程乾
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：徐州医学院医学影像学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 热休克蛋白65与βhCG多表位融合蛋白疫苗的抗黑色素瘤研究被引量：2
- 2015年
- 选取HSP65-X10-βhCGCTP37融合蛋白作为免疫原,观察其对小鼠黑色素瘤B16-F10的体内抑制作用,以及对荷瘤小鼠生存期的影响,并对其抗肿瘤的作用机理进行初步探讨。以制备的HSP65-X10-βhCGCTP37蛋白免疫C57BL/6J小鼠,2 w免疫1次,共4次。第4次免疫后的第2 w,进行肿瘤攻击实验。HSP65-X10-βhCGCTP37激发的免疫应答对于小鼠黑色素瘤的攻击起到了有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,实验组小鼠的平均肿瘤重量显著降低(P<0.05);并有效延长了荷瘤鼠的生存期;小鼠的黑色素移植瘤的肿瘤病理切片结果显示,疫苗对肿瘤细胞的体内生长有明显的抑制作用,核分裂减少,淋巴细胞浸润增加,有灶性坏死。HSP65-X10-βhCGCTP37蛋白疫苗能有效地抑制小鼠黑色素瘤的生长。
- 杨洁程乾陆峥李曼曼袁玉婷曹荣月
- 关键词：热休克蛋白65蛋白疫苗黑色素瘤
- 抗βhCG多表位融合蛋白疫苗治疗实验小鼠黑色素瘤的机制研究
- 2015年
- 以融合蛋白HSP65-X10-βh CGCTP37作为免疫原,免疫荷瘤小鼠和未荷瘤小鼠,观察其对小鼠黑色素瘤B16-F10的体内治疗作用,以及其对肿瘤在体内的血管增生及肺转移的影响,并对其体内抗肿瘤的作用机理进行初步探讨。结果显示,HSP65-X10-βh CGCTP37的治疗对于小鼠黑色素瘤的攻击起到了有效的保护作用,与PBS对照组比较,实验组小鼠的平均瘤重显著降低(P<0.05);有效抑制了肿瘤细胞的血管增生和肺转移;免疫后小鼠的血清中产生了特异性的高滴度抗体。说明HSP65-X10-βh CGCTP37蛋白疫苗能够激发小鼠的有效免疫应答、抑制黑色素瘤的血管增生和转移,从而抑制肿瘤的生长。
- 杨洁柳祖辉程乾李曼曼袁玉婷苗梓韬李慧忠金亮曹荣月
- 关键词：热休克蛋白65蛋白疫苗黑色素瘤血管增生
- 表达抗G250人源性抗体腺病毒对肾癌细胞的影响
- 2013年
- 目的检测腺病毒Ad-G250表达的G250全长人源性抗体的生物学活性及其对肾癌细胞的影响。方法扩增纯化腺病毒Ad—G250、Ad—EGFP（对照病毒）。病毒感染LO-2细胞，ELISA法检测细胞培养液中抗体的表达量。收集病毒感染后的细胞上清液进行纯化，Westernblotting检测纯化抗体的相对分子质量及其与细胞表面G250抗原的结合能力。免疫组化法检测Ad—G250表达的抗体是否具有生物学活性。CCK-8法检测Ad—G250对肾癌Ketr-3及ACHN细胞增殖的影响。AnnexinV—PE／7-AAD法检测Ad—G250对‘肾癌Ketr-3及ACHN细胞凋亡的影响。结果病毒Ad—G250感染LO-2细胞后G250抗体的表达量随着感染天数的增加而增加。Westernblotting实验显示Ad—G250能够表达G250抗体的轻链和重链，电泳图上该抗体能使G250抗原阳性的Ketr-3和786-O细胞在相对分子质量58×10’附近出现反应条带，而G250抗原阴性的ACHN和HK-2细胞在相应位置无反应条带。细胞免疫组化实验显示Ketr-3细胞膜被染成棕黄色，而ACHN细胞未见着色。CCK-8实验结果显示，Ad—G250对Ketr-3细胞有抑制作用，而对ACHN细胞的抑制作用不明显；Ad—G250抑制Ketr-3细胞增殖存在浓度及时问依赖性。凋亡实验显示，Ad—G250诱导Ketr-3细胞凋亡作用和ACHN细胞相比差异具有统计学意义，Ad—G250诱导Kert-3凋亡作用和Ad—EGFP相比差异有统计学意义。结论腺病毒Ad—G250成功表达出具有生物学活性的人源性G250抗体，且Ad—G250可抑制表达G250抗原的肾癌细胞增殖，诱导其凋亡。
- 方琳程乾李望刘俊杰郑骏年
- 关键词：G250放射免疫显像
- 表达抗G250人源性抗体增殖缺陷型腺病毒的构建
- 2013年
- 目的构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。方法通过重叠延伸PCR、常规PCR方法，分别获得G250重链的可变区和恒定区（GH）eDNA序列及G250轻链（GL）eDNA序列，并克隆至pCLON12-IRES载体上，构建质粒pCLON12-GL-IRES—GH。酶切质粒pCLON12-GL—IRES—GH回收GL—IRES—GH片段，克隆至腺病毒载体pDC315，构建pDC315-GL—IRES—GH（pDC315-G250）。将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，重组包装表达G250抗体的增殖缺陷型腺病毒AdDC315一G250。纯化病毒表达的G250抗体，免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合。结果PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLON12-GL—IRES—GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250。PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的基因，病毒包装成功。免疫印迹实验结果显示，纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的条带。结论成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。
- 方琳程乾李望刘俊杰郑骏年
- 关键词：肾肿瘤G250抗体重组腺病毒
- 银杏叶提取物、卡托普利、缬沙坦单独用药及联合用药对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞的保护作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究卡托普利、缬沙坦及中药银杏叶提取物(Ginkgo bilobaextract,GBE)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)的影响,探讨三者单独应用及中西药联合应用时的异同,从而为GBE与卡托普利或缬沙坦联合应用提供理论基础。方法体外培养HBZY-1大鼠MC,分为9组(每组n=3):①正常对照(NC)组;②甘露醇(MA)组;③高糖(HG)组;④溶媒(DMSO)组;⑤GBE组;⑥卡托普利(Cap)组;⑦缬沙坦(Val)组;⑧GBE和卡托普利联合用药(GC)组;⑨GBE和缬沙坦联合用药(GV)组。可见光分光光度法测定胞质超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化指标的水平,RT-PCR法测定细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的相对含量。结果GBE、卡托普利、缬沙坦以及联合用药均可提高高糖环境中MC的抗氧化能力,且联合用药组的作用更强;GBE、卡托普利、缬沙坦以及联合用药均可抑制高糖诱导的TGF-β1mRNA水平上调,联合用药组作用较强。结论中西药联合应用时对大鼠MC的细胞保护作用优于单独用药。
- 程乾沈永芹谷雨翟云鹏赵九洲印晓星鲁茜
- 关键词：肾小球系膜细胞银杏叶提取物卡托普利
- 银杏叶提取物、卡托普利、缬沙坦单用及合用对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖肥大的影响被引量：4
- 2010年
- 目的研究卡托普利、缬沙坦及中药银杏叶提取物(GBE)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖肥大的影响,探讨三者单用及合用时的异同。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞(MC),分为正常(NS)组、甘露醇(MA)组、高糖(HG)组、溶媒(DMSO)组、GBE组、卡托普利(Cap)组、缬沙坦(Val)组以及GBE和卡托普利联合用药(GC)组、GBE和缬沙坦联合用药(GV)组。流式细胞仪测定细胞周期,MTT法检测细胞增殖变化情况。结果对高糖引起的细胞肥大,GBE单用、GBE联合Cap、GBE联合Val均可有效逆转,而Cap和Val单用时无此作用;对高糖诱导的细胞增殖,Cap、Val单用以及GBE联合Cap、GBE联合Val均可使其逆转,但GBE对其无明显影响。结论银杏叶提取物和卡托普利、缬沙坦联合应用时对大鼠MC的细胞保护作用更优。
- 翟云鹏庞训雷程乾刘丽华金幼红鲁茜印晓星
- 关键词：肾小球系膜细胞细胞肥大细胞增殖银杏叶提取物卡托普利
- 表达红荧光蛋白的重组痘苗病毒的包装与鉴定
- 2015年
- 目的包装并鉴定表达红荧光蛋白（RFP）基因的重组痘苗病毒（VV—RFP）。方法以质粒pDsRed-express—C1为模板，PCR扩增出RFP基因，并克隆至痘苗病毒转移载体pCB中，经酶切分析和DNA测序鉴定正确，得到阳性重组质粒pCB—RFP。将该重组质粒用脂质体转染293细胞后再用野生型痘苗病毒感染，通过同源重组获得重组痘苗病毒，利用RFP和gpt抗性标志筛选和噬斑纯化获得重组痘苗病毒VV—RFP。结果成功包装出表达RFP基因的重组痘苗病毒。结论包装的VV—RFP为进一步构建携带特定治疗基因的重组痘苗病毒奠定了基础。
- 沈百庆程乾罗砚曦阎辉郑骏年
- 关键词：痘苗病毒同源重组
- PinX1基因过表达对神经胶质瘤细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的：探讨PinX1基因过表达对神经胶质瘤细胞株增殖的影响及其分子作用机制。方法利用pEG-FP－C3－PinX1过表达质粒和pEGFP－C3对照组质粒，分别转染神经胶质瘤U87和U251细胞，CCK8细胞增殖实验分析PinX1过表达后对2种神经胶质瘤细胞增殖的影响，流式细胞仪分析2种神经胶质瘤细胞周期的变化， Western blot检测PinX1蛋白c、yclin 家族蛋白、CDK抑制剂蛋白及人端粒酶逆转录酶（ hTERT）的表达水平。结果转染pEGFP－C3－PinX1过表达质粒可以有效增加神经胶质瘤U87和U251细胞中PinX1蛋白的表达，PinX1过表达后抑制细胞的增殖，PinX1过表达后下调hTERT的表达，提高 p27的表达，降低cyclin D1和cyclin E的表达，使细胞周期停滞在G1期。结论 pEGFP－C3－PinX1过表达质粒可以有效地提高神经胶质瘤U87和U251细胞中PinX1的表达，PinX1过表达后可能通过影响cyclins、CDK抑制剂蛋白以及hTERT的表达从而使细胞周期停滞在G1期，最终显著抑制神经胶质瘤细胞的增殖。
- 杜颖李中林程乾曹梦函梅鹏金白津郑骏年
- 关键词：神经胶质瘤增殖人端粒酶逆转录酶
- 生物联合手术治疗肾癌远期疗效的Meta分析
- 2016年
- 目的：系统评价生物联合手术治疗肾癌的远期疗效。方法：利用计算机检索万方数据库、维普期刊资源整合服务平台、中国知网期刊数据库、中国生物医学文献数据库,检索年限均为建库至2014年12月。按照Cochrane系统评价手册,对纳入文献的方法学质量进行评价,然后提取并整理数据,采用RevMan5.3统计软件进行Meta分析。结果：共纳入9个随机对照临床试验,包括1 281例患者。Meta分析结果显示：与单纯手术治疗组相比,生物治疗联合手术治疗能提高肾癌患者的3年生存率（78.91%vs 61.54%,OR=2.15,95%CI：1.57-2.93,P〈0.001）和5年生存率（82.20%vs 66.98%,OR=2.21,95%CI：1.55-3.13,P〈0.001）,但并不影响肾癌患者的1年生存率（97.18%vs 93.98%,OR=2.22,95%CI：0.93-5.27,P=0.07）。结论：生物治疗联合手术治疗能明显提高肾癌患者的远期疗效。
- 郭毛毛邱慧程乾毛红森姚宏郑骏年
- 关键词：肾细胞癌生物治疗META分析
- 表达翻转重组酶的真核载体的构建
- 2012年
- 目的构建表达翻转重组酶（FLP）重组表达的真核载体。方法以质粒pFRT为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出两端包含了Xbal和BamHI内切酶识别位点的全长FLP基因片段，将该片段插入用NheI和BamHI双酶切后的载体质粒pBK—CMV上，构建出重组质粒pBK—CMV—FLP。经过转化、挑选菌落，PCR鉴定且测序均正确。结果成功构建重组质粒pBK—CMV—FLP。结论构建好的pBK—CMV—FLP质粒为生物工程上删除筛选标记物提供了良好的条件。
- 程乾房有荣邓琳阎辉郑骏年
- 关键词：真核载体
