吕宏亮
- 作品数：22 被引量：131H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 儿童流行性腮腺炎血清流行病学及疫苗免疫效果研究被引量：67
- 2002年
- 为了解儿童中流行性腮腺炎 (腮腺炎 )的免疫情况 ,观察腮腺炎减毒活疫苗的安全性和免疫原性 ,选取 5 16名2～ 9岁儿童进行血清流行病学调查 ,采用血凝抑制 (HI)试验检测血清HI抗体。抗体阴性者进行接种疫苗 ,接种后 4 8h内观察人体副反应 ,并分别在免疫后 1个月、12个月、36个月采血测定HI抗体。 5 16名 2～ 9岁儿童中 ,腮腺炎HI抗体阳性者 171人 ,总阳性率为 33 1% ,2～ 3岁、4～ 6岁和 7～ 9岁 3组的抗体阳性率分别为 17 1%、2 8 2 %和 4 5 9%。 345名抗体阴性儿童接种了腮腺炎减毒活疫苗 ,1个月后抗体阳转率分别为 81 6 1%、76 5 5 %和 81 4 2 %(总阳转率为 79 4 2 % ) ,抗体几何平均滴度 (GMT)则分别达到 1∶13 4 2、1∶14 39和 1∶12 2 9(平均为 1∶13 4 0 ) ,无一例出现严重的副反应。免疫后 12个月、36个月抗体阳性率及抗体GMT均有所降低 。
- 王玲吕宏亮王世文王玉琳
- 关键词：流行性腮腺炎血清流行病学减毒活疫苗免疫原性儿童
- 人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性被引量：3
- 2002年
- 以INFα -m基因为模版 ,采用overlappingPCR技术构建甲硫氨酸脑啡肽干扰素表达质粒 pBV2 2 0 /Enk - /Met-INFα -m ,转化大肠杆菌DH5α表达 ,产物以包涵体形式存在。包涵体经分离、变性、复性 ,然后经CM -Sepharose-FF、DEAE -Sepharose -FF离子交换层析和Sephacryal-HR10 0分子筛纯化 ,获得较纯的Enk -IFNα -m融合蛋白。生物活性检测表明 ,融合蛋白不仅具有干扰素的抗病毒、抗增殖、增强NK细胞功能的活性 。
- 吕宏亮陈勇李武平段招军魏开坤赵军侯云德
- 关键词：人干扰素脑啡肽融合蛋白生物学活性
- 脑啡肽-干扰素α-m融合蛋白外用治疗单纯疱疹病毒感染被引量：1
- 2002年
- 为探讨脑啡肽 -干扰素α -m融合蛋白 (EI)外用治疗单纯疱疹病毒感染的作用 ,分别用HSV - 1感染兔子角膜、HSV - 2感染豚鼠阴道建立动物感染模型。兔子角膜感染 2 4h后用融合蛋白滴眼液治疗 ,每天 3次 ,每次0 5ml,共 14天。豚鼠阴道感染 4 8h后 ,用融合蛋白涂剂抹外阴病灶 ,每天 3次 ,每次 10mg ,共 14天。用IFNα -m和生理盐水 /赋形剂作为对照。采用记录病损程度分级法进行临床症消减观察 ,并于治疗前后测定实验动物病灶病毒滴度、HSV抗体滴度及NK细胞活性。结果显示 :与IFNα -m相比 ,EI治疗组实验动物病毒感染症状大幅减轻且病程缩短 ,动物病灶中病毒滴度下降 ,抗HSV抗体滴度升高 ,NK细胞活性增强。说明脑啡肽干扰素融合蛋白具有较强的消除炎症和局部抗病毒作用 。
- 吕宏亮李武平张成海马超王玉淋邹勇衣作安陈勇吴斌文段招军侯云德
- 关键词：脑啡肽融合蛋白外用单纯疱疹病毒感染
- 地高辛标记探针检测Vero细胞狂犬病疫苗残余Vero细胞DNA含量
- 2001年
- 地高辛标记Vero细胞DNA ,并制备成DNA探针。以此探针进行点杂交 ,确定探针的工作浓度、特异性及灵敏度。并用此法监测Vero细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化工艺的Vero细胞DNA去除率 ,测定精制Vero细胞狂犬病疫苗半成品中残余Vero细胞DNA含量。结果表明 ,该法特异性强 ,重复性好 ,快速简便 ,灵敏度高 ,检测值可达 5pg/剂量 ,可用于精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的质量控制和半成品检定。
- 吕宏亮邹勇宋继萍王玉琳沈心亮周书全
- 关键词：狂犬病疫苗
- 精制狂犬病疫苗纯化方法的比较研究被引量：1
- 1999年
- 地鼠肾细胞狂犬病疫苗原液经１００ ｋＤ 膜浓缩 ３０ 倍，分别选用（１）ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析法；（２）Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００ ＨＲ 分子筛选层析法；（３）二次蔗糖等密度区带离心法对其进行纯化。用此三种方法各试制３ 批精制疫苗，结果表明，经ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析纯化后疫苗总蛋白含量减少９９％ 以上，抗原比活性提高１５９ 倍，抗原回收率达５０％ ，纯化疫苗以ＮＩＨ 法效力测定平均为５．４ ＩＵ／２ｍ ｌ；经Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００ＨＲ 分子筛层析纯化后疫苗总蛋白含量减少 ９８％ 以上，抗原比活性提高４１ 倍，抗原回收率达６３％ ，纯化疫苗效力平均为６．２５ ＩＵ／２ｍ ｌ；经一次蔗糖等密度区带离心法纯化后疫苗总蛋白含量减少９８％ 以上，抗原比活性提高３２１ 倍，抗原回收率达４３％ ，纯化疫苗效力平均为６．１８ ＩＵ／２ｍ ｌ，三种纯化疫苗均符合Ｗ ＨＯ 规程要求。
- 王玉琳吕宏亮李薇魏至栋邹勇梁勇安静
- 关键词：精制狂犬病疫苗纯化
- 定向进化人α型干扰素基因家族的研究被引量：6
- 2003年
- 应用DNA改组(DNAshuffling)技术重组了12种人α型干扰素基因,并结合噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术构建了噬菌体干扰素改组文库,采用简便的、功能性的定向竞争筛选方法,获得了比活达1 0×109IU/mg的新型α型基因工程复合干扰素,是目前国际上已投产的α2型干扰素的5倍,具有生产应用前景,上述策略也为其它细胞因子或酶的改造提供了借鉴方法。
- 段招军王红艳李武平吕宏亮赵军魏开坤马学军侯云德
- 关键词：DNA改组干扰素纯化
- rhIFN-β1a cDNA在CHO细胞上的表达
- 2004年
- 目的 在CHO细胞上表达rhIFN βcDNA。 方法 利用脂质体技术 ,将含hIFN β基因的pRC CMV IFNβ DNA载体和pSV2dhfr DNA质粒按 3∶1的比例转染CHO k1dhfr 细胞 ,后者是选择性标记。筛选在缺乏胸腺嘧啶的选择培养基生长的单个细胞克隆 ,通过MTX加压扩增与dhfr基因共转染IFNβ基因。筛选的细胞株通过大规模培养 ,收集培养液经一系列的步骤纯化。结果 能够耐受 0 .6 μmol LMTX的细胞可产生IFN 10 5unitperday 10 6cells ,CHO细胞中表达的hIFN β纯化后的抗病毒比活性可达 2 .2× 10 8IU mg。结论 建立了适合表达人干扰素
- 李武平衣作安张成海王刚郑丽舒段招军吕宏亮侯云德
- 关键词：干扰素卵巢细胞
- 双抗体夹心ELISA法检测狂犬病疫苗抗原活性组分被引量：6
- 1999年
- 采用多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法快速检测狂犬病毒抗原含量。结果表明，灵敏度达到１５μｇ／ｍｌ，同时特异性及变异系数均合乎要求。本方法用于精制狂苗制备过程中有效抗原活性组分的检测准确、快速、重复性好，且抗原的ＥＬＩＳＡ效价与ＮＩＨ动物法测定效价具有平行趋势。
- 王玉琳封多佳吕宏亮李薇马超魏至栋
- 关键词：双抗体夹心ELISA狂犬病毒抗原疫苗
- 重组人IFNα 1c/86D/22R/27F在大肠杆菌中的表达及活性研究
- 2003年
- 利用重组PCR点突变技术将人IFNα 1c/ 86D的第 2 2、2 7位的Ser编码序列突变为Arg和Phe ,DNA测序正确 ,并在大肠杆菌BL2 1中表达 ,表达量为 19%。采用CM Sepharose、DEAE SepharoseFF纯化后WesternBlot检测为单一条带。细胞病变抑制法测定其比活为 3.5 1× 10 7U/mg ,较IFNα 1b( 1.5 5 10 7U/mg)略高。抗A5 4 9细胞的增殖活性与IFNα 1b相当。
- 陈勇吕宏亮段招军李武平王红艳刘永清郑菊梅侯云德
- 关键词：点突变大肠杆菌
- 精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化被引量：4
- 2001年
- 通过狂犬病病毒灭活和纯化试验 ,试制精制Vero细胞狂犬病疫苗。疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量、Vero细胞残余DNA含量、疫苗效价、安全试验均能达到WHO规程要求。
- 吕宏亮宋继萍段招军邹勇沈心亮王玉琳周书全
- 关键词：VERO细胞狂犬病疫苗灭活纯化
