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应万涛: 作品数：97 被引量：466H指数：10; 供职机构：北京蛋白质组研究中心更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生理学一般工业技术更多>>

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基于质谱的位点特异性糖蛋白糖链结构解析研究: 糖基化修饰过程存在复杂的调控机制,糖链结构的变化,参与并调控重要的生理或病理过程。特定的糖型,如核心岩藻糖修饰、beta-1,6天线的N连接糖等,可以影响抗体的ADCC效应,以及参与肿瘤转移过程等。糖链结构的低丰度特点,...; 应万涛

糖蛋白的质谱分析策略: 2004年; Glycoprotein is a kind of proteins widely distributed in the bodies of animals and plants. The identification of its characteristic is very difficult due to the complexity of its structure. In this paper, a serious of methods for glycoprotein analysis was established by mass spectrum. The molecular weight, quantity of N-glycans and sialic acids were determined by matrix-assisted laser desorption time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOFMS) directly. The glycosylation sites of glycoprotein were confirmed by its PMF,which produced by the combination digestion of PNGase F and Endoproteinase. The sequence of glycopeptide was detected by liquid chromatography-mass spectrometry (LCMS). The recombined biotechnologic productions including rhEPO,proUK and Spike protein of SARS coronavirus were well characterized by using these methods.; 蔡耘代景泉张养军卢庄王京兰应万涛钱小红; 关键词：糖蛋白质谱分析分子量糖链结构

蛋白质组学研究中傅立叶变换离子回旋共振质谱数据采集方法的比较被引量：2: 2010年; 探讨了线性离子阱-傅立叶变换离子回旋共振质谱(LTQ-FT)的数据采集模式对蛋白质组鉴定结果的影响,比较和分析了针对不同复杂程度样本的最佳采集模式。对于α-乳清蛋白4种标准蛋白质酶切肽段混合物的简单体系,在傅立叶变换离子回旋共振腔中选3个最强母离子进行选择离子监测扫描后,再实施二级碎裂的方法(SIM3)得到的肽段覆盖率,分别是直接选10个最强母离子进行二级碎裂(FT10)方法得到的肽段覆盖率的1.5～1.9倍。另外,对酵母蛋白酶切肽段混合物的复杂体系鉴定时,只采集双电荷和三电荷母离子进行二级扫描的方法(FT10_23)比单电荷、双电荷和三电荷都采集的方法(FT10_123)得到的图谱鉴定成功率提高64.1%。实验还对不同数据采集模式下图谱的特点进行了考察。本研究表明,针对不同复杂程度的样本,应采取不同的质谱数据采集方法。; 曾家伟贾伟应万涛钱小红; 关键词：蛋白质组学

利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型被引量：5: 2013年; 蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。; 马成潘一廷张琪王继峰钱小红应万涛; 关键词：反相色谱

人肝脏蛋白质表达谱数据可靠性的初步评价: 基于串联质谱技术的规模化蛋白质鉴定过程中,如何正确区分阳性鉴定结果和阴性鉴定结果是蛋白质组学研究所面临的一大挑战。搜索“反转数据库”法作为一种基本的数据评价方案,可以有效降低数据的假阳性率,提高鉴定结果的可靠性。该方法在...; 杨兵巩燕应万涛张养军蔡耘钱小红; 文献传递

基于超滤辅助样品制备方法的优化被引量：1: 2014年; 目的:基于超滤辅助样品制备(FASP)方法的出现使得使用去污剂(如SDS)的蛋白质提取方法与溶液内酶切方法得以兼容,因此提高了难溶性蛋白的鉴定数量。然而,超滤膜的非特异性吸附作用依然会造成蛋白的损失。我们拟针对该方法存在的问题对其进行改进。方法:对FASP方法进行了蛋白酶切条件、洗脱液选择、洗脱次数的改进;为测试优化方法的有效性和适用范围,选择标准蛋白BSA、鼠肝和鼠脑等3种样品进行考察。结果:相比报道的FASP方法,采用改进后的FASP方法使BSA的回收率提高了20%;经高精度质谱检测,对鼠肝、鼠脑的蛋白质鉴定结果分别比采用未优化的FASP多鉴定到2086和3592条特异肽段。结论:通过对FASP方法的优化,蛋白鉴定数量得到较大提高,该方法为蛋白质组深度覆盖研究提供了可靠的技术手段。; 马成张琪潘一廷覃培斌钱小红应万涛

等电聚焦预分离用于肝癌细胞分泌蛋白质组的分级与鉴定被引量：4: 2013年; 分泌蛋白质组(secretome)是指在特定的时空条件下,细胞、组织等分泌的全部蛋白质。分泌蛋白质组可能包含了大量的疾病诊断生物标志物,因此其相关研究越来越受到重视。分泌蛋白质组的组成高度复杂且浓度范围宽,这对分析方法提出了挑战。建立有效的蛋白质或肽段预分离策略,将有利于分泌蛋白质的高覆盖率鉴定。本研究以肝癌细胞系MHCC97L的无血清培养分泌蛋白质为研究对象,采用一种新型等电聚焦预分离(OFFGEL)系统,考察了肽段水平的分级对蛋白质鉴定结果的影响。结果表明,分离后各馏分中肽段的等电点分布与理论预测基本一致,每个馏分中单独鉴定的肽段比例接近80%,显示了该系统对肽段的高分辨分离能力。结合生物质谱技术,在肝癌细胞分泌系统中鉴定了2 995个蛋白质,显示了该系统在复杂体系蛋白质组研究中的应用潜力。; 李贤煜赵新元应万涛钱小红; 关键词：等电聚焦肝癌细胞

离线与在线二维液相色谱-离子阱串联质谱联用技术应用于人血清蛋白质组分析的对比研究: 血浆蛋白质是构成人体内环境的重要物质基础,也是沟通人体各器官、组织及细胞间微环境的物质基础。由于其具有独特的性质(蛋白质组成、功能及结构形式极端复杂)、重要的生理生化功能及在疾病的诊断、治疗及监控等方面研究中的重要意义而...; 李晓海巩燕卢庄应万涛张养军蔡耘钱小红; 文献传递

液相色谱-质谱联用方法用于严重急性呼吸系统综合症冠状病毒结构蛋白质的研究被引量：8: 2004年; 通过高效液相反相色谱、毛细管反相色谱 -串联质谱联用方法对SARS病毒攻击细胞的研究 ,鉴定出了N、S和M 3种SARS结构蛋白质 ,并准确测定了N蛋白质的分子量。由分子量结果和生物信息学推断的N蛋白质的理论分子量比较 ,可以确定N蛋白质不存在常见的磷酸化修饰和糖基化修饰或含量很低。进一步的研究表明 :N蛋白质可能存在降解现象 ,其降解机理尚需探索。另外 ,通过对样品直接酶切后进行两维毛细管分离和串联质谱鉴定与对样品先进行分离 ,然后再进行毛细管反相分离串联质谱鉴定方法比较 ,表明两种方法在蛋白质组学研究中各具优缺点。; 张养军王京兰蔡耘应万涛郝运伟李蕾李晓海戴舒佳代景泉贺福初钱小红王杰魏开华; 关键词：严重急性呼吸系统综合症冠状病毒液相色谱-质谱联用非典型肺炎

固相亲和层析结合离子阱串联质谱分析鉴定血清中的蛋白质药物-重组人内皮抑制素: 立了将固相亲和层析与离子阱串联质谱分析相结合,分离提取并鉴定给药猕猴血清中含有6×His序列的重组人内皮抑制素的方法.用固相免疫亲和层析和金属螯合层析两种方法分别提取并富集血清中的重组药物,经胰酶酶解后采用液相色谱-离子...; 刘尚义刘秀文蔡耘宋海峰王京兰朱宝珍应万涛李蕾汤仲明钱小红; 关键词：蛋白质药物血清; 文献传递

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