段舒怡
- 作品数：11 被引量：29H指数：4
- 供职机构：南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定
- 本文采用差速离心,半饱和硫酸氨沉淀和蔗糖密度梯度离心法提纯O型口蹄疫病毒,将纯化的病毒免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法3次克隆,获得了2株稳定分泌O型口蹄疫单克隆...
- 段舒怡姜平李玉峰马苏杜以军杨晓伟
- 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 6株O型口蹄疫病毒VP1及3A基因克隆与序列分析
- 本研究设计合成了针对VP1和3A基因特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得6个口蹄疫病毒分离株完整VP1和3A基因,测序结果分析表明,6个分离株的VP1基因全长639bp,编码213个氨基酸,与国内外发表的O型毒株VP...
- 杨晓伟姜平杜以军李玉峰段舒怡
- 关键词：FMDVVP1基因
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- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体研制
- 目的:研制猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的单克隆抗体(McAb).方法:将GP5基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,利用构建成的重组真核质粒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSVGP5蛋白单抗.建立间...
- 马苏姜平段舒怡李玉峰
- 关键词：PRRSVGP5蛋白质粒单克隆抗体中和抗体
- 文献传递
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定
- 采用差速离心,半饱和硫酸氨沉淀和蔗糖密度梯度离心法提纯O型口蹄疫病毒,将纯化的病毒免疫Balb／c小鼠,取脾细胞与SP2,0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法3次克隆,获得了2 株稳定分泌O型口蹄疫单克隆抗...
- 段舒怡姜平李玉峰马苏杜以军杨晓伟
- 关键词：O型口蹄疫病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 口蹄疫快速检测方法的建立
- 张常印姜平唐泰山李玉峰王凯民李永东陈国强王先炜姜焱杜以军张敬友杨晓伟柯家法段舒怡
- 建立了口蹄疫通用的口蹄疫病毒实时荧光定量RT-PCR方法、口蹄疫病毒套式RT-PCR方法、O型口蹄疫病毒RT-PCR方法、单抗竞争ELISA方法。所建立的检测方法适用于目前我国出入境检疫实验室，建立的检测方法准确、灵敏，...
- 关键词：
- 关键词：口蹄疫RT-PCR方法口蹄疫病毒
- DNA免疫法研制抗猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白中和性单克隆抗体被引量：7
- 2006年
- 目的：研制抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体（McAb），以期获得中和性单克隆抗体。方法：将PRRSVM蛋白的基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1，利用构建成的重组真核质粒免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSVM蛋白的单抗，建立间接ELISA方法筛选阳性克隆。利用试剂盒检测Ig亚类。通过免疫印迹（Western blot）、间接免疫荧光试验（IFA）鉴定McAb的特异性。间接ELISA和病毒中和试验检测杂交瘤细胞上清McAb效价和腹水McAb效价。结果：获得3株可分泌特异性抗PRRSVM蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A7、4G3、51：3。1A7和4G3的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清效价为1：54～1：1024，腹水效价为1：3200～1：10240。同时用Western blot、IFA检测，结果均是阳性。4G3和1AT相对亲和力不同，证明其识别不同抗原位点。1AT和4G3具有病毒中和活性，中和效价达到1：96。结论：获得2株特异性抗PRRSVM蛋白的中和性单抗，为PRRSV诊断和免疫预防研究奠定了重要基础。
- 马苏姜平李玉峰段舒怡
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体M蛋白质粒中和抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体的制备与免疫学特性测定被引量：4
- 2008年
- 利用重组真核质粒pcDNA3-GP5免疫BALB／c小鼠，取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0融合，经间接ELISA筛选和3次有限稀释法克隆，得到3株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株，分别命名为4C9、5D10、5F12，其中5D10的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液抗体的效价为1：64～1：1024，腹水的效价为1：3200～1：10240，IFA和IPMA的检测结果均为阳性。Western-blot检测证明，这3株McAb均针对PRRSV的GP5蛋白。中和试验表明，5D10和5F12具有病毒中和活性，中和效价分别为1：40和1：80。5D10相对亲和力大于5F12，3株细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体，表明抗GP5蛋白中和性McAb制备成功。
- 马苏戴建君李玉峰段舒怡姜平
- 关键词：GP5蛋白单克隆抗体中和抗体
- 6株O型口蹄疫病毒VP1及3A基因克隆与序列分析
- 本研究设计合成了针对VP1和3A基因特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得6个口蹄疲病毒分离株完整VP1和3A基因,测序结果分析表明,6个分离株的VPI基因全长639bp,编码213个氨基酸, 与国内外发表的O型毒株V...
- 杨晓伟姜平杜以军李玉峰段舒怡
- 关键词：FMDVVP1基因
- 文献传递
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定被引量：9
- 2007年
- 目的为了获得针对O型口蹄疫病毒的单克隆抗体,本研究采用差速离心、半饱和硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心法提纯O型口蹄疫病毒液,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和SP2/0细胞融合,经ELISA方法筛选和3次亚克隆后获得2株稳定分泌表达的杂交瘤细胞株2C8和5G10,腹水抗体效价分别达到1∶6 400和1∶25 600。经亚类鉴定确定两株单抗均为IgM型,Western-blot、间接ELISA和IFA确定这2株单克隆抗体分别针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白不同表位,从而,为研究FMDV的生物学特性和建立快速诊断方法的建立奠定了基础。
- 段舒怡姜平李玉峰马苏杜以军杨晓伟
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性分析被引量：9
- 2007年
- 分别用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和纯化的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体（McAb）。用纯化的PRRSV免疫小鼠，经细胞融合获得2株可分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为4B8、4D8。用重组N蛋白免疫的小鼠，经细胞融合获得3株可分泌特异性McAb的抗PRRSV N蛋白的杂交瘤细胞2F3、4D5、5D11。间接ELISA检测4D8、4B8、4D5和5D11杂交瘤上清效价为1∶32～1∶512，而2F3的腹水效价为1∶12 800。单抗2F3、4B8和4D8与纯化病毒的Western blotting反应都为阳性，而4D5和5D11为阴性。IFA检测结果5株单抗都有明显的荧光，与PRRSV呈阳性反应。2F3的Ig亚型为IgM。5株单抗杂交瘤细胞连续传代至20代，分泌相应McAb的效价基本一致。本研究为PRRSV生物学诊断和方法研究提供有用工具。
- 马苏李玉峰段舒怡姜平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体
