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利用免疫共沉淀验证HT036与P311间的相互作用被引量：5: 2006年; 目的利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白HT036(hypotheticalprotein,HT036)和P311间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的HT036融合蛋白(HA-HT036)的重组载体pCMV-HA-HT036,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的P311融合蛋白(Myc-P311)的重组真核表达载体pCMV-Myc-p311,单独或者共转染人293细胞,利用免疫共沉淀技术验证HT036与P311间的相互作用。结果构建的重组表达载体pCMV-HA-HT036经双酶切鉴定正确,转染293细胞,抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-P311相互作用蛋白复合物后,用抗HA单克隆抗体进行Westernblot检测,可以检测到HA-HT036的表达。结论成功构建了HA-HT036融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中表达后利用免疫共沉淀技术证实HT036与P311之间存在着相互作用。; 袁顺宗彭旭马兵王庆红易绍萱贺伟峰陈希炜胡晓红张小容周丽娜罗高兴吴军; 关键词：免疫共沉淀相互作用

体外共刺激阻断模型中NK细胞功能抑制机制初探被引量：4: 2005年; 目的: 研究耐受状态下NK细胞功能抑制的机制。方法:利用anti-CD80抗体体外阻断CD28 /B7共刺激通路T细胞耐受模型,以51Cr标记YAC-1细胞为NK靶细胞,作51Cr标准4h释放实验,观察耐受T细胞与NK细胞共培养后对NK细胞的抑制效应。结果:51Cr释放率,耐受诱导组21%,抗原激活组24 4%,细胞对照组34%,无T细胞对照组32%;前3组上清液与NK细胞作用后靶细胞51Cr释放率分别为34%、31 6%、33 1%, 1、2两组51Cr释放率显著低于其余各组(P<0 01),而两组之间无显著性差异;无T细胞对照组与各组上清液中51Cr释放率无显著性差异。结论:在实验条件下, (1)抗原激活的T细胞及共刺激阻断后耐受的T细胞可显著抑制Balb/c小鼠NK细胞的细胞毒活性,且二者相比无显著性差异; (2)耐受T细胞与抗原反应性T细胞或未经抗原刺激的T细胞培养上清液对NK细胞的影响无显著性差异。根据体外实验结果,可初步认为T细胞可能主要以细胞间接触的方式来调节NK细胞的功能。; 袁军吴军解志杰王锡华王儒鹏周丽娜; 关键词：T淋巴细胞免疫耐受

人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析被引量：5: 2006年; 目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质。结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病。; 柏干苹周丽娜贺伟峰罗高兴陈烯伟易绍萱胡晓红石东文陈光兴方勇飞吴军; 关键词：骨关节炎滑膜成纤维细胞蛋白质组双向电泳

双向电泳-质谱法寻找类风湿关节炎疾病相关蛋白被引量：9: 2006年; 目的建立正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,以阐明RA的发病机制。方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradi-ent,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者血浆总蛋白质,凝胶经银染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果获得正常人及类风湿关节炎患者血浆蛋白双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为592和563,匹配率分别为89%和87%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为24,选取15个点进行质谱鉴定,成功鉴定7个蛋白质,其中6个蛋白质表达上调。结论两者间存在一些差异表达的蛋白质,为阐明RA的发病机制打下了坚实的基础。; 柏干苹周丽娜贺伟峰罗高兴陈烯伟易绍萱方勇飞吴军; 关键词：类风湿关节炎血浆蛋白质组双向电泳

类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析被引量：6: 2008年; 目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度（immobilized pH gradient，IPG）双向凝胶电泳（two—dimensional gel eleetrophoresis，2-DE）分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质，银染显色，PDQuest软件分析图像，比较两种细胞蛋白质组表达差异，对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定，并用Western blot验证部分表达差异蛋白质。结果①采用窄范围的pH4～7IPG胶条进行2-DE分析，正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点。有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞问有2倍以上的显著性量变。②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定，鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质。Western blot验证Enolase α、Annexin I、CathepsinD、SOD2、Peroxiredoxin2在RA滑膜细胞中表达显著升高。结论正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病。; 柏干苹周丽娜贺伟峰罗高兴陈烯伟陈光兴胡晓红石东文方勇飞吴军; 关键词：滑膜成纤维细胞蛋白质组双向电泳类风湿关节炎

甲状腺功能减退和血脂异常: <正>甲状腺激素(TH)是体内最重要的激素之一,具有重要的生理作用,包括影响物质和能量代谢,如熟知的对糖和蛋白代谢的影响。而对脂质代谢影响较为复杂和研究相对较少,涉及脂代谢的合成、动员、分解等多个方面,且可能类似与对糖和...; 陈兵邓武权周丽娜练渝张渝平王富华; 文献传递

S100A4,A10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义被引量：9: 2008年; 目的:探讨正常人与类风湿关节炎(RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,分析差异蛋白在RA发病中的作用.方法:应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者滑膜成纤维细胞总蛋白质;应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析;应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定部分差异蛋白质,并用Western Blot、免疫细胞化学技术验证表达差异蛋白质.结果:正常人及RA患者滑膜成纤维细胞蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示896和992个点.有64个蛋白质点表达存在2倍以上的差异.选取9个在RA滑膜成纤维细胞中表达上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100A4和S100A10两个蛋白质.经Western Blot、免疫细胞化学技术验证这两个蛋白在RA滑膜成纤维细胞中表达上调,与上述结果一致,并且发现S100A4在RA滑膜成纤维细胞中的表达分布发生了变化.结论:结合蛋白S100A4和S100A10可能参与RA的发病.S100A4在细胞中的表达易位可能与RA滑膜成纤维细胞表型改变有关.; 柏干苹周丽娜贺伟峰罗高兴陈烯伟陈光兴胡晓红石东文方勇飞吴军; 关键词：滑膜成纤维细胞双向电泳类风湿关节炎 S100A4基因

Survivin反义核酸真核表达载体的构建及在胶质瘤细胞中的表达: 2005年; 目的　构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas ,并检测其在恶性胶质瘤细胞SHG 44中的表达。方法　构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas ,并用脂质体介导转染入SHG 44细胞 ,通过RT PCR及westernblot检测细胞中survivinmRNA和蛋白的表达。结果　构建了survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas ,并成功导入SHG 44细胞中 ,且有效表达 ,使SHG 44细胞中survivinmRNA和蛋白表达水平均降低。结论　Survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas可以降低SHG 44细胞survivin基因的表达。; 王志成周丽娜郭德玉李海东; 关键词：SURVIVIN基因反义核酸细胞转染恶性胶质瘤

一种新的hTERT相互作用蛋白的筛选及鉴定: 目的和意义:　　端粒-端粒酶与细胞增殖、分化及衰老等增龄相关性疾病密切相关。端粒封闭染色体末端并维持染色体的稳定性,它随细胞分裂增殖而成比例的丢失,从而导致细胞衰老及死亡;端粒酶的活化,可以以其自身RNA组分(Human...; 周丽娜; 关键词：端粒酶催化亚单位生物学效应肿瘤细胞; 文献传递

整合素β4结合蛋白与P311在人胚肾293细胞中的表达及共定位: 2007年; 目的:利用激光共聚焦显微镜共定位检测整合素β4结合蛋白与P311蛋白在细胞内的分布,进一步证实它们在细胞内产生相互作用的可能性。方法:实验于2006-03/12在解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。先分别构建能在哺乳动物细胞中表达整合素β4结合蛋白的绿色荧光融合蛋白和表达P311的红色荧光融合蛋白的重组载体,经酶切鉴定正确后,利用脂质体介导法共转染人胚肾293细胞后,激光共聚焦显微镜进行共定位观察。结果:表达整合素β4结合蛋白的绿色荧光融合蛋白和表达P311的红色荧光融合蛋白的重组载体经双酶切鉴定正确,转染293细胞后,荧光显微镜下能观察到绿色和红色荧光。激光共聚焦显微镜下观察两者主要分布在293细胞的胞浆和胞核中,并且存在着共定位现象。结论:表达整合素β4结合蛋白的绿色荧光融合蛋白和表达P311的红色荧光融合蛋白的重组载体在空间分布上两者存在相互作用的物质基础。; 易绍萱袁顺宗马兵贺伟峰陈希炜胡晓红张小容彭旭周丽娜罗高兴吴军; 关键词：激光共聚焦基因表达共转染

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周丽娜

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