崔洁
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建及差异基因的分析
- 2014年
- 目的构建森林革蜱（Dermacentor silvarum）半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,分析差异基因。方法以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组（tester）,未吸血雄蜱为对照组（driver）,分别提取总RNA,SMARTER PCR合成双链cDNA,RsaⅠ酶切后连接接头并进行抑制消减杂交。巢式PCR扩增杂交产物,经柱纯化后连接至PMD-18T中,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,进行蓝白斑筛选,并计算文库滴度和重组率。随机挑选阳性克隆,反向Northern杂交（Northern blotting）和RT-PCR法检测抑制消减杂交cDNA文库的消减效率。随机选取差异基因阳性克隆送测序,利用Blastn和Blastx对测序结果进行核酸种类同源性分析和蛋白种类同源性的比对和功能预测。结果电泳结果显示,森林革蜱半饱血雄蜱和未吸血雄蜱的ds cDNA均呈弥散拖影,大小在500bp以上,经RsaⅠ酶切后,大小在100～1000 bp;接头连接效率大于25%。巢式PCR结果显示,消减的ds cDNA呈聚集条带,大小在250～500 bp。构建的森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的滴度为700 000 pfu/ml,重组率为88.5%（239/270）。反向Northern blotting检测结果显示,当以森林革蜱半饱血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较强;以未吸血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较弱。RT-PCR结果显示,随机选取的8个阳性克隆中,有5个在半饱血状态下表达上扬,抑制消减杂交cDNA文库消减效果较好。115个阳性克隆测序得到87个差异表达序列标签（ESTs）,大小为200～800 bp。Blastn分析结果显示,87个序列中,与其他蜱基因有同源性的53个,同源性为70%～98%,与库蚊、甲虫和果蝇等其他昆虫基因有同源性的34个,同源性为32%～65%。Blastx预测结果显示,序列中片段表达的蛋白包括参与吸血和血液消化的不同酶类,主要功能为能量代谢、信号传导和转录调节等。结论建立了森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,差异基因
- 刘琪王伟琳孟庆峰徐展崔洁刘新欣王伟利
- 关键词：抑制消减杂交CDNA文库差异基因
- 新城疫病毒毒力的演化研究进展被引量：2
- 2013年
- 新城疫是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。该病主要以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。新城疫对我国养禽业的发展造成了巨大的威胁,其病毒是一种突变快、进化快的病原,该病毒毒力的强弱并不是一成不变的,其毒力具有本身的演化趋势。通过对新城疫病毒的生物特性、新城疫病毒毒力的演化及与其毒力演化相关的因素研究,旨在探讨新城疫病毒毒力的演化与流行趋势的关系。
- 崔洁王玮琳王伟利孟庆峰钱爱东
- 关键词：新城疫新城疫病毒毒力
- 维氏气单胞菌菌影疫苗的构建及其溶菌动力学研究被引量：4
- 2014年
- 细菌菌影(Bacterial ghosts)是通过诱导Phi X174噬菌体中裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达所获得的无细胞内容物的空细菌体。它保持了与活菌相同的膜蛋白成分、天然结构、细胞表面抗原等特性,是一种新型的死菌疫苗。为优化维氏气单胞菌(A.veronii)菌影制备条件,本实验将带有庆大抗性的裂解基因E转入A.veronii ATCC35624株中,通过温度变化对其进行溶菌动力学试验,每隔30 min对菌液OD600nm及其活菌数进行测定,当OD600nm稳定不再下降时,通过扫描电镜观察裂解后菌体的形态变化。结果显示,在诱导30 min后OD600nm值开始持续下降,当其下降到最低值时,活菌检测结果表明几乎无活菌存在。本研究利用菌影形成机制构建A.veronii菌影,为新型疫苗的制备提供依据。
- 徐展孟庆峰王伟利钱爱东刘琪崔洁
- 关键词：维氏气单胞菌疫苗
