张桂芝
- 作品数：11 被引量：24H指数：3
- 供职机构：浙江大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程经济管理更多>>
- 鸡新城疫病毒融合蛋白结构域基因免疫与鸡白介素-2佐剂作用研究
- 张桂芝
- 关键词：结构域白细胞介素-2基因免疫免疫增强剂
- 新城疫病毒HN蛋白抗原表位分析及结构域基因原核表达被引量：11
- 2007年
- 以本实验室构建的含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组质粒为模板,设计引物通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,获得HNa、HNb和HNa-L-b三种抗原结构域基因片段,BamHⅠ/HindⅢ双酶切定向克隆到原核表达载体pET32c,获得重组质粒分别命名为pET32c-HNa、pET32c-HNb和pET32c-HNa-L-b。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,HNa、HNb、HNa-L-b结构域基因片段均获得了融合表达。Western-blotting分析证实表达产物HNa和HNb与NDV阳性血清具有免疫反应性。本试验结果为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白在细胞融合中的相互作用奠定了基础。
- 陈亚波徐程张桂芝方维焕
- 关键词：新城疫病毒结构域抗原表位原核表达
- 动物性食品中大肠杆菌O157:H7的特异性二重PCR检测
- 大肠杆菌O157:H7是一种以食物为主要传播途径的病原菌,大肠杆菌O157:H7感染的患者和无症状携带者为主要的传染源,牛、羊、猪、鸡等动物是重要储存宿主,感染主要经口传播,各种肉类、牛奶、蔬菜、水果、饮料、水等均可成为...
- 贺晓龙张桂芝方维焕
- 关键词：动物性食品大肠杆菌病原学诊断
- 文献传递
- 动物源性食品中病原微生物污染的监控
- 由于动物源性食品营养丰富,致病菌易于大量繁殖,细菌性食物中毒有逐步上升的趋势,对人类健康构成了威胁。本文扼要叙述了近年来国内外食物中毒发生的基本状况,在此基础上对动物源性食品中微生物污染及其监控方面作一概述。鉴于动物源性...
- 方维焕张桂芝
- 关键词：食物中毒病原微生物污染
- 文献传递
- 鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的二重PCR检测
- 沙门氏菌广泛分布于自然环境中,是一种危害较大的人畜共患病病原菌,能通过食物感染人类,引起伤寒、副伤寒、败血症和胃肠炎等病症.由沙门氏菌引起的食物中毒病例在食物中毒总病例中占第二位.因此,快速特异地检出食品中的沙门氏菌污染...
- 张桂芝贺晓龙曾海燕方维焕
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌肠炎沙门氏菌人畜共患病食品卫生学
- 文献传递
- 新城疫病毒融合蛋白结构域基因免疫与鸡白介素-2佐剂作用研究
- 本研究用PCR方法获得了NDVF蛋白结构域基因Fa和Fb，并通过重叠—延伸PCR对二者进行重组，获得了Fab片段。将三种基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后获得了表达，Wes...
- 张桂芝
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白结构域基因免疫免疫增强剂
- 文献传递
- 表达绿色荧光蛋白重组单核细胞增多性李斯特菌的构建(英文)
- 2005年
- 将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重组菌体发绿色荧光.SDS-PAGE电泳和免疫印迹结果显示重组李斯特菌表达的GFP分子量约为28 kD,与预计的分子量大小一致.重组菌对鸡胚和小鼠的毒力以及对体外培养细胞的侵袭力均低于野生型李斯特菌.该重组菌可用于研究李斯特菌的致病机理和食品加工过程中微生物污染控制的指示性细菌.
- 柯春林宋厚辉江玲丽张桂芝方维焕
- 关键词：同源重组绿色荧光蛋白外源基因表达
- 动物性食品中大肠埃希氏菌O157∶H7特异性二重PCR检测方法的建立被引量：7
- 2005年
- 根据大肠埃希氏菌O157∶H7 wzx和fliC基因的保守序列设计了2对引物,建立并优化了特异性检测大肠埃希氏菌O157∶H7的二重PCR体系,扩增产物为395bp(wzx)和1057bp(fliC).人工培养基中大肠埃希氏菌O157∶H7的检测下限为2.3×102CFU/mL,人工污染的牛乳、猪肉及牛肉中大肠埃希氏菌O157∶H7的检测下限分别为5.8×102CFU/mL、4.3×102CFU/g和3.1×103CFU/g.样品经3h预增菌后检测下限可达3.1×100～5.8×100CFU/mL(或CFU/g).试验结果提示,针对wzx及fliC基因的二重PCR方法可以快速特异地检测出牛乳、猪肉及牛肉中大肠埃希氏菌O157∶H7的污染.
- 贺晓龙张桂芝方维焕
- 关键词：二重PCR
- 单核细胞增生李斯特菌奶相关分离株的三重PCR鉴定与分子分型
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes-Lm)是李斯特菌属细菌中对人类和动物危害最大的一种致病菌。1891年法国学者Hayen最早在人体组织中观察到该菌,1940年Pirie将之命名为L.mo...
- 方维焕曾海燕江玲丽张桂芝张晓峰
- 文献传递
- 新城疫病毒F蛋白结构域基因原核表达与抗原表位分析被引量：7
- 2006年
- 以含新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因的重组质粒为模板,设计特异引物进行重叠-延伸PCR扩增获得F基因的抗原结构域基因片段Fa、Fb和Fa-l-Fb,经SalⅠ和NotⅠ酶切后,定向插入原核表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-Fa、pGEX-Fb和pGEX-Fa-l-Fb;用定点突变方法获得重组质粒pGEX-Fa-mut.将重组质粒转化大肠杆菌BL21,转化菌经IPTG诱导、提取表达产物进行蛋白电泳和免疫印迹分析.结果表明:Fa-mut、Fb和Fa-l-Fb结构域基因均获得了融合表达,表达产物与NDV阳性血清具有免疫反应性;与pGEX-Fa-mut不同,pGEX-Fa重组质粒在大肠杆菌中未能表达,且转化菌在IPTG诱导过程中未见生长,提示未经突变的Fa片段可能为毒性蛋白.三维结构预测结果显示,目的蛋白片段中均保留F蛋白中原有相应的抗原表位.
- 张桂芝陈亚波徐程张朝政方维焕
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白结构域抗原表位原核表达
