舒朝忠
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 以gfp为报告基因的肺炎链球菌启动子诱捕文库的构建与分析被引量：2
- 2008年
- 首先构建一个以gfp(green fluorescence protein)为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP,将肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200bp^800bp)克隆到该质粒gfp基因上游的多克隆位点,得到约58000个含有肺炎链球菌基因组DNA随机酶切片段的重组子,提取质粒即为质粒库,该库大约覆盖肺炎链球菌基因组全长的5倍,插入率达到90%以上,且有较强的随机性,质量较高。将该质粒库转化入肺炎链球菌TIGR4菌株,带有随机片段的报告质粒通过同源重组的方式将gfp基因融合于细菌染色体上该随机片段之后,利用质粒的抗生素抗性基因筛选出重组菌株,从而构建出相应的菌株库,共获得包含约500000个肺炎链球菌转化子的菌株库,经体内、外实验表明,其包含插入了S.pn体内、外表达基因片段的细菌,可以报告特定条件下的基因表达,并可通过流式细胞仪识别、分选。该文库的构建为进一步利用差异荧光诱导技术筛选肺炎链球菌体内诱导基因奠定了基础。
- 胥文春赵清孟江萍单幼兰李南舒朝忠朱新华尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌绿色荧光蛋白
- 生物医学仪器及其实用技术课程建设被引量：2
- 2008年
- 通过生物医学仪器及其实用技术课程的建设与实践,探讨该课程开设的必要性、课程组织、实践效果与改进思路,为进一步提高研究生的科研能力和加强实验室的技术队伍建设与仪器设备管理提供保障。
- 刘北忠谢鹏舒朝忠朱旦王虹阳强
- 关键词：生物医学仪器课程建设研究生培养实验室建设与管理
- 二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测临床标本结核分枝杆菌DNA被引量：2
- 2007年
- 目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧光定量PCR方法为基础,对43例结核确诊患者的标本及11例非肺结核患者的痰标本进行检测,并与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)进行比较。结果二聚体蝎型探针荧光定量PCR能快速准确的检测临床标本中的TB-DNA。其标准品浓度在102～106copies/μl时,方法能够保持良好的线性关系(相关系数为0.9994),阳性检出率(100%)显著高于抗酸染色法(16.28%)和培养法(37.21%)的检出率,与MTD试验的检出率(100%)一致。MTD试验检测时间约4～5h,而二聚体蝎型探针FQ-PCR检测约需80min即可得到检测结果,检测费用仅为MTD的1/4。结论二聚体蝎型探针荧光定量PCR用于临床标本结核分枝杆菌DNA的检测具有快速价廉、敏感特异的特点,该方法作为定量检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径值得临床推广应用。
- 王虹钟敏舒朝忠陈淑惠尹一兵
- 关键词：结核分枝杆菌荧光定量PCR
- RNA干扰MAD2基因对细胞增殖的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨MAD2对HepG2细胞周期的影响。方法:构建针对MAD2基因的shRNA表达载体,MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒pmad2-EGFP共转染HepG2细胞株,用Western印迹法检测shRNA的抑制效应;用MTT法测定细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期。结果:shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制MAD2绿色荧光融合蛋白的表达。HepG2细胞转染有效干扰质粒48h后,细胞增殖抑制率达65%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论:在细胞水平,可通过RNA干扰特异性抑制MAD2基因来抑制细胞的增殖,为研究MAD2基因在细胞增殖中的作用机制奠定基础。
- 施琼王箭舒朝忠翁亚光王应雄徐远久蒋洪彦刘子杰刘青松蔡燕
- 关键词：MAD2基因RNA干扰细胞增殖
- 实时逆转录PCR被引量：9
- 2001年
- 实时RT PCR是一种新技术 ,它利用荧光实时检测PCR反应 ,灵敏度高、特异性好、节约时间。本文对分子灯塔、DNA结合染色、杂交探针和水解探针四种方法的原理、特点作了简要的介绍。并比较了三种可供选择的仪器 ,即ABIPrism770 0、Lightcycler和BioradiCycler各自的特点。使用特定的仪器、选择不同的实时RT PCR策略 ,可以将实时RT PCR应用于绝对定量、检测点突变和等位基因、mRNA结合变量 ,并可通过优化设计 ,实现多重RT
- 舒朝忠罗进勇尹一兵康格非
- 关键词：逆转录PCR
