怀文辉
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 胰岛素突变体合成中不对称PCR条件的探讨被引量：3
- 2004年
- 在胰岛素定点突变体合成中 ,对不对称PCR反应中突变位点的引物和末端引物的比例以及退火温度进行优化。结果表明 :PCR反应 5′末端引物与突变引物的配比为 5 0∶1～ 10 0∶1;第 2轮PCR反应退火温度在 6 5～ 70℃较为理想。
- 王洪涛怀文辉茹炳根张绍铃
- 关键词：胰岛素突变体引物蛋白质工程
- 一种人胰岛素类似物的制备、鉴定与活性研究被引量：3
- 2004年
- 采用PCR方法 ,将人胰岛素分子B链B1 0位His突变为Glu ,在B2 5和B2 6位之间插入Glu ,构建了 [B1 0Glu ,B2 5 Glu B2 6 ]胰岛素原融合蛋白基因 .利用通用型质粒pBV2 2 0构建表达载体 ,在大肠杆菌DH5α中表达 ,表达蛋白为包含体形式 ,约占菌体总蛋白的 2 0 %～ 30 % .经过复性、凝胶过滤等步骤得到胰岛素原融合蛋白 .用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切 ,经过DEAE离子交换和RP HPLC纯化得到胰岛素突变体类似物 ,并经过质谱测定鉴定 .凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质 ,圆二色谱 (CD)测定了构象的变化 .并分别测定了放免活性、受体结合活性及小白鼠低血糖惊厥实验 .结果表明 ,突变体分子缔合性明显下降 .放免活性和受体结合活性分别约为标准胰岛素的 6 3 5 %和 1 1 4 4 % 。
- 怀文辉袁华赵锐茹炳根
- 关键词：胰岛素类似物原核表达生物学活性糖尿病
- [B10Glu,B24-Asp-B25]人胰岛素类似物的制备、鉴定与性质研究被引量：2
- 2004年
- 采用 PCR方法 ,将人胰岛素分子 B链 B1 0位 His突变为 Glu,在 B2 4和 B2 5位之间插入 Asp,构建了[B1 0 Glu,B2 4-Asp-B2 5 ]胰岛素原基因 .利用通用型质粒 p BV2 2 0构建表达载体 ,在大肠杆菌 DH5 α中表达 ,表达蛋白为包含体形式 ,约占菌体总蛋白的 2 0 %～ 3 0 % .经过复性和凝胶过滤得到胰岛素原融合蛋白 .用胰蛋白酶和羧肽酶 B酶切 ,经 DEAE离子交换和 RP-HPLC纯化得胰岛素突变体类似物 .用凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质 ,用圆二色谱测定了构象变化 .放射性免疫活性及受体结合活性测定结果表明 ,突变体分子缔合性明显下降 ,放免活性和受体结合活性分别约为人胰岛素的 73 .6%和 1 46% .
- 怀文辉孙庭万俞梅敏茹炳根
- 关键词：胰岛素类似物原核表达生物学活性PCR胰岛素原
- 胰岛素蛋白质工程：B10Glu、[B10Glu，B24-Asp-B25]和[B10Glu，B25-Glu-B26]人胰岛素类似物的制备及其功能研究
- 糖尿病是一种常见的内分泌疾病,胰岛素是治疗糖尿病的特效药.在临床应用时胰岛素是以单体形式发挥作用的.传统胰岛素自身缔合性较强,容易形成聚合体,在注射后发挥效应的速度较慢,容易引起高血糖症.因此,研制单体形式的胰岛素类似物...
- 怀文辉
- 关键词：胰岛素生物学活性
