张乾义
- 作品数：73 被引量：82H指数：5
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因缺失对小鼠肺泡巨噬细胞感染的影响被引量：1
- 2023年
- 为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平,结果显示,与XJ10WT相比,XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P<0.001),crl和pap基因的m RNA转录水平分别在2 h和12 h时均极显著上调(P<0.001)。进一步通过吉姆萨染色观察XJ10WT和XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞情况,采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力,并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示,XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h,随后逐渐下降,在感染后1 h~5 h的时间段内,XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞的活菌数量均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。XJ10ΔcyaA和XJ10WT侵袭MH-S细胞的活菌数量随着感染时间的延长逐渐升高,5 h时达到峰值,后持续下降,XJ10ΔcyaA在感染后1 h~10 h侵袭MH-S细胞的活菌数量均显著或极显著低于XJ10WT。在感染MH-S细胞后的3 h~6 h,XJ10ΔcyaA对细胞增殖的抑制率均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。上述结果首次表明,cyaA基因表达的AC可以显著上调绵羊肺源E.coli与黏附侵袭相关基因的转录水平,并参与绵羊肺源E.coli对MH-S细胞的黏附与侵袭,抑制MH-S细胞增殖。本研究为绵羊肺源E.coli致病机制的研究奠定了基础。
- 操义恒王子杰王巧梅党士荣张丽媛马雪张乾义周霞黄新张星星吴桐忠钟发钢
- 利用可视化原位杂交技术研究CSFV在猪脾脏和肺脏的分布情况
- 猪瘟又称经典猪瘟(Classical Swine Fever,CSF),是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的高度致死性、接触性传染病。CSFV是单股正链RNA病毒。RN...
- 孙骏翔孙永芳张玉杰徐璐张乾义赵启祖王琴
- 关键词：原位杂交肺脏脾脏
- 对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒进行鉴别诊断的基因芯片以及检测方法
- 本发明涉及一种探针组合物，其是用于对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒进行鉴别诊断的探针组合物；还涉及相应的基因芯片和试剂盒。
- 张乾义夏应菊王琴赵启祖徐璐邹兴启万建青郎洪武李翠朱元源徐嫄王兆
- 猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析被引量：2
- 2020年
- 猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心,猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担了国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”(CNCA-19-A01),全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次,若补测结果仍为“不满意”,则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家,初测满意率为92.23%,初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明,参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,参试单位可以及时纠正错误,进一步提升猪瘟抗体的检测能力。
- 徐璐夏应菊张乾义张雯雯王震李翠邹兴启朱元源徐嫄王兆赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟免疫抗体ELISA
- 致病性大肠杆菌HPI毒力岛及其水平转移的研究进展
- 2023年
- 致病性大肠杆菌作为肠杆菌科成员和人兽共患病病原体之一,在一定条件下可通过多种途径引起人和动物感染并引发不同的大肠杆菌病病型。由于致病性大肠杆菌的血清型和毒力因子众多、耐药趋势严峻、存在生物被膜等因素导致大肠杆菌病的流行趋势复杂且疫苗研发困难,给国内外的畜禽养殖业带来一定的经济损失。高致病性岛(high-pathogenicity island,HPI)最早发现于耶尔森菌,被证实是其毒力表型所必需的基因组岛,为强毒力岛。由于细菌的水平转移机制让该毒力岛在其他肠杆菌科中被广泛检出。其中HPI毒力岛也在致病性大肠杆菌如肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage Escherichia coli,EHEC)、产志贺毒素大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)等中被大量检出,被证实影响致病性大肠杆菌毒力,参与致病性大肠杆菌铁元素摄取和介导宿主免疫反应等。为进一步了解HPI毒力岛在致病性大肠杆菌中的铁元素调控机理、致病特性、介导的细胞免疫反应和水平转移途径,现从HPI毒力岛结构、如何调控耶尔森菌素铁载体、HPI毒力岛致病性及调控细胞免疫反应、HPI毒力岛的水平转移进行概述,以期望为大肠杆菌的致病机理及大肠杆菌病的防控提供帮助。
- 邹宏罗干陈玲杜鹏飞张乾义杨承槐田野
- 关键词：致病性大肠杆菌
- 猪瘟病毒抗原表位的研究进展被引量：3
- 2017年
- 猪瘟病毒（CSFV）是黄病毒科瘟病毒属成员，为单股正链RNA病毒，病毒核酸长约为12．3kb，由5’-非编码区（5’UTrt）、一个开放阅读框（ORF）和3’-非编码区（3’-UTR）构成，开放阅读框编码3898个氨基酸的前体蛋白，在合成过程中被病毒自身编码的或宿主细胞内的蛋白酶水解为4种结构蛋白和8种非结构蛋白，迄今为止发现与抗原相关的蛋白有3种，分别为结构蛋白Erns、E2和非结构蛋白NS3。
- 孙永芳徐璐张乾义王琴
- 关键词：猪瘟病毒抗原表位正链RNA病毒开放阅读框非编码区前体蛋白
- 一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用
- 本发明涉及一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用。本发明筛选得到了一株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白的杂交瘤细胞株，该细胞株所分泌的单克隆抗体CSFV‑1C8与CSFV的E2蛋白能够发生特异性反应，而与牛病毒性腹泻/...
- 王琴徐璐张乾义赵启祖范学政邹兴启朱元源李翠
- 文献传递
- 猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化
- 2019年
- 采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。
- 牛康徐璐张乾义夏应菊朱元源邹兴启李翠赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟病毒杆状病毒系统间接ELISA
- Quantigene ViewRNA原位杂交技术对感染组织中CSFV RNA定位与分布的研究
- 为研究猪瘟病毒RNA在感染组织中的分布动态,本实验采用新型的Quantigene View RNA原位杂交法对猪瘟病毒组织中RNA进行定位检测,能准确反映病毒RNA在组织中的分布位置,为阐明猪瘟病毒在组织细胞中的复制规律...
- 张乾义徐璐张玉杰孙永芳孙骏翔王琴
- 关键词：猪瘟病毒
- 文献传递
- 猪瘟病毒中等致病力毒株在体内的动态分布被引量：1
- 2018年
- 【目的】目前我国猪瘟的感染类型主要是亚急性感染及慢性感染,研究猪瘟亚急性感染后体内病毒RNA和蛋白的分布情况,有助于阐述亚急性病程猪瘟病毒的复制分布规律,为猪瘟的早期诊断和预防奠定重要基础。【方法】成功以中等致病力毒株(HeBHH1/95)构建了亚急性猪瘟感染动物模型,分别采集感染后第1、3、6、10、13、20、24、28天感染猪的十二指肠、脾脏、肾脏、肺脏、胰、回盲瓣6种组织器官并进行连续切片。应用建立的猪瘟病毒可视化原位杂交技术(ViewRNA ISH)研究感染组织中病毒RNA动态分布,同时采用免疫组化(IHC)、H.E染色分别检测感染组织中蛋白的分布情况及其组织损伤位置,从而在病毒核酸和蛋白水平系统性的观察病毒的分布情况。【结果】采用Mittelholzer方法进行临床计分发现感染后6—10 d感染猪猪瘟临床症状记分迅速增加,11—26 d感染猪临床记分一直维持在15分左右,直到28 d临床记分达到最高值20分。感染后8—10 d感染猪体温呈上升趋势;13—24 d感染猪体温呈现稽留热,持续在40℃左右;此后体温开始回落,至濒死前体温回落至39.5℃左右。应用CSFV ViewRNA ISH感染后第1天在十二指肠绒毛杯状细胞及胰腺的腺泡、回盲瓣的固有层、肾脏的肾小管等这些具有分泌功能的结构组织周围检测到病毒RNA阳性信号;感染后第3天在肺脏的细支气管和脾脏的椭圆体周围检测到病毒RNA阳性信号;第13天阳性信号富集显著,至第28天病毒RNA广泛分布在脾脏动脉周围淋巴鞘及胰腺腺泡和肾小管等组织周围。采用IHC和H.E染色法在连续切片的相似视野下验证ViewRNA ISH检测结果,发现感染后第1天十二指肠、胰腺、肾脏亦可检测到病毒蛋白阳性信号和相应组织的病理变化,但回盲瓣在第3天检测到病毒蛋白阳性信号和组织的病理变化,在之后的病程中各组织中病毒RNA、蛋白定位情况�
- 孙骏翔张乾义徐和敏王团结徐璐邹兴启朱元源李翠夏应菊徐嫄陈锴张玉杰赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟病毒RNA
