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林周: 作品数：27 被引量：25H指数：3; 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>

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重组人B细胞激活因子融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定: 2013年; 目的获得人类B细胞激活因子(B cell activating factor,BAFF)胞外段融合蛋白并对其生物活性进行分析。方法构建pET32a/BAFF的原核表达载体,进行原核表达、亲和纯化,并通过SDS-PAGE、Western印迹进行鉴定。利用非还原电泳后的Western印迹与HPLC分析融合蛋白在溶液中的存在形式。ELISA、Octet RED系统检测rhBAFF结合受体TACI的能力并做出实时动力学分析。MTS法检测rhBAFF促进B细胞增殖的活性。结果融合蛋白在大肠杆菌BL21中以可溶形式高效表达,经Ni-NTA纯化获得的目的蛋白纯度超过90%;SDS-PAGE、Western印迹显示在相对分子质量为36×103位置有目的蛋白的特异条带;非还原电泳及HPLC分析表明,重组蛋白以三聚体的形式存在;ELISA、Octet RED系统同时证实BAFF可与受体TACI结合;增殖实验证实重组蛋白具有生物学活性。结论成功获得纯度超过90%的rhBAFF可溶蛋白,实验证实为具有生物学活性的三聚体结构。; 王茹林周魏化伟彭辉侯春梅冯健男沈倍奋黎燕; 关键词：B细胞激活因子受体三聚体表达纯化

一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的细胞株LaDR5: 本发明公开了一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的细胞株LaDR5，上述抗体为识别TRAIL受体DR5并且在体外诱导DR5表达细胞凋亡的抗体LaDR5，本发明还公开了上述抗体的制备方法。本发明的细胞株分泌的LaDR5抗体通...; 林周吕明郎小玲冯健男黎燕沈倍奋

抗人TNF-α单链抗体rScFvH22原核表达及纯化: 2004年; 目的 :应用PET32 c原核表达载体快速、高效地表达及纯化单链抗体。方法 :将单链抗体H2 2基因克隆到PET32 c原核表达载体中 ,通过酶切及测序鉴定正确后 ,进行原核诱导表达和纯化 ,并检测纯化后单链抗体的功能。结果 :DNA琼脂糖凝胶电泳表明 ,单链抗体基因克隆成功 ;SDS PAGE结果表明 ,单链抗体得到成功表达和纯化 ;ELISA和Western印迹结果表明 ,单链抗体H2 2能够特异性结合人TNF α。结论 :成功地表达及纯化抗人TNF α单链抗体rScFvH2 2。; 林周秦卫松胡美茹于鸣沈倍奋黎燕; 关键词：单链抗体原核表达纯化琼脂糖凝胶电泳

利用表位特异性的靶向抗体库技术进行抗体的体外分子进化: 背景:多数情况下,抗体需要进行改造以增强其生物学效应。传统的抗体体外分子进化的方法往往需要构建库容量足够大的抗体库,工作量大,成功率低,容易发生表位漂移从而丧失其生物学功能。目的:本研究基于计算机辅助分析方法,在保证表位...; 乔春霞罗龙龙吕明林周李新颖耿晶黎燕张纪岩冯建男沈倍奋

基于受体-配体、抗原-抗体相互作用的立体结构信息设计新功能分子: 冯健男张纪岩黎燕沈倍奋秦卫松张巍林周; 该项成果以X-射线晶体衍射方法获得了IL-6·IL-6R·gp130复合物的晶体结构为基础，理论构建IL-6·IL-6R复合物模型，确定IL-6与受体作用的功能域，建立二者作用的动态模式；首次基于计算机辅助分析、筛选随机...; 关键词：; 关键词：空间构象合理设计单域抗体

抗体可变区稳定性评价及其初步应用: 2014年; 目的通过研究抗体轻、重链间的结合能与其构象特征、理化性质间的内在关系,建立相应的数学模型,合理评价抗体分子的热稳定性,为抗体分子的设计、合理改造及亲和力成熟奠定基础。方法采用生物信息学和计算生物学相关方法对已有晶体结构的抗体结构信息进行分析,通过距离几何学、计算机图形学技术对抗体可变区的构象特征进行研究;基于分子间氢键形成理论、反应自由能理论,从热力学、动力学对抗体分子轻、重链可变区相互作用的动态结构及能量特征进行探讨;借助统计学原理、非线性拟合、回归分析等分析手段对抗体轻、重链作用能与其构象特征、理化性质建立相关性分析。结果通过分子模拟与统计学分析,抗体的轻、重链可变区结合能与其轻、重链间的氢键形成数目、范德华作用均存在线性相关性;与抗体理化性质存在基于多项式的非线性相关性。基于关键位置氨基酸的使用频率以及建立的分析模型,针对无法获得稳定工程细胞株的抗蓖麻毒素人源化功能抗体进行合理的评价及优化,借助理论指导,获得抗蓖麻毒素人源化抗体稳定的工程细胞株。结论抗体可变区的自身结构(构象、理化性质)对其稳定性有很大影响,可以通过抗体结构优化来提高抗体的稳定性。; 陈宇杨静李新颖周婷婷林周罗龙龙乔春霞吕明黎燕沈倍奋冯健男; 关键词：稳定性空间结构

人IgE Cε3-Cε4蛋白的表达、复性、纯化及初步鉴定被引量：2: 2006年; 目的获得IgE Fc段的Cε3-Cε4重组蛋白(E34)。方法以RT-PCR技术扩增IgE Cε3-Cε4(E34)cDNA片段,构建原核表达载体。以其转化大肠杆菌BL-21,诱导表达主要以包涵体形式存在的目的蛋白。经复性、纯化后,用Wes-tern blot和ELISA法初步鉴定所获E34蛋白与抗人IgE mAb的结合能力。结果对克隆的E34基因片段测序表明,与已报道的序列相一致。获得的可溶性E34蛋白经SDS-PAGE鉴定显示,其相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致。Westernblot和ELISA法进一步证实,E34蛋白能够被鼠抗IgE mAb特异性识别。结论成功地构建了pET28a(+)-E34表达载体,并获得能被抗IgE mAb特异性识别的可溶性蛋白E34,为下一步的工作打下了基础。; 乔春霞林周胡美茹刘睿秦卫松冯健男沈倍奋; 关键词：IGE 复性纯化

嵌合抗体研究进展被引量：3: 2001年; 抗体在疾病诊断、治疗和预防中发挥着重要作用。近几年来将基因工程应用到抗体生产的基因工程抗体技术发展迅速 ,本文就基因工程抗体中的重要组成部分———嵌合抗体的研究进展加以综述。; 林周黎燕; 关键词：基因工程抗体嵌合抗体真核表达

抗人TNF-α单链抗体rScFvW13B1原核表达、纯化及功能鉴定被引量：1: 2006年; 应用PET32-c原核表达载体快速、高效地表达及纯化单链抗体。将单链抗体W13B1基因克隆到PET32-c原核表达载体中,通过酶切及测序鉴定正确后,进行原核诱导表达并纯化,并检测纯化得到的单链抗体的功能。DNA琼脂糖凝胶电泳表明,单链抗体基因克隆成功;SDS-PAGE结果表明,单链抗体得到成功表达和纯化;ELISA和WesternBlot结果表明,单链抗体W13B1能够特异性结合人TNF-α。说明可成功地表达及纯化抗人TNF-α单链抗体rScFv-W13B1。; 骆群潘纪春于洋林周; 关键词：单链抗体原核表达纯化

计算机辅助设计可溶性BLyS受体,eBCMA-Fc融合蛋白及其在大肠杆菌中的表达(英文)被引量：3: 2008年; B细胞成熟抗原(BCMA)是B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的受体之一.它的胞外区与人IgG1Fc的融合蛋白eBCMA-Fc,又称为诱饵受体,具有拮抗BLyS的活性.为了设计新的拮抗肽,基于BCMA和Fc的晶体结构,通过计算机图形学技术、分子模拟方法,建立了eBCMA-Fc融合蛋白的三维理论结构.利用均方根位移(root mean square distance,RMSD)对eBCMA-Fc融合蛋白与单体eBCMA、Fc构象差异进行分析.融合蛋白eBCMA-Fc中的eBCMA段与单体eBCMA的主链碳原子间RMSD值为0.036nm,Fc段与单体Fc的主链碳原子间RMSD值为0.064nm.结果表明,对比单体,融合蛋白eBCMA-Fc并未因eBCMA与Fc直接连接而发生构象的变化.分子对接方法显示,融合蛋白eBCMA-Fc中的BCMA与BLyS作用,而Fc扮演着稳定BCMA构象的支架作用.为进一步验证上述理论分析,构建eBCMA-Fc融合基因,并将载有eBCMA-Fc融合基因的原核表达质粒转化BL21(DE3)菌、在细菌中表达.目的蛋白经蛋白A亲和柱纯化大约为36kD,与理论预测值34kD相近.免疫印迹表明抗人IgG抗体能够识别eBCMA-Fc融合蛋白.ELISA证实,eBCMA-Fc融合蛋白能够结合BLyS.随着eBCMA-Fc融合蛋白增加,结合BLyS的融合蛋白也相应增加.而对照人IgG,即使在高浓度条件下,也不结合BLyS.此外,eBCMA-Fc融合蛋白能够抑制BLyS对B细胞肿瘤Daudi细胞的作用.这些研究为下一步设计和筛选BLyS拮抗肽提供了实验基础.; 孙剑冯建男林周黎燕沈倍奋; 关键词：分子对接自身免疫性疾病

林周

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