- 口服Ag85A DNA疫苗表达产物在脾脏的分布被引量：3
- 2009年
- 目的 检测口服Ag85A DNA疫苗表达产物在脾脏内的分布，为阐明口服DNA疫苗可诱导全身性免疫应答的机制提供依据。方法 将本实验室构建的pCDNA3．1^＋-Ag85A真核表达重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α进行扩增，无内毒素抽提纯化，进一步用脂质体包裹制成口服重组Ag85A DNA疫苗。将C57BL／6小鼠随机分为2组，即生理盐水组和DNA疫苗组。分别将生理盐水和Ag85A DNA疫苗以灌胃方式投给各组小鼠，共免疫3次，每次间隔14d，末次免疫后14d处死小鼠，取脾，免疫组化、免疫荧光法检测Ag85A表达产物在脾脏的分布情况。结果 Ag85A重组DNA疫苗的表达产物在小鼠脾脏白髓、边缘区和红髓的脾索处有广泛分布，在边缘区及红髓的脾索处的检出强度高于白髓。免疫组化结果中边缘区与白髓比较t=3．039，P〈0．05；红髓的脾索与白髓比较t=3．068，P〈0．05；边缘区与红髓的脾索比较t=1．750，P〉0．05。免疫荧光结果中边缘区与白髓比较t=3．144，P〈0．05；红髓的脾索与白髓比较t=3．098，P〈0．05；边缘区与红髓的脾索比较t=1．369，P〉0．05。结论口服脂质体包裹的DNA疫苗的表达产物存在于脾脏，表明经口途径接种的DNA疫苗可能会在脾脏诱导全身性免疫应答的产生。
- 徐佳刘滢王大南于森冯永辉单风平吕昌龙
- 关键词：AG85ADNA疫苗脾脏
- Ag85A真核表达重组体的构建及稳定转染细胞系的建立被引量：2
- 2009年
- 构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)的真核表达重组体,转染L929细胞,建立稳定转染细胞系。从质粒V1Jns.tPA-Ag85A中经PCR扩增出Ag85A基因,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染L929细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,Western Blot检测Ag85A的表达。成功构建pcDNA3.1/myc-HisA-Ag85A真核表达载体并稳定转染L929细胞,成功表达了目的基因。为进一步研究Ag85ADNA疫苗对结核杆菌的免疫防护作用奠定了基础。
- 刘滢张佩冯永辉王大南徐佳吕昌龙
- 关键词：AG85A真核表达载体转染
- pGEX-6p-1-Ag85A载体的构建表达与口服减毒伤寒杆菌携带Ag85A DNA疫苗免疫效应的研究
- 目前全球约三分之一人口受到结核杆菌感染，每年死亡人数约300万人，卡介苗(BCG)作为目前唯一临床使用的疫苗，其预防效果并不稳定，研制新型的有效疫苗防治结核病成为当务之急。
迄今为止对于结核杆菌的保护性抗原仍不...
- 刘滢
- 关键词：结核病免疫应答疫苗载体
- 文献传递
- 口服脂质体包裹Ag85A DNA疫苗诱导抗体的产生
- 2009年
- 制备脂质体包裹的Ag85A口服DNA疫苗,并观察小鼠口服后所诱生的抗体产生情况。用脂质体包裹重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ag85A制备口服DNA疫苗,并用脂质体包裹空质粒pcDNA3.1/myc-HisA作为对照。将C57BL/6小鼠随机分为3组,即生理盐水组、空质粒组和重组质粒DNA疫苗组。分别将生理盐水、空质粒和重组质粒DNA疫苗以灌胃方式投给各组小鼠,共免疫3次,每次间隔14d,末次免疫后14d处死小鼠,ELISA法检测血清中Ag85A特异性抗体水平,放射免疫法测定肠组织中分泌型IgA(sIgA)含量。重组质粒组血清中Ag85A特异性抗体滴度为1160,空质粒组和生理盐水组血清中均未捡出Ag85A特异性抗体。重组质粒组肠组织中sIgA含量(0.3761±0.0456)μg/mL较空质粒组(0.2374±0.0414)μg/mL和生理盐水(0.1993±0.0899)μg/mL组显著增高(P<0.05),而空质粒组和生理盐水组未见有意义的变化(P>0.05)。口服脂质体包裹Ag85ADNA疫苗可诱导外周特异性抗体的产生和肠道黏膜局部sIgA的水平的升高。
- 王大南刘滢张佩冯永辉单风平Seif S.Salum Mchenga吕昌龙
- 关键词：AG85ADNA疫苗脂质体
- 口服pCDNA3.1+/Ag85A DNA疫苗在小鼠肠道的表达
- 2017年
- 目的分析口服pCDNA3.1+/Ag85A DNA疫苗在小鼠肠道局部的表达情况。方法用脂质体包裹pCDNA3.1+/Ag85A DNA质粒制成口服疫苗。对照组雌性C57BL/6小鼠5只用生理盐水灌胃,实验组雌性C57BL/6小鼠5只用脂质体包裹的Ag85A DNA疫苗灌胃。共免疫3次,每次间隔14 d。免疫结束后14 d处死小鼠,取小肠组织固定于4%多聚甲醛中备用。采用免疫荧光和免疫组化方法检测两组小鼠小肠派氏淋巴结、派氏淋巴结内的树突状细胞和小肠黏膜上皮细胞中Ag85A的表达情况。结果在实验组小鼠的小肠黏膜上皮细胞、派氏淋巴结以及派氏淋巴结内的树突状细胞中均检测到重组pCDNA3.1+/Ag85A DNA疫苗的表达,而且不同部位的小肠黏膜上皮细胞中Ag85A的表达强度不同,靠近固有层的小肠黏膜上皮细胞内Ag85A的表达强度比靠近肠腔侧的小肠黏膜上皮细胞高(P<0.05)。在对照组小鼠上述部位无重组DNA疫苗的表达。结论脂质体包裹的口服DNA疫苗能够被小鼠肠道吸收,同时可诱导特异性黏膜免疫反应。
- 徐佳刘滢于淼冯永辉吕昌龙
- 关键词：AG85ADNA疫苗上皮细胞树突状细胞小鼠
