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猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型猪体共感染发病模型的建立: 2016年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照组(n=4)。攻毒后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重并于不同时间采血,攻毒后第21天剖杀所有猪,荧光定量PCR检测血清中病毒血症和组织中病毒载量。结果表明,PCV2+PRRSV共感染组猪的临床症状最严重,并死亡2头。病理变化主要表现为肺出血、明显的间质性肺炎,淋巴组织及淋巴细胞缺失严重,淋巴滤泡中出现大量核浓缩深染的淋巴细胞;PCV2单独感染组与PRRSV单独感染组猪的临床症状轻微,仅出现短暂性体温升高;空白对照组未出现症状。病毒血症检测结果显示,两种病毒共感染组猪的血清中PCV2与PRRSV含量均高于单独感染组。本研究成功建立了PRRSV与PCV2猪体人工共感染发病模型,为PRRSV与PCV2协同致病机理研究奠定了基础。; 游术梅张乔亚孙涛朱雪蛟王先炜姜平; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征

表达猪圆环病毒2型ORF2基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建与鉴定被引量：7: 2015年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是目前危害世界养猪业的两种重要病原。本研究采用PCR方法构建PRRSV疫苗株TJM-F92全长cDNA克隆载体pCMV-TJM,并在其ORF7和3′UTR之间插入AflⅡ/MluⅠ酶切位点和转录调控序列TRS6,构建获得pCMV-TJM-TRS表达载体。将PCV2ORF2基因插入该载体AflⅡ/MluⅠ位点,获得重组质粒pCMV-TJM-Cap。将pCMV-TJM、pCMV-TJM-TRS和pCMV-TJM-Cap分别转染Marc-145细胞,拯救获得3种重组病毒rTJM、rTJM/TRS和rTJM/Cap。基因测序列、酶切鉴定、Western blot、间接免疫荧光和病毒生长特性结果显示,3种重组PRRSV病毒都含有特征性分子标记,在Marc-145细胞增殖特性与亲本病毒相似;rTJM/Cap传至第8代,仍含有外源Cap基因,病毒感染细胞能有效表达PCV2Cap蛋白,从而为PRRSV致病机制和PRRSV-PCV2疫苗研究奠定了重要基础。; 张挺杰刘星孙涛朱雪蛟范宝超白娟姜平; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型重组病毒

猪圆环病毒2型Cap蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及在小鼠体内免疫特性研究被引量：2: 2016年; 猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白基因是该病毒基因工程疫苗的重要目的基因,但其在大肠杆菌表达系统中的表达产物通常以包涵体形式存在,影响其作为亚单位疫苗使用的免疫保护作用。将ORF2基因密码子改造为大肠杆菌偏爱的密码子,或构建MPG与ORF2基因融合,分别克隆至表达载体p ET28a,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blot结果证实改造后的PCV2 Cap蛋白基因实现了可溶性表达。将上述两种重组蛋白纯化后,分别与GEL01、ISA206或ISA15A三种佐剂混合配制疫苗,小鼠免疫保护试验结果证明,以GEL01为佐剂的两免疫组PCV2 ELISA抗体和中和抗体水平最高。攻毒试验结果显示,除ISA15A组外,其他各免疫组脾脏中PCV2含量都显著低于非免疫对照组,表明两种重组蛋白与佐剂GEL01和ISA206制成的疫苗可诱导产生一定水平的免疫保护作用,为PCV2亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 刘盼娆周雪晨朱雪蛟白娟王先炜姜平; 关键词：PCV2 CAP蛋白可溶性表达免疫特性

猪白细胞介素21基因的原核表达与多抗血清的制备: 2015年; 为了制备猪白细胞介素21(porcine interleukin-21,pIL-21)的多克隆抗体,采用RT-PCR从猪外周血单个核细胞(PBMC)扩增获得pIL-21基因,然后将其克隆至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)之中,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,pIL-21以可溶性蛋白形式表达,分子质量为35ku,具有良好的反应原性。经过Ni-NTA镍离子亲和层析纯化,获得纯化的重组蛋白pIL-21。用其免疫BALB/c小鼠制备抗pIL-21血清抗体。Western-blot分析结果显示,该抗体可与杆状病毒表达的重组Cap-pIL-21、ConA和PHA共刺激的猪PBMC细胞发生特异性反应,ELISA抗体效价可达1∶12 800。上述研究结果为pIL-21的生物学功能研究奠定了重要基础。; 周雪晨刘星朱雪蛟范宝超白娟姜平; 关键词：白细胞介素21 原核表达多克隆抗体

PCV2a和PCV2b鉴别PCR检测方法的建立与应用: 猪圆环病毒2型（PCV2）是目前危害世界养猪业的重要病原之一。PCV2不同流行毒株基因存在一定差异,目前,一般认为PCV2分为PCV2a、PCV2b和PCV2c等基因型,但不同国家规模猪场流行毒株以PCV2b为主[1]。...; 朱雪蛟白娟王先炜姜平; 关键词：PCR

鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR的建立与应用: 快速鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)的2个基因型PCV2a与PCV2b,根据PCV2a和PCV2b基因序列特征,设计PCR引物,成功建立了鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR,并进行了敏感性试验和特异性试验.结果显示,该...; 朱雪蛟白娟王先炜姜平; 关键词：猪圆环病毒病病毒检测聚合酶链式反应特异性敏感性

一种新的水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗: 本发明公开一种新的水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗，本发明筛选并设计了CP974S、CP934S、CP974M和CP四种水性佐剂，制备PCV2灭活疫苗，小鼠和猪体免疫试验结果显示，CP974S和CP934S佐剂对PC...; 姜平白娟朱雪蛟王先炜; 文献传递

宿主蛋白Sap及SOCS3在猪圆环病毒2型复制和亚临床感染中的作用以及新型疫苗的研究: 猪圆环病毒病2型(Porcine circovirus virus type 2,PCV2)给世界养猪产业造成巨大的经济损失。利用蛋白组学技术已鉴定出许多与PCV2相互作用的宿主蛋白,这些蛋白主要参与PCV2的入胞、运输...; 朱雪蛟; 关键词：SAP SOCS3 猪圆环病毒2型新型疫苗; 文献传递

一种水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗: 本发明公开一种新的水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗，本发明筛选并设计了CP974S、CP934S、CP974M和CP四种水性佐剂，制备PCV2灭活疫苗，小鼠和猪体免疫试验结果显示，CP974S和CP934S佐剂对PC...; 姜平白娟朱雪蛟王先炜; 文献传递

耐热Taq DNA聚合酶的酸酐修饰及其在降低PCR非特异性扩增中的应用评价被引量：1: 2011年; 酸酐能与聚合酶上的赖氨酸结合形成聚合物,试验通过选用合适的酸酐,修饰TaqDNA聚合酶。在常温下,酶活性被封闭,升温过程中不表现酶活,从而减少非特异性扩增和引物二聚体的形成;而在较高的温度下一段时间后,一般为94℃、15 min,酸酐脱落,聚合酶得以恢复正常的扩增活性,从而实现PCR反应的热启动。由此建立的热启动PCR体系灵敏度高,可以检测到10个拷贝的DNA分子,较普通PCR体系提高了2个数量级。此方法较其他方法操作简单成本低廉,且所得的热启动TaqDNA聚合酶稳定性好,便于保存,其灵敏性与特异性也更高。这种通过化学修饰形成的复合物达到热启动PCR目的的方法的建立,具有着重要的意义,是提高PCR灵敏度和特异性的重要方法之一。; 周晓薇朱雪蛟田玲曹林; 关键词：TAQ DNA聚合酶化学修饰

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朱雪蛟

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