90份,感染率为3.16%,5岁以下患儿居多(93.33%,84/90)。HBoV1感染全年可见,10月份病例数最多,检出率为7.23%(18/249)。HBoV1阳性病例多与其他呼吸道病毒混合感染(48.89%,44/90),临床症状多为咳嗽和发热。巢氏PCR扩增获得NP1区序列55条和VP1序列47条,核酸同源性分别为98.9%~100%和99.1%~100%。HBoV1 VP1时间进化分析显示本研究获得的HBoV1基因序列出现在两个进化分支上,HBoV1种群动态平稳。结论HBoV1是导致北京地区儿童呼吸道感染的常见病毒之一,其基因进化相对稳定,但仍需持续监测。
- 张骞王超黄益曼麻粉莲郑丽舒
- 关键词：呼吸道感染人博卡病毒基因进化
- 人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白的原核表达及纯化被引量：6
- 2009年
- 目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白。方法用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原核表达载体pTXB1,构建重组原核表达质粒pTXB1/NS1,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达形式和表达量。经几丁质柱亲和层析纯化表达蛋白,串联飞行时间质谱仪检测其相对分子质量。结果所构建的重组表达质粒pTXB1/NS1序列完整,插入的基因片段全长690bp。以1.0mmol/LIPTG37℃诱导4h,重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的50%以上。破菌上清及沉淀中均有目的蛋白表达。纯化的NS1蛋白纯度达95%以上,相对分子质量约为26000。结论已成功表达并纯化了人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为其进一步的研究奠定了基础。
- 麻粉莲李引乾郑丽舒张骞张万菊张钫刘斌侯云德
- 关键词：H1N1亚型NS1蛋白原核表达纯化
- 人乳头瘤病毒18型L1蛋白的包涵体和可溶性表达及纯化被引量：2
- 2014年
- 目的:原核表达系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,建立包涵体和可溶性表达的L1蛋白的纯化方法。方法:构建重组表达质粒p GEX-4T-1-HPV18 L1,在大肠杆菌BL21中以包涵体和可溶性方式表达HPV18 L1蛋白。通过超声波破碎菌体、洗涤包涵体、碱变性、透析复性和谷胱甘肽(GST)琼脂糖凝胶4B亲和层析纯化包涵体蛋白;在菌体中加入三磷酸腺苷(ATP)和3.5 mol/L尿素孵育后,GST 4B亲和层析纯化可溶性蛋白,凝血酶酶切。SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达和纯化产物。结果:SDS-PAGE结果表明,HPV18 L1蛋白以包涵体和可溶性方式在大肠杆菌BL21内高效表达,均产生相对分子质量约为86 000的HPV18 L1-GST融合蛋白。Western印迹结果显示,包涵体纯化后获得的融合蛋白降解条带较多;而可溶性蛋白纯化后获得的融合蛋白未降解,凝血酶酶切后得到HPV18 L1蛋白,可与HPV18 L1蛋白单克隆抗体结合。结论:采用原核系统表达了HPV18 L1-GST融合蛋白,分别建立了包涵体和可溶性蛋白的纯化方法,获得HPV18 L1蛋白,为其进一步应用奠定了基础。
- 麻粉莲张骞郑丽舒
- 关键词：包涵体可溶性蛋白纯化
- JY佐剂对HPV16和18型L1病毒样颗粒黏膜免疫效果的影响
- 2015年
- 目的 探讨JY佐剂对人乳头瘤病毒16和18型L1病毒样颗粒（HPV16 ＋18 L1 VLP）黏膜免疫效果的影响.方法 用含或不含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP分别经鼻腔和肌内注射免疫小鼠3次,检测血清IgG抗体、中和抗体和肺灌洗液sIgA抗体滴度与细胞免疫反应.结果 含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP鼻腔免疫组血清IgG抗体滴度明显高于不含佐剂组（P＜0.01）,含或不含佐剂的VLP肌内注射组抗体滴度相同;含JY佐剂的HPV16＋ 18 Ll VLP肌内注射免疫组血清中和抗体滴度高于不含佐剂组,仅在含有佐剂的VLP鼻腔免疫组检测到血清中和抗体;含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP鼻腔免疫组肺灌洗液sIgA抗体浓度明显高于不含佐剂组（P＜0.05）;含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP鼻腔免疫和肌内注射组细胞斑点数均明显高于不含佐剂组（P ＜0.01,P＜0.05）.结论 JY佐剂能增强HPV16＋ 18 L1 VLP经鼻腔免疫后的小鼠的细胞、体液和黏膜免疫应答,但肌内注射免疫组佐剂作用不明显.
- 麻粉莲郑文芝张骞袁武梅郑丽舒侯云德
- 关键词：乳头状瘤病毒病毒粒子免疫黏膜
- 人乳头瘤病毒18型L1蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的:利用昆虫杆状病毒系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白。方法:将L1基因与p Fast Bac1(p FB1)载体连接,构建转移载体p FB1-L1,转化含Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒r Bacmid-L1;r Bacmid-L1转染Sf9细胞,获得重组病毒r Bac-L1;PCR法检测重组杆状病毒基因组L1基因,间接免疫荧光法和Western印迹检测L1蛋白的表达。结果:穿梭质粒r Bacmid-L1经PCR鉴定构建正确;感染r Bac-L1的Sf9细胞经PCR扩增可见1629 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western印迹鉴定与小鼠抗L1单克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约60 000处可见特异性条带。结论:利用昆虫杆状病毒表达系统表达了HPV18 L1蛋白。
- 麻粉莲张骞郑丽舒
- 关键词：L1蛋白人乳头瘤病毒18型杆状病毒SF9细胞
- 人多瘤病毒KI和WU PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2015年
- 目的 针对人多瘤病毒KI株和WU株,建立一种快速、特异、灵敏的标准SOP,并初步应用于200例北京地区呼吸道感染儿童的NPA（Nasopharyngea Aspirates）的检测.方法 设计巢式PCR和实时荧光定量PCR方法,检测KIPyV和WUPyV基因,并对扩增产物进行序列分析,比较其应用于儿童NPA的检测效果.结果 KIPyV和WUPyV的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测灵敏性分别为10拷贝/μl和1拷贝/μl,高于巢式PCR（500拷贝/μl）,两种检测方法中均无其他呼吸道病毒阳性扩增.TaqMan探针实时荧光定量PCR可重复性检测中KIPyV和WUPyV的CV值分别小于2.9％和1.95％.应用巢式PCR KIPyV和WUPyV阳性检出率为1.5％和8％,TaqMan探针实时荧光定量PCR检测检出率为12％、14％.结论 本研究建立了一种灵敏性、可重复性好、特异性高的快速核酸检测方法,其在临床上有较好的应用前景。
- 张骞郑文芝袁武梅麻粉莲郑丽舒
- 关键词：逆转录聚合酶链反应
- 尼帕病毒Taqman qRT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2020年
- 尼帕病毒(NiV)是一种高致病性人畜共患病原体,可引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病,目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,建立NiV检测方法十分必要。建立针对尼帕病毒N基因的Taqman qRT-PCR检测方法,应用于样本尼帕病毒检测及定量。针对尼帕病毒N基因保守区域设计引物和探针,建立Taqman qRT-PCR检测方法,评价该检测方法灵敏度、特异性和可重复性,并应用此方法进行样本检测。本研究建立的Taqman qRT-PCR检测方法可以特异性的检测尼帕病毒,检测灵敏度为10~2拷贝/μL,标准曲线线性范围为1.0×10~9~1.0×10~2拷贝/μL,可重复性较好,能够有效检出尼帕病毒马来西亚病毒株和孟加拉病毒株,可用于样本尼帕病毒的检测及定量。
- 王浩麻粉莲王超黄益曼郭琼郑丽舒
- 关键词：尼帕病毒核酸检测
