孙巧玲
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教委科研基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- IL-10基因修饰骨髓源性肝干细胞移植对肝纤维化大鼠细胞外基质积聚的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:评价IL-10基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSCs)移植对肝纤维化大鼠细胞外基质(ECM)积聚的影响.方法:利用免疫磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法分选大鼠β2m-/Thy-1+BDLSCs.将腺病毒介导的IL-10基因转导至BDLSCs,采用ELISA法检测IL-10蛋白分泌水平.将大鼠随机分为4组:正常组、模型组、BDLSCs组及BDLSCs/IL-10组.采用PCR法检测Y染色体性别决定基因Sry;采用VG染色法观测肝组织胶原沉积面积;Western blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;采用碱水解法检测肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)浓度;ELISA法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)等细胞外基质含量.结果:MASC法能成功分选纯化BDLSCs.IL-10修饰BDLSCs持续高浓度分泌IL-10蛋白至胞外,移植后能顺利种植于肝内,减轻胶原沉积,减少α-SMA表达从而抑制肝星状细胞活化,与BDLSCs组比较,BDLSCs/IL-10组大鼠肝组织Hyp水平显著降低(255.0±50.5μg/gvs373.0±26.7μg/g,P<0.01),血清HA,LN及PCⅢ水平也有所降低,差异具有统计学意义(40.5±7.7μg/Lvs79.4±10.3μg/L,61.5±16.4μg/Lvs77.7±12.6μg/L,14.3±0.8μg/Lvs14.9±1.5μg/L,P<0.01或0.05).结论:IL-10基因修饰BDLSCs移植能有效减少肝纤维化大鼠ECM的积聚,为治疗肝纤维化提供了新思路.
- 兰玲陈源文孙超刘博伟孙巧玲
- 关键词：骨髓源性肝干细胞白介素10肝纤维化细胞外基质
- 腺病毒介导的白介素10基因体外转导大鼠β_2m-/Thy-1^+骨髓源性肝干细胞被引量：7
- 2008年
- 目的研究腺病毒介导的白介素10(interleukin 10,IL-10)基因(AdIL-10)体外转导β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞(bonemarrow-derived liver stem cell,BDLSC)的可行性。方法利用免疫磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法分选大鼠β2m-/Thy-1+BDLSC,RT-PCR法鉴定其肝相关性表型的表达。AdIL-10转导BDLSC,根据腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达率测定转导效率,采用RT-PCR法和ELISA法分别检测IL-10的基因表达和蛋白分泌水平。采用MTT法和免疫荧光染色法分别检测腺病毒转导对BDLSC增殖能力和肝细胞样表型白蛋白(albumin,ALB)表达的影响。结果MASC法能成功分选纯化BDLSC,其在基因水平表达肝细胞样表型。AdIL-10转导BDLSC的效率呈剂量依赖性,最佳转染复数为500pfu/cell。AdIL-10修饰BDLSC高表达IL-10基因,且持续高浓度分泌IL-10蛋白至胞外。AdIL-10转导72h后,BDLSC仍保持正常的增殖能力和ALB表达。结论BDLSC是AdIL-10转导的适宜载体,为AdIL-10修饰BDLSC这一新型结合方式用于慢性肝病的治疗奠定了实践基础。
- 兰玲陈源文孙超孙巧玲李定国
- 关键词：骨髓源性肝干细胞腺病毒载体白介素10基因转导
- 肝损伤大鼠骨髓源性肝干细胞的筛选分化与扩增被引量：2
- 2006年
- 目的探讨利用肝损伤早期和淤胆血清培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选、诱导分化和扩增肝干细胞亚群,以快速、高效地获取骨髓源性肝干细胞。方法建立淤胆型肝损伤大鼠模型和制备含5%淤胆血清病理条件培养液,以促进骨髓源性肝干细胞的体内、外筛选和扩增,采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测培养2周时骨髓细胞各种肝干细胞标志表达。结果病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,细胞表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白。结论淤胆型肝损伤早期大鼠体内环境和含淤胆血清体外病理微环境可能有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞,从而为临床细胞移植治疗各种肝脏疾病提供种子细胞。
- 孙超李定国陈源文汪保灿孙巧玲
- 关键词：骨髓源性肝干细胞细胞培养干细胞肝损伤
- 体外导入外源IL-10基因对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响被引量：2
- 2007年
- 目的：利用重组复制缺陷型腺病毒AdIL-10将外源IL-10基因导入肝星状细胞并观察其对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ胶原分泌的影响。方法：用传至1～2代的大鼠肝星状细胞以2×10^5/孔接种于24孔板,按每组6复孔分为三组：（1）单纯肝星状细胞培养组;（2）AdGFP对照组：肝星状细胞培养24h后取病毒AdGFP以感染复数50感染肝星状细胞;（3）AdIL-10组：肝星状细胞培养24h后取病毒AdIL-10以感染复数50感染肝星状细胞。3d后分别收集各组肝星状细胞,提取总RNA。结果：与单纯肝星状细胞培养组相比,AdIL-10组的IL-10mRNA表达明显增强（P〈0.01）,而AdGFP对照组的IL-10mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）;AdIL-10组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达明显降低（P〈0.01）,而AdFP对照组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：重组腺病毒AdIL-10感染肝星状细胞后可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ胶原分泌。
- 胡良凯孙巧玲梁立维张建民李定国
- 关键词：白介素-10重组腺病毒肝星状细胞
- 腺病毒介导的人uPA体外转染大鼠骨髓源性肝干细胞的研究被引量：6
- 2006年
- 目的评价携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染骨髓源性肝干细胞(BDLSC)的效率,在BDLSC中的表达及其对BDLSC增殖和分化的影响。方法利用淤胆型肝损伤大鼠模型和含5%淤胆血清病理条件培养液筛选和扩增BDLSC,采用荧光显微镜检测AduPA的转染效率,采用Westernblotting法检测uPA在BDLSC中的表达,采用MTT法和免疫细胞化学法分别检测转染AduPA的BDLSC的增殖和分化变化。结果随着MOI的增高,转染效率明显增高,当MOI为500时,转染效率达92.6±2.2%,转染3天后的人uPA在BDLSC稳定表达,且转染AduPA对BDLSC的增殖和分化无明显影响。结论BDLSC可能是一种良好的基因载体细胞,可携带uPA用于肝纤维化的治疗研究。
- 孙超李定国陈源文陈颖伟孙巧玲汪保灿
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活物骨髓源性肝干细胞肝纤维化腺病毒
- Smad7和尿激酶型纤溶酶原激活剂基因共表达对大鼠肝纤维化的治疗作用被引量：1
- 2007年
- 目的观察Smad7和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因共表达对CCl_4诱导大鼠肝纤维化的治疗作用。方法40只SD大鼠皮下注射CCl_4建立肝纤维化模型。将动物分为模型组、Ad Smad7/uPA组(尾静脉注射AdSmad7/uPA)、AdSmad7组(尾静脉注射AdSmad7)和Ad GFP组[尾静脉注射仅表达绿色萤光蛋白(GFP)的腺病毒载体],每组10只,另取10只大鼠作为正常对照组。采用放射免疫法测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和层粘连蛋白(LN)水平;碱水解法检测肝组织羟脯氨酸含量;免疫组化法检测肝组织Smad7和uPA表达;天狼星红染色法检测肝纤维化程度。结果注射3d后,AdSmad7/uPA组肝组织Smad7和uPA表达量均显著增加,血清ALT、AST、PCⅢ、LN和羟脯氨酸水平较AdGFP和AdSmad7组明显下降(P值均<0.05)。AdSmad7/uPA组的肝纤维化面积为(5.96±2.72)%,明显低于AdGFP组的(13.32±2.47)%和AdSmad7组的(8.73±2.30)%(P值均<0.05)。结论Smad7和uPA双基因共表达可胁同阻断CCl_4诱导大鼠肝纤维化进程。
- 汪保灿孙超陈颖伟孙巧玲陈源文宗春华李定国
- 关键词：肝纤维化尿激酶型纤溶酶原激活剂SMAD7基因治疗
- 转基因骨髓源性肝干细胞移植对大鼠肝纤维化的影响
- 2007年
- 目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法采用淤胆型肝损伤大鼠模型和含5%淤胆血清的培养液筛选和扩增BDLSC,使用RT-PCR方法检测培养2周时肝干细胞标志表达。体外将携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染BDLSC并移植入CCl4诱导的肝纤维化大鼠体内,观察大鼠肝功能、胶原面积及病理组织学的变化。结果病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,并表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白。体内研究显示,与模型组和BDLSC组相比,BDLSC-uPA组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)及总胆红素(TBIL)水平均有不同程度的降低,凝血酶原时间(PT)时间缩短,白蛋白(ALB)水平升高,肝组织细胞外基质(ECM)水平及羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低;肝组织结缔组织增生程度减轻,假小叶形成不明显,胶原面积明显减少。结论uPA基因修饰BDLSC移植能有效抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,改善纤维化大鼠的肝功能,从而为转基因BDLSC移植治疗肝纤维化的临床应用提供理论依据和实践基础。
- 宗春华孙超汪保灿陈源文陈颖伟孙巧玲李定国
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活物骨髓源性肝干细胞肝纤维化
- 白细胞介素-10与肝脏疾病被引量：2
- 2007年
- 肝脏疾病与各种因素导致的肝脏急、慢性损伤关系密切,而炎症反应和机体的免疫调节机制在各种肝病的发生和发展中具有举足轻重的作用。白细胞介素-10是一种重要的炎症负性调控因子,参与多种疾病的病理生理调节过程,对各种肝脏疾病均有一定的影响。
- 孙巧玲李定国
- 关键词：白细胞介素-10肝脏疾病炎症
- AdIL-10对肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及TNF-α表达的影响被引量：6
- 2006年
- 目的应用携带大鼠白介素-10(IL-10)基因的重组缺陷型腺病毒(AdIL1-0)感染原代培养的大鼠肝星状细胞(HSC),通过体外实验观察外源性大鼠IL-10基因对HSC中αSMA、TGF-β1和TNFα表达的影响。方法以胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离大鼠原代HSC,并用AdIL10感染HSC(同时设AdGFP对照组及正常对照组),分别采用RTPCR法和WesternBlot法检测感染后HSC中IL10mRNA及蛋白水平的表达;WesternBlot法检测HSC中转化生长因子β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达;免疫组织化学法检测αSMA在HSC中的表达。运用图像处理系统对结果加以分析。结果感染AdIL10的HSC中IL10的mRNA及蛋白水平均较对照组上调(P<0.001);而其表达的TGFβ1、TNFα及αSMA与对照组相比明显降低(P均<0.001);正常对照组和AdGFP对照组中上述指标的表达均无明显差异(P均>0.05)。结论外源性大鼠IL10基因导入大鼠HSC后可能通过影响TGFβ1及TNFα的表达而抑制HSC的活化。
- 孙巧玲李定国胡良凯孙超汪保灿陈源文
- 关键词：转化生长因子-Β1肿瘤坏死因子-Α肝星状细胞
- 转染大鼠白细胞介素10基因的骨髓源性肝干细胞移植治疗大鼠肝纤维化
- 2009年
- 目的探讨转染大鼠白细胞介素10（IL-10）基因的β2m^-／Thy-1^＋骨髓源性肝干细胞（BDLSC）移植对大鼠肝纤维化的治疗效果。方法分选Wistar大鼠的β2m^-／Thy-1^＋ BDLSC，转染大鼠IL-10基因。Wistar大鼠皮下注射CCl4，制作肝纤维化模型，分为3组：（1）模型组，经大鼠门静脉分支输注无菌生理盐水1ml；（2）BDLSC组，经大鼠门静脉分支输注β2m^-／Thy-1^＋ BDLSC悬液1ml（含2×10^5个细胞）；（3）IL-10组，经大鼠门静脉分支输注转染IL-10基因的β2m^-／Thy-1^＋ BDLSC悬液1ml（含2×10^5个细胞）；另以皮下注射橄榄油的Wistar大鼠为对照（正常组）。用细胞核染色剂二脒基苯基吲哚（DAPI）标记β2m^-／Thy-1^＋ BDLSC，以观察该细胞在肝内的定位情况。观察各组大鼠肝组织病理学改变和胶原的沉积情况，检测其肝功能和凝血功能。结果大鼠肝组织中可见DAPI标记的β2m^-／Thy-1^＋ BDLSC。模型组大鼠的肝组织病理学改变明显，BDLSC组病理学改变有所减轻，IL-10组的组织形态最接近正常组。模型组大鼠肝组织内胶原沉积明显增多，BDLSC组胶原沉积较少，IL-10组胶原沉积明显减少。IL-10组大鼠的血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）和胆红素总量（TBIL）以及全血凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血激酶时间（APTT）均低于模型组，差异均有统计学意义（P〈0．05），其中ALT、TBIL、PT和APTT均降至正常组水平，与BDLSC组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论转染大鼠IL-10基因的β2m^-／Thy-1^＋ BDLSC移植对大鼠肝纤维化有一定的治疗效果。
- 兰玲陈源文孙超刘博伟孙巧玲李定国
- 关键词：肝硬化骨髓祖代细胞白细胞介素10
