曹定国
- 作品数：13 被引量：47H指数：3
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- rhaFGF改构体对SH-SY5Y细胞兴奋性氨基酸毒性损伤的作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨rhaFGF的改构体对谷氨酸损伤神经细胞的干预作用。方法制备SH-SY5Y损伤模型,将实验分为空白组、Glu组、rhaFGF组和rhaFGF改构体组,利用流式细胞仪分析rhaFGF改构体对正常培养的神经细胞细胞周期的影响:形态观察以及MTT法检测各实验组的细胞活力、LDH法检测乳酸脱氢酶的释放率、NO法检测NO的产生。结果rhaFGF改构体组细胞S期的DNA含量为25.98%,比rhaFGF组(46.31%)显著降低(P<0.01),与空白组没有差异(P>0.05);与损伤组比较,rhaFGF改构体组(3个浓度)细胞OD值降低,LDH的释放减少,NO的过量产生减少,且均表现出一定的量效关系。结论rhaFGF改构体具有相对低的促分裂活性,仍能拮抗Glu毒性导致的细胞损伤,促进神经细胞生存,对神经细胞具有保护作用。
- 曹定国周汝滨廖霞陈小萍李校堃
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子兴奋性氨基酸
- 酸性成纤维细胞生长因子非促分裂活性的研究进展被引量：3
- 2004年
- 曹定国李校坤付小兵
- 关键词：分化血管舒张
- 红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建被引量：3
- 2011年
- 目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数。结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果最好。结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体。
- 廖霞庞实锋张强杨芳郑克勤周汝滨曹定国邹宇光
- 关键词：融合基因RNA干扰SHRNA
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子对神经细胞损伤的保护作用被引量：10
- 2007年
- 目的建立谷氨酸损伤模型并探讨重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对谷氨酸损伤神经细胞的干预作用。方法利用流式细胞仪观察rhaFGF对正常培养的神经细胞细胞周期的影响,建立细胞损伤模型,将实验分空白组、模型组和rhaFGF保护组,通过形态观察以及MTT法检测各实验组的细胞活力。结果rhaFGF能促进DNA的合成,谷氨酸对细胞损伤程度随浓度的增大而增大,rhaFGF能够拮抗谷氨酸的神经毒。结论rhaFGF能促进神经细胞生长同时拮抗谷氨酸兴奋性毒性而发挥神经保护作用。
- 曹定国周汝滨廖霞陈小平李校堃
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子SH-SY5Y细胞谷氨酸细胞活力
- FGF21腺病毒表达载体的构建及鉴定
- 2015年
- 目的构建成纤维生长因子21(FGF21)表达载体。方法将FGF21基因克隆到腺病毒穿梭质粒p AdTrack经DH5α感受态菌扩增,Pme I酶切后热激转化到含腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1的BJ5183感受态菌内同源重组,经卡那霉素筛选及Pac I酶切鉴定,并在DH5α菌中扩增得到Ad-FGF21重组腺病毒质粒,再经Pac I酶切线性化后转染到293A细胞包装成重组腺病毒。结果基因测序结果表明成功合成穿梭载体p Ad-Track-FGF21。PCR和酶切鉴定结果证实含FGF21基因的重组腺病毒表达载体构建成功。Ad-FGF21转染293A细胞并制备出高滴度的重组腺病毒。结论利用腺病毒表达载体获得了携带FGF21的重组腺病毒表达载体。
- 严莉莉项丽庞实锋段杏华曹定国梁朋张国平丁银润胡传银郑克勤
- 关键词：腺病毒成纤维细胞生长因子基因治疗
- haFGF改构体的温控表达及其活性测定
- 2011年
- 目的:构建温控表达载体,采用温控表达haFGF,为降低其生产成本打下基础。方法:采用PCR法扩增截去其N端19个氨基酸的haFGF DNA,克隆到温控表达载体PBV220中,然后转化进BL21(DE3)Star plysS中进行温控表达。结果:经SDS-PAGE和Western blot分析表明,温控表达载体表达的haFGF具有其原来的免疫原性,MTT活性检测结果表明,haFGF纯化产物与野生型haFGF活性相当,差异无显著性(P>0.05)。结论:成功构建了haFGF的温控表达载体,为提高目的蛋白的表达量和降低其生产成本打下基础。
- 庞实锋付宏岐郑克勤曹定国周汝滨
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子基因克隆
- 改构酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胸腺细胞凋亡的影响
- 2003年
- 目的:探讨改构酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用。方法:利用地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、DEX处理组、aFGF+DEX组和MaFGF+DEX组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法,测定MaFGF对小鼠胸腺细胞凋亡的影响。结果:空白对照组凋亡率为1.68%,DEX处理后小鼠胸腺细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡率为19.6%,aFGF和MaFGF处理后的细胞凋亡受到抑制,凋亡率分别下降到15.95%和12.93%,MaFGF效应强于aFGF,且以剂量依赖方式发挥作用。结论:MaFGF具有以剂量依赖方式的胸腺细胞保护作用。
- 曹定国李校坤付小兵程飚方利君
- 关键词：小鼠胸腺细胞凋亡细胞保护作用AFGF
- 地塞米松诱导胸腺细胞凋亡在神经免疫性疾病研究中的意义(英文)被引量：3
- 2003年
- 目的观察地塞米松诱导胸腺细胞caspase-3蛋白与p38MAPK的表达变化,探讨地塞米松诱导胸腺细胞凋亡在神经免疫性疾病研究中的意义。方法采取体外细胞培养Balb/c小鼠(体质量20g左右的Balb/c小鼠,雌雄不限)胸腺细胞的方法,制备地塞米松诱导的细胞凋亡模型,通过流式细胞仪观察凋亡细胞数量的变化情况。运用Westernblotting技术检测地塞米松处理的Balb/c小鼠胸腺细胞0,30,60,180min时相点caspase-3蛋白与p38MAPK的表达变化。结果地塞米松可以诱导Balb/c小鼠胸腺细胞发生凋亡,发生的比例是21.75%。随后的westernblot检测显示,伤后即刻p38MAPK开始表达,并在60min达到高峰,随后有所减弱。而caspase-3蛋白的表达开始较弱呈逐渐升高的趋势,一直持续至伤后180min。结论p38MAPK信号通路在地塞米松诱导的Balb/c小鼠胸腺细胞凋亡过程中起重要作用。
- 吴中亮王通曹定国程飚付小兵李校堃
- 关键词：胸腺细胞细胞凋亡神经免疫性疾病CASPASE-3蛋白
- 改构酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胸腺细胞凋亡的影响被引量：28
- 2003年
- 目的 :探讨改构酸性成纤维细胞生长因子 (MaFGF)对地塞米松 (DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用。方法 :利用地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡的模型 ,将实验分为空白对照组、DEX处理组、aFGF +DEX组和MaFGF +DEX组 ,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法 ,测定MaFGF对小鼠胸腺细胞凋亡的影响。结果 :空白对照组凋亡率为 1 68% ,DEX处理后小鼠胸腺细胞出现明显的细胞凋亡 ,凋亡率为 1 9 6% ,aFGF和MaFGF处理后的细胞凋亡受到抑制 ,凋亡率分别下降到 1 5 95 %和 1 2 93% ,MaFGF效应强于aFGF ,且以剂量依赖方式发挥作用。结论 :MaFGF具有以剂量依赖方式的胸腺细胞保护作用。
- 曹定国李校坤付小兵程飚方利君
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子胸腺细胞细胞凋亡地塞米松
- 虎耳草素对长春新碱诱导的神经病理性疼痛的影响被引量：1
- 2015年
- 目的：探讨虎耳草素对长春新碱诱导的神经病理性疼痛的影响及其作用机制。方法：利用长春新碱致神经病理性疼痛模型小鼠,腹腔注射虎耳草素100 mg/kg,通过行为学实验测试机械性缩足反射阈值；生化检测氧化应激相关指标丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）的表达；ELISA 检测炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-1β的表达；原子吸收光谱检测钙离子浓度的变化。结果：虎耳草素能够显著地抑制长春新碱诱导的神经病理性疼痛（CNP）模型小鼠机械性痛觉过敏,且能改善 CNP 小鼠高氧化应激状态和降低 CNP 小鼠 TNF-α、IL-1β的表达水平及钙离子浓度。结论：虎耳草素拮抗 CNP,且该作用机制可能与其抑制氧化应激、降低炎症因子 TNF-α、IL-1β的表达及钙离子浓度有关。
- 胡传银张国平陈小萍曹定国梁朋
- 关键词：神经病理性疼痛氧化应激炎症因子钙离子
