胡小邦
- 作品数：13 被引量：48H指数：4
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- “全国媒介生物学与控制高级研讨班”简报
- 2004年
- 胡小邦
- 关键词：媒介生物学疾病控制高级研讨班寄生虫学
- 视蛋白基因的克隆及其与抗药性/耐药性关系的研究
- 长期以来，大范围和不加选择地使用杀虫剂导致了媒介抗药性的发生和发展。发现和研究新的抗药性相关基因将有助于阐明抗药性的分子基础和寻找新的治理抗药性的靶标。
本研究根据本实验室已经获得的淡色库蚊NYD-OP7～7基...
- 胡小邦
- 关键词：淡色库蚊昆虫抗药性溴氰菊酯基因转染细胞存活率耐药性
- 淡色库蚊CYP6F1基因的克隆及表达差异的鉴定被引量：5
- 2008年
- 目的克隆淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因并进行表达差异的鉴定。方法采用RT-PCR技术和RACE策略,从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系Ⅳ龄幼虫中克隆细胞色素P450基因(CYP6F1),用相应的软件进行生物信息学分析,并用实时定量PCR和RT-PCR技术分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定。结果成功克隆出CYP6F1基因,基因全长1639bp,开放阅读框为1527bp,编码508个氨基酸(GenBank登录号:AY662654)。序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因(CYP6F1)有99%的同源性,并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征,一个膜锚定信号、两个还原酶结合位点、一个的典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等。实时定量PCR和半定量RT-PCR结果表明,CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系,且CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。结论CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关,并且在各个发育阶段有不同的表达。
- 公茂庆刘波胡小邦孙艳李秀兰马磊朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊细胞色素P450RT-PCR基因克隆
- 蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cD NA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/chy,经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊细胞C6/36,通过G418选择培养,建立转染细胞系;用RT PCR、Westernblotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达。结果成功构建了真核表达载体pIE13/chy,证明糜蛋白酶基因已转入C6/36细胞,建立了稳定转染细胞系,表达产物分子质量单位约30ku,与理论值相符。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础。
- 顾燕公茂庆胡小邦孙艳马磊李秀兰朱昌亮
- 关键词：抗药性基因转染C6/36细胞
- 外源性双链RNA在蚊虫细胞中介导的基因沉默(英文)被引量：1
- 2004年
- 目的 近年来 ,双链RNA介导的基因沉默 (RNA干扰 )已在许多动植物中发现 ,并成为研究基因功能的强有力的工具。为确定蚊虫细胞中是否有RNA干扰现象 ,以期为利用RNAi效应消除蚊虫抗药性研究奠定基础。 方法 设计 5′端带T7启动子的绿色荧光蛋白 (GFP)及糜蛋白酶特异性引物 ,PCR扩增目的基因获得 5′端带有T7启动子DNA片段 ,体外转录成单链RNA ,退火后形成双链RNA。转染带有GFP基因的昆虫细胞表达载体 pAct .GFP和双链RNA进入C6/ 3 6蚊虫细胞 ,72h后收集细胞 ,用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达差异 ,用半定量RT PCR检测GFP的mRNA的表达水平。 结果 转染糜蛋白酶基因双链RNA和 pAct .GFP质粒的细胞及仅转染pAct .GFP的细胞的GFP表达水平没有明显差异 ;转染GFP基因的双链RNA和pAct .GFP质粒的细胞的GFP表达水平显著下降 ,达 40 %～ 5 0 % ,GFP的mRNA的表达水平也相应下降了 60 %。 结论在蚊虫细胞内 ,双链RNA能特异性的抑制相应的同源性基因的表达 ,引起基因沉默 。
- 公茂庆顾燕马磊李秀兰胡小邦孙艳孙立新孙静钱瑾朱昌亮
- 关键词：白纹伊蚊RNA干扰基因沉默C6/36细胞
- 新的蚊抗药性基因研究
- 朱昌亮马磊孙艳张东辉沈波李秀兰公茂庆孙立新胡小邦杨庆贵
- 1992年以来，本项目在15项国家及部、省级项目资助下，在病媒昆虫（简称“媒介”）对杀虫剂（农药）的抗性基因克隆、鉴定与应用等方面取得了如下成果。 1. 高纯抗性品系模型的建立 率先选育、建立了淡色库蚊对溴氰菊酯高纯抗性...
- 关键词：
- 关键词：抗药性基因
- 用荧光半定量RT-PCR检测蚊溴氰菊酯抗性被引量：4
- 2005年
- 目的:建立蚊对菊酯类杀虫剂抗性的PCR检测方法。方法:应用荧光半定量RT鄄PCR,检测经SSH结合cDNA芯片分离鉴定的淡色库蚊对溴氰菊酯抗性相关基因NYD鄄Tr在抗性品系与敏感品系中的表达水平。结果:经荧光半定量RT鄄PCR检测,NYD鄄Tr进入指数期的循环数抗性品系早于敏感品系,抗性品系组比敏感品系组先进入指数增长期。结论:以NYD鄄Tr作为靶基因,荧光半定量RT鄄PCR可区分淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系与敏感品系,亦即可检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。
- 马磊沈波李秀兰胡小邦朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性溴氰菊酯
- 昆虫抗药性机制研究进展被引量：24
- 2004年
- 长期以来 ,喷洒杀虫剂是人们控制虫媒病的主要方法。随着杀虫剂的广泛使用 ,昆虫对杀虫剂的抗药性也日益普遍 ,已引起人们越来越多的重视。
- 胡小邦朱昌亮
- 关键词：昆虫抗药性机制基因
- 淡色库蚊抗药性相关基因——NYD-MLC2基因的克隆与分析被引量：5
- 2006年
- 目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增NYD-MLC2基因3′、5′端,经对位拼接获得全长序列,并进行生物信息学分析;荧光定量PCR验证此基因在抗性和敏感品系的表达差异。结果:获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列,开放阅读框为630bp(GenBank/NCBIDQ140391),编码210个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-MLC2与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)一个未知功能的蛋白同源性最高,为91%;实时荧光定量PCR结果显示,NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因cDNA全长序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗药性相关,值得进一步研究。
- 钱瑾孙静孙立新孙艳胡小邦马磊朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性RACE定量PCR
- 淡色库蚊抗性相关基因——NYD-GBE基因的克隆与分析被引量：2
- 2006年
- 目的:获取淡色库蚊抗药性相关NYD-GBE基因cDNA全长序列并验证其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗性相关NYD-GBE基因片段设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增糖原分支酶基因5′、3′端,经对位拼接获得全长序列,并用相应的软件进行生物信息学分析。结果:获得淡色库蚊NYD-GBEcDNA全长序列,开放阅读框为2070bp(GeneBank/NCBIDQ102393),编码689个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-GBE与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)和拟暗果蝇(Drosophilapseudoobscura)一个未知功能的蛋白同源性最高,为82%和72%,与人糖原分支酶的基因同源性次之为60%。荧光定量PCR结果显示,NYD-GBE在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的19.7倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-GBE基因全长cDNA序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-GBE与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关,值得进一步研究。
- 孙静钱瑾孙立新胡小邦孙艳马磊朱昌亮
- 关键词：淡色库蚊抗药性RACE克隆定量PCR
