王飞
- 作品数：4 被引量：38H指数：4
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的分离培养与鉴定被引量：16
- 2007年
- 目的建立人神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的体外分离、培养体系，观察其分化现象，鉴定其特异性标志物，为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法将26例脑肿瘤手术中取出的脑肿瘤细胞，以2×10^5／ml的密度接种于含生长因子的无血清培养基培养，使其中的脑肿瘤干细胞增殖，并进行单克隆形成实验及溴脱氧尿苷掺入实验；然后将增殖形成的脑肿瘤干细胞球接种于无生长因子的含血清培养基诱导分化；利用免疫荧光和免疫组化法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养和组织切片中CD133和巢蛋白的表达。结果各类肿瘤标本中仅有少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮生长，并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球，传代后脑肿瘤干细胞保持很强的自我更新和增殖能力；在含血清培养基中脑肿瘤干细胞贴壁分化；体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物CD133和巢蛋白，在肿瘤组织切片中存在CD133阳性细胞，其阳性表达率为（21．0±6．2）％～（38．0±7．0）％。结论人神经上皮来源脑肿瘤组织中存在少量具有自我更新和增殖能力、表达CD133和巢蛋白的脑肿瘤干细胞，并能在体外将其分离、培养和诱导分化；脑肿瘤干细胞有可能成为脑肿瘤基础研究的新平台和临床治疗的重要靶细胞。
- 方加胜邓永文李茗初陈风华王延金卢明方芳伍军杨转移周向阳王飞陈诚
- 关键词：肿瘤干细胞
- 脑胶质瘤和正常脑组织中MGMT、LRP和TopoⅡα的表达及其意义被引量：8
- 2008年
- 【目的】探讨脑胶质瘤和正常脑组织中三种耐药酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、肺癌耐药相关蛋白(LRP)、拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)的表达及其意义。【方法】利用两步法免疫组织化学技术检测MGMT、LRP、TopoⅡα三种耐药酶在脑胶质瘤和正常脑组织的表达。【结果】三种耐药酶在正常脑组织中几乎不表达;在脑胶质瘤中表达强度与患者的性别、年龄和肿瘤的大小无关(P>0.01),但与肿瘤的WHO分级明显相关(P<0.01)。WHO分级越高,表达越强。【结论】胶质瘤的发生与三种耐药酶的表达改变有关;联合测定多种耐药酶的表达对判定肿瘤的恶性程度与制定化疗方案有参考价值;纠正耐药蛋白的表达有可能成为胶质瘤基因治疗的新策略。
- 杨转移邓永文方加胜刘国平刘凌峰吴雷陈若琨王飞
- 关键词：DNA拓扑异构酶类
- 自体脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠脑内的作用被引量：12
- 2008年
- 目的：脂肪干细胞来源于成脂细胞,取材容易,已经成为干细胞研究一个新的方向。观察脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠的脑组织局部组织学变化以及神经行为学变化。方法：实验于2006-01/2007-08在中南大学湘雅医院神经病学实验室完成。①实验材料：SD大鼠,雌雄不限,体质量300g左右,由中南大学湘雅医学院动物学部提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：体外培养并传代SD大鼠脂肪干细胞,并用BrdU标记。制作大鼠的脑冷冻伤模型,实验组在冷冻伤动物脑内移植脂肪干细胞,对照组在冷冻伤动物脑内移植培养基,假手术组仅行颅骨开窗,每组15只。③实验评估：分别在移植细胞后1,3,5,7,14,30d对实验动物进行NSS神经行为学评分,并制作脑组织切片,行免疫荧光染色检测BrdU阳性细胞。采用Tunel染色检测凋亡细胞,脑组织RT-PCR检测血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子mRNA表达。结果：①与对照组相比,实验组大鼠在3-14dNSS神经行为学评分降低（P〈0.05）。②免疫荧光检测显示,Brdu标记的脂肪干细胞在大鼠脑组织内存活并且迁移。③Tunel法检测显示,3d后实验组凋亡细胞数目明显少于其他组。④RT-PCR检测显示,与其他两组比较,移植脂肪干细胞的大鼠脑组织中血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子表达更高。结论：脂肪干细胞可以在中枢神经系统中存活,并分化为神经元样细胞,它可以引起血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子的高表达从而减少细胞凋亡,加速神经功能修复过程并达到保护脑组织的目的。
- 周向阳邓永文方芳王飞陈若琨宋涛方加胜
- 关键词：脂肪干细胞脑冷冻伤神经行为学
- 大鼠脂肪干细胞的培养及向神经细胞的定向分化被引量：6
- 2010年
- 目的从大鼠脂肪组织中分离出脂肪干细胞(ADSC),并通过体外培养观察其在形态、生长方式以及贴壁率、生长曲线等方面的生物学特征,以及其向神经细胞方向分化的能力。方法取SD大鼠的腹股沟和腹膜后脂肪,分离体外培养ADSC,观察形态并进行传代。取第3代细胞测定其贴壁率、MTT比色法描绘生长曲线,免疫荧光法鉴定干细胞标志物CD44。通过两步诱导法诱导ADSC向神经细胞方向分化,免疫荧光法检测分化后细胞NSE、GFAP的表达情况。在分化过程中,用免疫组化检测Nestin的动态变化,验证ADSC分化与神经干细胞的关系。结果从大鼠的脂肪组织中可成功提取ADSC,在含血清培养中能够连续传代并稳定增殖,而且ADSCs强烈表达CD44。经诱导剂诱导后,大部分ADSC分化表达NSE,而未见GFAP的表达。分化过程中,Nestin表达水平经统计学分析后呈逐渐下降趋势。结论ADSC具有强大的扩增能力和定向分化为神经元的生物学特性,分化后在形态、表型同时体现出了显著变化,可以成为治疗神经系统损伤、退行性疾病的较为理想的成体干细胞。
- 周向阳邓永文方芳王飞宋涛方加胜
- 关键词：基质干细胞成体干细胞神经元分化
